2种不同类型的核酸探针对压电基因传感器阵列检测特异性的影响

目的探讨用PNA作为探针与普通的DNA探针相比对压电传感器基因杂交的优越性.方法用生物素-亲和素法分别将PNA、DNA两种探针固定在基因传感器的金膜表面,分别与完全匹配、1个碱基错配、2个碱基错配的互补靶序列进行杂交,观察2种不同的探针与靶序列反应所引起的频率变化及所用的时间.结果相对于DNA探针,PNA探针识别碱基错配的能力明显高,且杂交时间更短.结论 PNA与靶序列DNA结合有高度的特异性,选用PNA作探针,可提高压电基因传感器检测的特异性.     

探针浓度对肽核酸石英谐振式基因传感器阵列杂交效应的影响

目的探索不同肽核酸(PNA)探针浓度对PNA石英谐振式基因传感器阵列杂交效应的影响.方法石英谐振式基因传感器阵列表面分别固定上0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0μM的bis-PNA探针后,观察其固定以及与相应的HBV靶序列杂交时频率的下降值及反应所需的时间.结果探针固定引起的频率变化值先升而后趋于平缓,而与HBV靶序列杂交所引起的频率变化值却是先升后降,以1.5μM探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势.结论 1.5μM bis-PNA探针固定浓度最为适宜.     

外周血K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的应用

目的 检测胰腺癌患者外周血K-rag基因第12、13密码子突变,探讨其对胰腺癌的诊断价值.方法 选取经病理证实的胰腺癌患者54例以及健康志愿者33例.抽取全部实验者外周血标本,抽提循环中的DNA,应用肽核酸钳制实时定量PCR法检测K-rag基因突变,并分析其与患者临床病理参数的相关性.结果 54名胰腺癌患者中,40例(74.1%)外周血标本可检测出K-ras基因第12或13密码子突变.33名健康志愿者外周血标本无一例检出K-ras基因突变.外周血中K-ras基因的突变与患者年龄、淋巴血管侵犯、肿瘤分化程度、肿瘤临床分期、CA19-9水平有关(P＜0.05),而与患者性别、肿瘤部位、肿瘤大小及病理类型无关.结论 肽核酸钳制实时定量PCR法检测外周血K-ras基因突变的敏感性高.外周血K-ras基因突变的检出提示肿瘤具有高侵袭性,可能预后不良.     

反义核酸研究

反义核酸是上个世纪80年代出现的一种以抑制特定基因表达为目的的基因治疗药物。反义核酸类药物包括反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide)、核酶(ribozyme)、DNA核酶(DNAzyme)和肽核酸(peptide nucleic acids,PNA)。应用反义核酸药物可以特异高效的抑制特定基因的表达。     

肽核酸的研究与应用

 目的介绍肽核酸的研究与应用进展,为其进一步研究与开发提供参考。方法以国内外发表的论文为材料,对肽核酸的分子结构、理化性质、与核酸结合的特点、对基因表达的调节作用等方面的数据进行分析。结果与结论肽核酸目前已成为一类新的分子生物学研究的有力工具,在基因表达、调控PCR扩增、分子杂交、基因突变分析、端粒酶长度分析和遗传病、肿瘤、病毒感染等疾病的基因诊断与基因治疗中有广泛的应用前景。     

Syk或ZAP-70信号途径诱导脐带血CD4~+T细胞极化

目的:探讨IL-2或IL-4和基质细胞源因子(SDF)-1α协同刺激下,脐带血CD4+T细胞极化的作用及其与非受体型蛋白质酪氨酸激酶的关系。方法:流式细胞术、实时定量RT-PCR检测IL-2或IL-4和SDF-1α协同刺激下,CD4+T细胞中胞内Th1型和Th2型细胞因子的表达;免疫复合物激酶分析法和免疫印迹法检测Th细胞极化过程中非受体型蛋白酪氨酸激酶Syk和ZAP-70的磷酸化;反义肽核酸(PNA)技术探讨Syk和ZAP-70在协同刺激Th细胞极化过程中的作用。结果:L-2或IL-4和SDF-1α协同作用可通过Syk或ZAP-70磷酸化诱导CD4+T细胞极化;Syk或ZAP-70 PNA可明显阻断Syk或ZAP-70磷酸化以及CD4+T细胞极化。结论:Syk和ZAP-70磷酸化对于IL-2或IL-4和SDF-1α协同诱导CD4+T细胞极化十分重要。     

缓冲液离子浓度对新型PNA-LSAW基因传感器杂交效应的影响

目的 探讨PBS缓冲液的离子浓度对构建的肽核酸(PNA)漏声表面波(LSAw)基因传感器杂交效应的影响.方法 将1.0μmol/L的PNA探针固定在LSAW基因传感器表面,分别加入10、20、50、100mmol/L的PBS缓冲液,观察不同离子浓度的PBS缓冲液对PNA-LSAW基因传感器杂交效应的影响,记录分析传感器相位的变化值及反应所需的时间.结果 当钠离子浓度从10mmol/L增加至100mmol/L时,传感器的相位变化呈先升高后降低的趋势,以20mmol/L为分水岭.而杂交平衡时间增加显著.结论 离子浓度极大地影响了杂交反应的时间,低盐离子浓度更有利于提高PNA和靶序列的杂交速率,高盐离子浓度则会大大降低PNA的结合速率.离子浓度为20mmol/L时杂交最为适宜.     

肽核酸芯片技术初探

目的 研究解决以DNA为探针的寡核苷酸芯片特异性、重复性差等问题。方法 用肽核酸（PNA）探针制备PNA芯片，以荧光标记的寡核苷酸（ODN）及HBV DNA的PCR产物为检测对象，探讨PNA芯片的杂交条件。用PNA芯片检测HBV DNA及单碱基突变，并与DNA芯片做一对比。结果 PNA探针对单碱基突变的识别力比相应的DNA探针更强；用其检测HBV DNA，得到了与常规PCR试剂盒一致的检测结果。结论 PNA探针独特的结构决定了它在杂交中具有与靶DNA结合的稳定性高及特异性强等优点。     

肽核酸生物传感器直接检测临床标本中提取的病毒基因组DNA

目的 以肽核酸生物传感器检测系统直接检测从临床标本中提取的乙型肝炎病毒基因组DNA。方法 抽取63例临床免疫学检测证实为乙型肝炎病毒(HBV)感染者标本血清的DNA，以及15例免疫学检测全阴的标本血清中的DNA，分别用肽核酸生物传感器法以及定量PCR法检测，比较两种方法的优劣并确定传感器法的检测限。结果 传感器法检测60例标本阳性，阳性率为95．24％，而定量PCR法检测63例均为阳性；15例阴性血清两种方法检测均为阴性；传感器法的检测限为8．6pg／L；两种方法检测HBV差异无显著性，但传感器检测法所用时间更短，且无需进行探针的标记。结论 利用肽核酸生物传感器成功地绕过了PCR扩增而直接检测出了临床标本中的HBV基因组DNA。     

CPG-PNA的合成、纯化和鉴定

目的　建立肽核酸 (CPG PNA)合成、纯化、分析鉴定的方法。方法　固相肽合成标准Fmoc方法进行合成 ;中压液相层析纯化 ;反向高压液相层析进行纯度分析 ,质谱法进行分子量的鉴定。结果　经纯化 ,CPG PNA的纯度达到 95 .5 % ,分子量测定值与理论值相符。结论　合成的肽核酸与预期的一致 ,从而为后续的研究提供了物质条件