MHC-I 类抗原产生系统─免疫性多功能蛋白酶体

适应性免疫系统的标志是快速而有效地识别“自我”与“非我”成分，从而选择性地消除“非我”成分。在该系统中，表达抗原特异性受体的Ｔ细胞起着中心作用。但Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）只能识别结合到ＭＨＣ（Ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｃｏｍｐｌｅｘ，主要组织相容性复合物）分子上的多肽片段（抗原性肽），即ＭＨＣ－Ⅰ类分子将来源于胞内蛋白的肽提呈给ＣＴＬ（细胞毒性Ｔ淋巴细胞），而ＭＨＣ－Ⅱ类分子则将产生于核小体的肽提呈给辅助性Ｔ细细胞。ＭＨＣ－Ⅰ类分子表达广泛，含有定位于膜上的重链和　β２－微球蛋…     

26S蛋白酶体LMP2亚基参与调节血管内皮细胞对氧化应激的耐受性形成

目的: 观察在氧化应激耐受及氧化应激损伤的血管内皮细胞(VECs) 26S蛋白酶体LMP2亚基的表达变化情况,并评价26S蛋白酶体LMP2亚基在调节VECs对氧化应激耐受性中的可能作用。方法: 建立H₂O₂诱导氧化应激损伤及氧化应激预处理VECs模型;采用细胞免疫荧光标记联合Western blotting法检测26S蛋白酶体LMP2的表达;采用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染LMP2反义/正义寡核苷酸;检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及丙二醛(MDA)的含量。结果: H₂O₂可剂量及时间依赖性地诱导VECs氧化应激损伤,培养上清中MDA浓度及LDH活性明显增加;H₂O₂(10 μmol/L, 24 h)预处理可诱导26S蛋白酶体LMP2亚基的高表达及细胞对H₂O₂ (500 μmol/L, 3 h)诱导氧化应激的耐受,培养上清中MDA浓度及LDH活性明显减少;与H₂O₂ (500 μmol/L, 3 h)处理组比较,采用干扰素γ(IFN-γ,20 μg/L, 48 h)可诱导VECs 26S蛋白酶体LMP2亚基高表达,也可诱导VECs对H₂O₂的耐受,其培养上清中MDA浓度及LDH活性明显降低,而转染LMP2-反义寡核苷酸可抑制IFN-γ诱导的培养上皮细胞26S蛋白酶体LMP2亚基高表达并阻断细胞对H₂O₂ (500 μmol/L, 3 h)的耐受。结论: 26S蛋白酶体LMP2亚基参与VECs对氧化应激耐受性的形成。     

酒精性肝病大鼠蛋白酶体LMP7亚基表达及其与氧应激的关系

目的研究大鼠酒精性肝病模型中蛋白酶体的活性中心LMP7亚基与氧应激严重程度的关系。方法采用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性脂肪肝模型,并分为2组,一组继续给予酒精灌胃,造成酒精性肝炎模型;另一组给予等量的生理盐水灌胃,4周后处死,HE染色观察肝脏病理变化,血清和肝匀浆测定MDA含量,实时荧光定量PCR测定肝脏组织中LMP7亚基mRNA的表达情况,Western杂交测定LMP7亚基蛋白含量。结果血清MDA水平,对照组为0.64±0.16,脂肪肝组为1.32±0.19,肝炎组为1.56±0.1,盐水组为1.23±0.26。肝组织MDA含量,对照组为5.43±0.14,脂肪肝组为12.18±0.78,肝炎组为14.0±0.5,盐水组为10.4±0.6。LMP7亚基mRNA表达水平,和对照组相比,酒精性脂肪肝组为对照组的36%,盐水组为对照组的51%,肝炎组为对照组的26%,这与肝脏病理学表现病变严重程度一致。Western杂交结果对照组为0.50±0.01;脂肪肝组为0.39±0.02,肝炎组为0.30±0.04,盐水组为0.38±0.02。结论蛋白酶体LMP7亚基mRNA的表达及蛋白的含量在酒精性肝病组是下降的,且其下降程度与酒精性肝病氧应激的严重程度有关,提示蛋白酶体LMP7亚基是延缓酒精性肝病氧应激发生的保护因素之一。     

蛋白酶体抑制剂诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及对Notch 1和NF-κB表达的影响

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）的发生、发展与骨髓微环境关系密切，有多种信号通路参与。Notch信号是造血微环境调节造血细胞增殖分化的重要信号通路，其中Notch1与血液肿瘤的发生、发展较为密切。骨髓瘤是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤，后者与肿瘤细胞的发生和转移、增殖和凋亡、耐药相关。已证实NF—KB2家族是Notch信号通路的一个靶基因。蛋白酶体抑制剂Bortezomib已获美国FDA批准用于治疗难治及复发多发性骨髓瘤，但其诱导骨髓瘤细胞凋亡的机制尚未完全明确。本研究探讨bortezomib诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和对Notch1、NF-κB表达水平的影响，采用透射电子显微镜检、流式细胞术及原位缺口末端标记技术观察药物对MM细胞凋亡的影响．用RT—PCR法和免疫荧光细胞化学染色分析分别检测细胞凋亡时Notch1及NF—κB的表达情况。结果表明：RPM18226细胞高表达Notch1和NF—κB；随着bortezomib作用浓度的增高，RPM18226细胞出现典型的凋亡改变，Notch1的表达逐渐降低，NF-κB在胞核表达减少，胞浆表达增多。这种改变在浓度升高到一定数值时与对照相比具有显著性差异（P〈0．05）。结论：bortezomib治疗多发性骨髓瘤机制中有Notch1和NF—κB两条通路的参与．二者可能存在一定的联系，提示Notch1信号可能作为MM治疗的潜在靶点，为相关新药的研发提供一定实验基础。     

