采用MDA-MB-231细胞膜进行表皮生长因子受体活性的检测

目的　探讨能否直接利用肿瘤细胞膜进行表皮生长因子受体 (Epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)催化活性检测。方法　首先筛选出EGFR基因表达水平相对较高的细胞株MDA MB 2 31,通过差速离心制备细胞膜 ,采用Westernblotting检测EGFR催化磷酸化的程度。结果　底物被磷酸化 ,加入特异性拮抗剂AG14 78后 ,磷酸化被抑制。结论　利用肿瘤细胞膜检测EGFR活性的设想是成立的 ,并且其方法简便、经济。     

针刺对多囊卵巢综合征大鼠卵巢TGF-α、EGFR表达的影响

目的:研究针刺对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢转化生长因子α(TGF-α)、表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,探讨针刺促排卵的作用机制。方法:24日龄雌性大鼠颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)的油溶液制作(PCOS)模型,对照组同期皮下注射油剂。PCOS大鼠随机分为模型组和针刺组。模型组不作处理,针刺组大鼠从80日龄起针刺关元、中极、双侧三阴交、双侧子宫穴,1次/天,15min/次,连续6周。治疗结束后各组大鼠断头处死,迅速取血并分离血清,-20℃冰箱保存,待测性激素水平。摘取双侧卵巢,称重,4%多聚甲醛固定,作HE染色和免疫组织化学染色。结果:与模型组相比,针刺组卵巢湿重、卵巢TGF-α、EGFR表达及血清睾酮(T)、雌二醇(E2)水平均显著降低(P<0.01),而卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、孕酮(P4)水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺能显著降低PCOS大鼠卵巢TGF-α及EGFR的表达,抑制TGF-α对卵巢和激素合成的作用,改善PCOS大鼠多囊样变和高雄激素血症,促进排卵。     

急性丙型肝炎患者免疫状况的研究

用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及ＬＤＨ释法，对１６例急性输血后丙型肝炎（抗－ＨＣＶ、ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性）患者，分别进行外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的Ｔ细胞亚群计数、Ｔ４／Ｔ８比值、Ｔａｃ受体的检测及血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）ＮＫ细胞活性的测定。并与正常人组比较，经ｔ检验发现，急性丙型肝炎患者的Ｔ４亚群所占百分比、Ｔ４／Ｔ８比值及ＰＢＭＣＴａｃ受体表达均明显低于正常人组（Ｐ＜０．０５），而ＮＫ细胞活性、血清ｓＩＬ－２Ｒ明显高于正常人组（Ｐ＜０．０５）。患者的这些免疫状态改变，可能对其发病机理的研究有一定意义。     

血管紧张素Ⅱ受体在大鼠肝星状细胞上的表达

目的: 了解血管紧张素Ⅱ的I_a亚型受体(AT_1a)在大鼠肝星状细胞中的表达情况。方法: 大鼠肝脏经链霉蛋白酶和Ⅳ型胶原酶循环灌注后, 以11% Nycodenz密度梯度离心, 分离获得肝星状细胞。提取肝星状细胞的总核糖核苷酸(RNA), 以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术和PCR产物测序方法检测AT_1a表达。结果: 采用RT-PCR技术检测到大鼠肝星状细胞有AT_1a mRNA表达, 且PCR产物的测序结果与GenBank上AT_1a cDNA序列有94%的一致性。结论: AT_1a mRNA在大鼠肝星状细胞上表达, 从而又为探索肝纤维化的发生机制提供了有力的依据。     

培养大鼠皮层神经元NMDA受体蛋白单分子原子力显微镜定位研究

为在纳米尺度对 NMDA受体蛋白分子进行神经细胞膜表面原位定位和探讨原子力显微镜在生物单分子操纵和调控中的应用 ,本研究应用原子力显微镜分别对分布在云母表面的膜 NMDA受体蛋白分子标记物抗 NMDAR1Ig G-葡萄球菌蛋白 A-胶体金复合物分子和结合标记物分子后的神经元膜进行扫描 ,三维形貌测定 ,通过颗粒度分析结果 ,明确标记物分子的特征性三维形貌 ,对比确定经过免疫胶体金结合后的 NMDA受体蛋白单分子在神经元膜表面的定位。结果显示 ,空白云母表面标记物分子为分散均匀的平均粒径为 49nm的球形颗粒 ,在神经元膜表面结合 NMDA目的受体蛋白分子后 ,免疫复合物分子呈现出粒径为 5 3 nm的散在分布球形或短棒状颗粒 ,长径约为宽径的 2倍 ,长轴截面可见典型的双峰三维结构。上述结果表明 ,NMDA受体蛋白单分子可以结合 1个或 1个以上的胶体金标记物分子 ;原子力显微镜可以在纳米尺度对神经元膜 NMDA受体蛋白进行标记和其免疫复合物的三维形貌测定。胶体金颗粒标记 ,原子力显微镜测定是免疫细胞化学新方法。     

激活素受体样激酶1促进人脐静脉内皮细胞增殖和迁徙

目的： 研究激活素受体样激酶1（ALK1）对人脐静脉内皮细胞的作用。 方法： 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），RT-PCR分析ALK1和ALK5在HUVEC激活状态下表达的变化。脂质体转染pcDNA3.1+ALK1到HUVECs，流式细胞仪检测HUVECs增殖的改变，boyden小室检测ALK1对HUVECs迁徙的影响。 结果： ALK1在HUVEC安静状态高表达，ALK1能促进HUVECs的增殖和迁徙。 结论： ALK1通过促进内皮细胞的增殖和迁徙在血管重塑中发挥作用。     

