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目的在构建好的肽核酸压电基因传感器检测系统上引入“RecA蛋白互补单链DNA探针”复合体作为新型生物信号放大系统,提高传感器的检测灵敏度。方法压电基因传感器阵列表面先固定上乙肝病毒(HBV)的bisPNA探针,加入HBV基因组DNA与之反应完全后,加入“RecA蛋白互补单链DNA探针”与bisPNA/dsDNA复合物反应。首先分别优化RecA蛋白及ATPγS的浓度,再观察最佳条件下传感器检测系统的频率下降值和反应时间。结果当RecA蛋白浓度为3mg/ml,ATPγS浓度为12.5μmol/L时,所引起的频率下降值最明显。最佳条件下所引起的频率改变为(112.2±12.7)Hz。结论在检测系统中加入“RecA蛋白互补单链DNA探针”复合体,可有效地提高压电基因传感器的检测灵敏度。 相似文献
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肽核酸(PNA)是第三代反义和反基因药物的代表。它是具有类多肽骨架的DNA类似物,在生物环境中非常稳定,与互补RNA和DNA有高度亲和性。PNA的细胞传递较差,限制了其作为基因表达调控剂的发展。目前已发展多种PNA的细胞传递方法,包括微注射法、电致孔、与DNA共转染、与脂溶性基团结合、与肽结合等。PNA在DNA细胞传递中有协同作用。 相似文献
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肽核酸是一种核酸类似物 ,为电中性 ,不易被核酸酶和蛋白酶降解 ,能以高亲和性、高特异性与DNA或RNA杂交形成稳定的双螺旋和三螺旋结构。肽核酸在疾病的基因诊断、反义药物的开发、基因表达与调控、基因序列及结构分析中有广泛的应用价值 ,对生命起源研究也有重要启示 相似文献
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目的 筛选出能与多重耐药鲍曼不动杆菌gyrA基因的mRNA紧密结合的反义肽核酸序列,评估其体外抗菌活性.方法 利用Mfold、RNA Structure 4.6两种计算机软件对多重耐药鲍曼不动杆菌gyrA基因的mRNA进行二级结构分析计算,根据最低自由能原则在其mRNA局部杂交松弛区设计反义寡核苷酸,与体外转录的地高辛标记的gyrAmRNA进行斑点杂交,根据杂交信号的强弱筛选出与gyrA mRNA紧密结合的反义寡核苷酸,根据其序列合成肽核酸(pep-tide nucleic acid,PNA),另加设1条与靶序列有6个碱基错配的PNA作为阴性对照,2条PNA分别连接穿膜肽形成肽-肽核酸(peptide-PNA,PPNA).测定经不同浓度PPNA处理的细菌光密度[D(600)]值并进行平板菌落计数,观察其对细菌生长的抑制作用,采用RT-PCR检测gyrA mRNA的表达水平.结果 斑点杂交结果显示,计算机软件设计的10条反义寡核苷酸探针中有5条与gyrA mRNA显示出杂交信号,其中1条信号最强,能够与gyrA mRNA稳定结合,将其以肽-肽核酸的形式合成处理细菌,结果表明其在5 μmol/L浓度可完全抑制gyrA mRNA的表达,并抑制鲍曼不动杆菌的生长,在10μmol/L浓度具有杀菌活性,而具有错配碱基的PPNA对细菌生长无明显抑制作用.结论计算机辅助设计联合斑点杂交可在体外模拟体内环境对寡核苷酸与靶基因结合的有效性进行验证,实现在体外高通量筛选高效反义序列.经筛选得到的靶向gyrA基因反义肽-肽核酸可在体外高效抑制多重耐药鲍曼不动杆菌生长. 相似文献
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目的 检测内镜超声引导下细针穿刺穿刺物中K-ras基因的突变,探讨其对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集27例胰腺癌、9例其他恶性肿瘤及14例良性胰腺占位患者的细针穿刺物,应用肽核酸(PNA)钳制PCR法检测K-ras突变.结果 胰腺癌患者K-ras突变阳性率为88.9%,其他恶性肿瘤为44.4%,良性胰腺占位为35.7%,胰腺癌与其他两种病变差异显著(P=0.013,P=0.001).胰腺癌与其他恶性肿瘤比较,K-ras基因突变的敏感性、特异性、阳性预测率、阴性预测率、准确率分别为88.9%、55.6%、85.7%、62.5%、80.6%,差异显著(P=0.013);与良性胰腺占位病变比较,分别为88.9%、64.3%、82.8%、75.0%、80.5%,差异亦显著(P=0.001).联合穿刺物细胞学检查和K-ras基因突变检测,胰腺癌的阳性率高达96.3%.结论 胰腺组织穿刺物的K-ras基因突变检测可提高胰腺癌诊断的阳性率. 相似文献
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肽核酸(PNA)是DNA模拟物,能与DNA和RNA以序列特异性方式结合,在基因研究和基因治疗方面有广泛的应用前景。为了优化肽核酸的性质(如水溶性、对细胞的透膜能力、杂交专一性),许多骨架修饰的PNA被合成出来。该文综述了近年来肽核酸单体骨架修饰的合成研究进展。指出设计新型的PNA结构是改良PNA性能、拓宽DNA应用的主要途径。 相似文献
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端粒酶是维持端粒长度的逆转录酶,对细胞增殖、衰老及永生化和癌变起重要作用,在多数肿瘤中表达增高。以端粒酶为靶点的反义寡核苷酸、核肽酸及锤头状核酶已成为潜在的肿瘤抑制剂。现就这方面的研究进展作一综述。 相似文献
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目的 筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响.方法 针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜肽连接的肽-肽核酸序列.分别用不同浓度的肽-肽核酸导入铜绿假单胞菌生物被膜模式菌PAO1中,测定不同时相点细菌生长光密度[D(600)]值并进行菌落计数,观察肽-肽核酸对其生长的抑制作用.利用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜形成情况.qPCR方法检测lasR mRNA表达.结果 斑点杂交实验结果显示:4条反义寡核苷酸序列中3条有杂交信号产生,其中第1条序列信号最强,以此为基础合成反义肽核酸.不同浓度的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌表现出不同程度的体外抗菌活性,且随着浓度增加,抗菌活性增强.结论 有效筛选出高效反义核苷酸序列,经筛选出的靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸对铜绿假单胞菌的生长及生物被膜形成能力有明显抑制作用,同时抑制lasR mRNA的表达. 相似文献