肽核酸作为反基因和反义治疗药物的研究进展

肽核酸是一类由２氨乙基甘氨酸组成的肽（聚酰胺）键的骨架替代普通核酸中核糖磷酸二酯键骨架构成的核酸类似物。ＰＮＡ与ＤＮＡ,ＲＮＡ核酸链以ｗａｓｔｏｎｃｒｉｃｋ碱基配对形成双螺旋ＰＮＡ／ＤＮＡ．ＲＮＡ,一定条件下第二分子ＰＮＡ键反平行与ＰＮＡ／ＤＮＡ（ＲＮＡ）以Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ硷基配对形成ＰＮＡ／ＤＮＡ（ＲＮＡ）ＰＮＡ三螺旋结构来抑制基因转录,由于ＰＮＡ的理化特性,除它的ＤＮＡ（ＲＮＡ）结合特性外在生物稳定性,细胞摄取,结构修饰的进展显示出作为反义反基因药物具有良好前景。     

寡核苷酸链在肿瘤反基因疗法中的运用新进展

反基因疗法是通过寡核苷酸链在dsD N A与蛋白质的结合部位形成三链结构来抑制基因的转录,达到治疗肿瘤的效果。由于天然寡核苷酸链存在易被核酸酶消化、半衰期短、稳定性差、不易透过细胞膜、以及安全性等问题,制约了反基因技术的发展。近年来研制出的硫代寡核苷酸链、肽核酸、锁核酸等修饰物使寡核苷酸链的性能得到了很大提高,为反基因疗法的临床广泛应用提供了理论和实践依据。本文就寡核苷酸链在肿瘤及基因疗法中的运用新近展作一综述。     

肽核酸的固相合成方法

肽核酸（PNA）作为一类很有发展前景的非天然的反义核酸，其高效合成是将其广泛应用的基础。本文从PNA单体的合成和PNA寡聚体的合成两方面对近几年PNA的固相合成作了系统的介绍。     

肽核酸研究的现状和未来

肽核酸是ＤＮＡ类似物,具有由氨乙基甘氨酸单位组成的假肽骨架,能以高亲和性和高生物稳定性与ＤＮＡ和ＲＮＡ特异性杂交。ＰＮＡ以链侵占方式与ＤＮＡ结合,抑制转录或提供人工强启动子促进转录;与ｍＲＮＡ结合,则阻止蛋白质的合成,此外,ＰＮＡ还能导向核糖核蛋白部分,抑制其酶活性。ＰＮＡ的其他特点如抗核酸酶和蛋白酶作用。方便而灵活的固相合成法等,使之有希望成为一个基因靶向药物。该文综述了肽核酸的化学和生物学特性     

反义肽核酸技术在临床医学中的应用研究现状

肽核酸是-核酸类似物,是核酸中的糖-磷酸主链被-合成的肽链所取代,最终形成一种非手性的、不带电荷的类似物.与核酸分子相比,肽核酸有更高的稳定性、碱基特异性.配体-受体、连接带正电荷基团如赖氨酸或精氨酸残基或核定位信号肽等可以提高肽核酸的通透性.肽核酸在分子生物学和诊断学域有广泛应用.活体外研究显示肽核酸可以抑制目的基因的转录和翻译,因此其反义形式也可应用于临床疾病的治疗.     

乙型肝炎病毒靶序列浓度对新型肽核酸压电基因传感器阵列的影响

目的探索乙型肝炎病毒(HBV)靶序列浓度值对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响.方法压电基因传感器阵列表面先固定上1.5μmol/L的bis-PNA探针,观察终浓度为1pg/L至100μg/L的HBV DNA与探针,进行杂交所引起的频率变化及反应所需时间.并对频率下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果靶序列浓度为1pg/L时,传感器未能检测出任何频率的改变.随着浓度从10 pg/L增加到100μg/L,杂交反应引起的频率下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以10μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势.在10pg/L到10μg/L的浓度范围内,浓度与频率下降值的线性回归方程为lgC=-2.7455 0.0691×△F,相关系数r=0.9923.结论随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的频率下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为10pg/L～10μg/L.     