蛋白酶体抑制剂对多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞迁移能力及其肝细胞生长因子表达的影响

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓间充质干细胞(MSC)迁移能力及其肝细胞生长因子(HGF)基因表达水平的影响。应用Transwell模型观察MM患者骨髓MSC经2.5 nmol/L硼替佐米处理前后的体外迁移能力,实时定量PCR检测MSC的HGF mRNA的表达水平。结果表明,经2.5 nmol/L的硼替佐米作用48小时后,MSC的迁移能力明显低于对照组,并且HGF mRNA在MSC的表达与对照组相比也明显降低,两者结果均具有统计学意义(p<0.05)。结论:硼替佐米可抑制MM患者骨髓MSC的迁移,同时可下调其趋化相关因子HGF的表达。     

硼替佐米治疗浆细胞白血病及多发性骨髓瘤

硼替佐米(Bortezomib,商品名万珂)作为一个以蛋白酶体为靶标的癌症用药,已获准用于治疗多发Z性骨髓瘤患者.它通过抑制26S蛋白酶体20S催化中心的活性,选择性地抑制体内某些具有重要调控作用的蛋白质的降解,使细胞分裂停止在G2～M期,导致细胞发生凋亡.     

万珂治疗多发性骨髓瘤10例护理

多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）多见于中老年人群，是以骨髓浆细胞克隆性增生为特点的血液系统常见的恶性肿瘤。绝大多数患者在病程中接受数种治疗方案，但疗效和病情缓解维持时间会慢慢下降，对进一步治疗产生耐药。万珂是一种蛋白酶体可逆抑制剂，能特异性抑制哺乳动物细胞中26s蛋白酶体的糜蛋白酶样活性，导致肿瘤细胞的死亡，抑制肿瘤生长，是治疗多发性骨髓瘤新的突破。2007年1～12月我科应用万珂治疗10例多发性骨髓瘤患者，并对其进行认真地观察和护理，疗效较好，现将护理体会总结如下。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在SH-SY5Y细胞中的表达

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在SH-SY5Y细胞中的表达及其与泛素表达的定位关系。方法:采用不同浓度的MG-132蛋白酶体抑制剂(0、0.5、1、2.5和5μmol/L)处理体外培养人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞。处理24 h后,采用In-cell Western法和Western Blot法检测SH-SY5Y细胞中CD147蛋白的表达,采用免疫荧光双标法检测CD147和泛素的共表达。结果:不同浓度的MG-132蛋白酶体抑制剂处理SH-SY5Y细胞,CD147蛋白的含量呈浓度依赖性增加。当抑制剂浓度为5μmol/L时,CD147的含量明显高于抑制剂浓度为0μmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。SH-SY5Y细胞中同时存在CD147和泛素的表达,而且存在共表达部位。结论:CD147可能通过泛素-蛋白酶体途径降解。     

烧伤早期大鼠骨骼肌组织泛素转录表达的变化研究

目的：研究烧伤后大鼠骨骼肌组织泛素－蛋白毒体（ubiquitin-proteasome)蛋白降解途径组成成分中泛素表达的变化,探讨烧伤后骨骼肌蛋白降解的增强与泛素－蛋白酶体蛋白降解途径表达变化间的关系。方法：借助烫伤大鼠动物模型,利用骨骼肌离体孵育系统,应用氨基酸自动分析仪测定孵育液和骨骼肌组织中酪氨酸（Tyr)和3－甲基组氨酸（3－MH）量的变化,用RNA印迹技术（Northern blot)方法测定骨骼肌组织中泛素mRNA表达水平。结果：烧伤后大鼠骨骼肌释放Tyr和3－MH增多,以3－MH增加显著;烧伤后骨骼肌组织中泛素－2．4kb的mRNA表达上调明显。泛素mRNA表达增加量与Tyr和3－MH增加量间均呈显著正相关。结论：烧伤后大鼠骨骼肌蛋白降解明显增强,其机制与泛素－蛋白酶体蛋白降解途径在转录水平被激活密切相关。     

MG-132抑制大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡

目的观察蛋白酶体抑制剂MG-132对急性缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型,治疗组及治疗对照组于再灌注前5min静脉注射MG-132(0.75mg/kg),缺血再灌注组及假手术组注射生理盐水,观察各组心肌组织炎症细胞浸润及心肌细胞凋亡情况。结果MG-132能显著抑制心肌梗死周围组织嗜中性粒细胞的浸润;与缺血再灌注组相比,治疗组核因子κBmRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.05);治疗组再灌注2h、6h及24h亚组凋亡指数较缺血再灌注组同时间点显著下降;与缺血再灌注组相比,Bax的积分光密度值降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平明显上调,Bcl-2/Bax比值显著增加。结论蛋白酶体抑制剂能够抑制急性缺血再灌注心肌的凋亡,具有心肌保护作用。