蜂毒肽表达克隆的初步构建

（1）目的 构建重组蜂毒肽的原核表达克隆。（2）方法 人工合成含特异性酶切位点的A,B两条寡核苷酸片段,在Klenow酶作用下形成目的基因,用限制性内切酶HindⅢ,XmnI同时酶切目的基因和表达载体Pmal-p2质粒,在T4连接酶的作用下构建两者的重组体,通过α-互补筛选出阳性克隆,并通过特异性酶切和测序分析进行鉴定。（3）结果 筛选出的阳性克隆为重组的蜂毒肽表达克隆。（4）结论 用分子生物学的方法重组构建的蜂毒肽基因表达克隆,是蜂毒肽蛋白表达及活性鉴定的基础。     

蜂毒肽对新生大鼠心肌细胞Na+,K+-ATP酶基因表达的影响

目的观察蜂毒肽对新生大鼠培养心肌细胞Na+,K+-ATP酶a1和β1亚基mRNA的表达.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术.药物与培养的心肌细胞温育1h后,观察蜂毒肽对Na+,K+-ATP酶基因表达的影响.用GAPDHmRNA作为内参照.结果蜂毒肽对α1亚基mRNA表达有显著促进作用.经GAPDH校正,光密度值对照组为0.47±0.14(n=5),蜂毒肽0.01mmol/L组为0.66±0.10(n=6,P＜0.05),哇巴因1mmol/L组为0.67±0.09(n=6,P＜0.05).蜂毒肽0.01mmo1/L组和哇巴因1mmol/L组对Na+,K+-ATP酶β1亚基mRNA表达无显著影响.结论蜂毒肽0.01mmol/L对Na+,K+-ATP酶α1亚基mRNA表达有促进作用,但对β1亚基mRNA的表达无促进作用.     

蜂毒肽的药理学及纳米运载系统研究进展

蜂毒肽（MEL）是蜂毒的主要成分，对癌症等疾病的治疗有独特的优势，然而由于MEL具有较强的毒副作用，其药物研发及临床应用一直受到阻碍。近年来药理学研究表明，MEL除具有较强的细胞膜表面活性和溶血活性外，还具有较好的生物活性和药理作用，包括抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤、抗纤维化等作用。此外，在MEL的给药系统方面也采取了多种策略，如改进MEL及其共轭物、采用纳米运载工具等。兹就MEL的药理学及纳米运载系统的研究进展进行综述，以期为今后MEL的研究提供参考。     

蜂毒肽对豚鼠心室肌细胞钾电流和动作电位的影响(英文)

目的:研究蜂毒肽(Melittin,Mel)对豚鼠心室肌细胞钾电流和动作电位的影响.方法:全细胞膜片箝记录.结果:蜂毒肽可呈浓度依赖性促进延迟整流钾电流(I_k),在测定电压为40 mv时,0.05,0.1,0.2μmol·L~(-1)蜂毒肽分别使I_k从(295±109)增大到(371±142)(n=5 P<0.05),(467±180)(n=5,P<0.05),(552±248)pA(n=5,P<0.05).但药物在三个浓度时对内向整流钾电流(I_(k1))均无显著影响.蜂毒肽0.05,0.1,0.2 μmol·L~(-1)分别使动作电位APD_(50)由(520±55)减小到(459±91)(n=5,P>0.05),(385±102)(n=5,P<0.01),(281±81)ms(n=5,P<0.01),使APD_(90)由(613±96)减小到(536±93)(n=5,P>0.05),(467±96)(n=5,P<0.01),(354±95)ms(n=5,P<0.01).结论:蜂毒肽促进延迟整流钾电流,缩短动作电位时程.     

蜂毒肽对口腔鳞癌细胞的增殖及迁移能力的影响

目的 探讨蜂毒肽对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞系Scc-15、Tca8113、Cal-27增殖性、迁移性的影响及其作用机制.方法 以用四种不同浓度梯度(2、4、8、16 μg/ml)的蜂毒肽分别处理的OSCC细胞系为蜂毒肽组,以不含药的培养液处理的细胞系为对照组.采用MTT实验检测蜂毒肽对OSCC细胞系Scc-15...     

蜂毒肽药理作用的研究进展

蜂毒肽是蜂毒的重要组成部分,具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗菌和抗辐射等多种药理作用.近年来,关于蜂毒肽药理作用及其作用机制的研究众多.本文综述了蜂毒肽的药理学作用及其作用机制,为今后对蜂毒肽进行深入研究提供参考.     

一种新型肝癌免疫毒素的表达、纯化及初步鉴定

从噬菌体随机肽库中筛选获得了与肝癌细胞特异性结合的12-肽A54,将其与蜂毒肽(melittin,Mel)编码基因连接后,插入质粒载体pET-32a(+)中,构建成A54-Mel与硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)及六聚组氨酸(6×His)的融合表达载体pET32-A54-Mel。将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达后,获得可溶性表达产物,经Western blot鉴定,表达产物能与蜂毒肽特异性抗体反应。表达菌经超声裂解后,上清液用Ni+离子亲和层析法纯化得到了融合蛋白(Trx-A54-Mel),经肠激酶裂解、再次Ni+离子亲和层析后得到纯度大于95%的肝癌特异性免疫毒素A54-Mel。经细胞ELISA和四氮唑盐(MTT)法检测,发现A54-Mel在体外具有一定的肿瘤细胞特异性靶向及杀伤活性,为新型免疫毒素在肝癌靶向治疗中的研究奠定了基础。     

蜂毒肽抗炎作用及机制的研究进展

炎症是一种普遍现象,由先天性和获得性免疫系统触发,以维持体内稳态.这种现象通常会起到限制感染和修复损伤的作用,但是如果没有适当地分阶段进行,炎症可能会导致免疫功能异常.蜂毒是蜜蜂用来防护的毒素,数百年来,它已在东方用作抗炎药,用于治疗慢性炎性疾病.目前,越来越多的学者致力于蜂毒的主要成分蜂毒肽抗炎作用的研究,为其临床应...     

去唾液酸糖蛋白受体单链抗体靶向蜂毒肽的体外抑瘤效应研究

目的探讨抗去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)单链抗体C1与蜂毒肽(Melittin)重组蛋白C1M靶向抑制肝癌细胞的效果。方法将含C1M/pGC的XL1-Blue转化菌通过IPTG诱导表达。表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫组织化学技术分析重组蛋白C1M的抗原结合能力,四氮唑盐(MTT)法检测C1M对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用。结果原核表达质粒C1M/pGC在XL1-Blue中获得有效表达;表达产物以可溶性形式存在;纯化的C1M相对分子量为29.4×103;免疫组化结果表明C1M能有效识别去唾液酸糖蛋白受体,与HepG2(C1M)共培养3d,细胞生长抑制率达92.0%。结论在大肠埃希菌中成功表达C1M,位于C端的Melittin蜂毒肽能有效抑制肿瘤细胞的生长,为体内研究Melittin的靶向抗肝癌效果奠定了基础。