心房颤动时心房肌细胞L型Ca2+通道与肌浆网间Ca2+信号转导的探讨

目的：探讨房颤时心房肌细胞膜上L型Ca2+通道与肌浆网之间的Ca2+信号转导。 方法： 杂种犬10条，随机分为正常对照组和单纯房颤组。房颤组用起搏器行右心房快速起搏（500±20）次/分，术后观测24周。正常对照组不植入起搏器。胶原酶Ⅱ型分离心房肌细胞，用激光共聚焦显微镜检测L型Ca2+ 通道对细胞内Ca2+浓度变化的影响；L型Ca2+通道与肌浆网三磷酸肌醇受体（IP3R）和兰尼碱受体（RyR）之间的Ca2+信号转导。 结果： （1）L型Ca2+通道与肌浆网IP3R之间的Ca2+信号转导：正常对照组、单纯房颤组的心房肌细胞在用mibefradil和丁卡因分别阻滞T型Ca2+通道和RyR后给予细胞膜激动剂时，细胞内Ca2+浓度均升高（分别为1.4000±0.0776和1.5169±0.4414），组间比较无显著差异（P＞0.05）；（2）L型Ca2+通道与肌浆网RyR之间的Ca2+信号转导：正常对照组的心房肌细胞在用mibefradil和肝素分别阻滞T型Ca2+通道和IP3R后给予细胞膜激动剂时，细胞内Ca2+浓度升高（1.5576±0.1989），单纯房颤组的细胞内Ca2+浓度也升高（1.5372±0.2952），两组间比较无显著差异（P＞0.05）。 结论： 房颤时L型Ca2+通道与RyR和IP3R之间可能存在信号转导，但其可能在房颤时的细胞内Ca2+超载及异常Ca2+信号转导方面不起重要作用。     

抗β1-肾上腺素受体自身抗体对在体大鼠心肌细胞的致凋亡作用

目的：观察抗β1-肾上腺素受体（β1-AR）自身抗体对在体大鼠心肌细胞的致凋亡作用,并探讨其可能的信号转导通路,以阐明该抗体参与心衰发生发展的病理机制。方法：用β1-AR细胞外第二环合成肽段免疫抗β1-AR自身抗体阴性大鼠（9周）,定期检测大鼠的血清抗β1-AR自身抗体滴度、心功能、心肌组织凋亡现象和caspase-3,8,9活性。结果：（1）免疫组大鼠的血清抗β1-AR自身抗体滴度逐渐升高并维持于高水平[1∶（1280±0.07）];对照组始终在1∶10左右;（2）TUNEL和琼脂糖凝胶电泳显示免疫组大鼠在免疫3、4、5周心肌组织发生明显凋亡,caspase-3,8活性增高,免疫7、9周心功能明显下降,对照组未见异常。结论：抗β1-AR自身抗体可能通过激活死亡受体途径促进在体大鼠的心肌细胞发生凋亡,最终引起心功能下降。     

丁丙诺啡用于静脉PCA的疗效观察

丁丙诺啡是混合型的阿片受体激动-拮抗剂,对μ受体有部分激动作用.丁丙诺啡的镇痛效应强,镇痛作用时间持久,呼吸抑制和成瘾性发生率较低[1].目前术后镇痛以硬膜外给药为主.我们将丁诺啡试用于干静脉PCA(PCIA),取得满意效果.     

呼吸道合胞病毒感染中性粒细胞Toll样受体-4表达及其功能

目的:观察呼吸道合胞病毒(RSV)感染中性粒细胞Toll样受体- 4(TLR4)的表达及对炎症介质产生的影响, 探讨地塞米松(DEX)干预对RSV感染后中性粒细胞TLR4表达及炎症介质的作用.方法:RSV感染中性粒细胞, 流式细胞术(FCM)检测中性粒细胞TLR4表达及代表中性粒细胞呼吸爆发功能的过氧化氢(H2O2), ELISA检测中性粒细胞培养上清的IL-6和IL-8水平, 并观察阻断TLR4信号通路及DEX干预对RSV感染中性粒细胞功能的影响.结果:(1) RSV感染中性粒细胞TLR4表达增加;RSV感染中性粒细胞IL-6的产生增加, 阻断TLR4信号传导, RSV感染组IL-6产生减少 (阻断组IL-6:391.307±43.45 ng/L;RSV感染组IL-6:466.03±36.478 ng/L;对照组IL-6:21.205±15.059 ng/L);RSV感染中性粒细胞IL-8和H2O2的产生均明显增加, 阻断TLR4信号传导对IL-8和H2O2的产生没有影响.(2)DEX下调RSV感染后中性粒细胞TLR4表达, 减少RSV感染的中性粒细胞产生IL-6、 IL-8和H2O2的产生;阻断TLR4, 与DEX协同抑制RSV感染中性粒细胞IL-6的产生, 逆转DEX对RSV感染中性粒细胞H2O2产生的抑制作用.结论:TLR4信号通路在RSV感染后中性粒细胞炎症介质产生及呼吸爆发功能中起重要作用;阻断TLR4信号通路和DEX联合作用可能成为临床治疗的新靶点.