Ki67反义肽核酸、反义寡核酸对肾癌细胞系增殖及凋亡影响的研究

 目的 探讨肿瘤增殖相关基因Ki67反义肽核酸(PNAs)、反义寡核酸(ASODNs)对人肾癌细胞增殖及凋亡的调控。寻找肾癌反义治疗的合适药物。方法 将PNAs转染人肾癌786-0细胞系，采用免疫组化、Western blot技术检测Ki67表达，细胞生长曲线，³H-thymidine掺入试验检测肾癌细胞增殖，TUNEL法检测癌细胞凋亡。并与相同浓度的ASODNs进行对比。结果 PNAs处理组(10μmol／L)786-0细胞Ki67表达阳性率(％)(16．9±0．7)降低，Ki67蛋白(％)(42．1±2．2)降低，与ASODNs处理组(28．6±0．4)(83.6±1．4)比较差异有显著性(P<0．01，P<0．01)。PNAs处理组³H-thymidine掺入率(％)(20．7±1．5)减少，与ASODNs处理组(58．6±1．4)比较差异有显著性(P<0．01)。PNAs处理组凋亡细胞阳性率(％)(28．7±2．3)增加，与ASODNs处理组(13．8±1．0)比较差异有显著性(P<0．01)。结论 PNAs可在反义及反基因二个环节发挥抗肿瘤作用，与ASODNs相比，PNAs有更强的阻抑人肾癌Ki67基因表达、增殖及促进凋亡作用，是一种有前途的基因治疗药物。     

为何美国食品和药物管理局推荐肽核酸荧光原位杂交作为快速检测脓毒症致病菌的技术?

解答：迅速、有效的抗生素治疗是降低脓毒症死亡率的关键，但当今的实验室技术需要至少24小时才能检测出血中的病原体，至少3—5天才能确定敏感抗生素。     

肽核酸钳制PCR早期检测乙型肝炎病毒YMDD耐药变异

目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR(PNA-PCR)耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方法选取rtM204(IATT)、rtM204V(GTG)突变型质粒与野生型质粒rtM204(ATG)按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性;选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率。结果 PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏度为0.001%,可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10%。85例临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9%(73/85∶YIDD∶40,YVDD∶23,YIDD+YVDD∶10),而PCR产物直接测序法检阳性率仅为40%(34/85∶YIDD∶21,YVDD∶11,YIDD+YVDD∶2)。阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种方法的特异性均较好。结论 PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有很好的应用前景。     

反义肽核酸阻断CXCR3表达延长大鼠肝脏移植物存活期

目的研究反义肽核酸（antisense peptide nucleic acid,asPNA）阻断CXC趋化因子受体3（CXCR3）表达延长大鼠肝脏移植物存活期的作用和机制,探讨asPNA技术治疗肝移植急性排斥反应（acute rejection,AR）的潜在临床价值。方法采用改良＂二袖套＂法建立大鼠原位肝移植模型。分为4组：肝移植急性排斥组,肝移植免疫抑制剂组,asPNA组,asPNA对照组。RT-PCR法检测T细胞内CXCR3-mRNA表达水平,Western-blotting免疫印迹法检测CXCR3蛋白表达水平,流式细胞仪测定外周血CD3＋T细胞表面CXCR3表达水平。AR诊断参照Banff标准。结果asPNA在体外能有效抑制T细胞内CXCR3-mRNA和CXCR3蛋白表达水平;显著延长大鼠肝脏移植物存活期;asPNA组大鼠肝移植术后第7天外周血和肝脏细胞内CXCR3的表达较AR组及asPNA对照组明显减少（P〈0.05）,与FK506组呈现出类似的趋势。结论asPNA能有效抑制T细胞内CXCR3基因和蛋白表达水平,降低大鼠AR发生率并延长肝脏移植物存活期,具有潜在临床应用价值。