肽核酸抑制HBV复制与表达的体外研究

合成肽核酸(PNA)片段,由OligofectamineTm转染至HepG2.2.15细胞与HBV各编码区保守区域相结合。用ELISA方法测定HepG2.2.15细胞中HBsAg、HBeAg滴度,PCR测定HBV DNA含量。通过计算抑制百分率,筛选有效PNA片段。结果在500 mol/L浓度下,PG3 HBsAg、HBeAg、HBV DNA表达抑制率分别为51.03%、55.38%、20.10%;PG6 HBsAg、HBeAg、HBV DNA表达抑制率分别为47.00%、43.10%、51.03%。表明PNA可由OligofectamineTm转染至HepG2.2.15细胞,从而抑制HBV的复制和抗原系统的表达。     

应用肽核酸反向杂交技术检测HBV阿德福韦耐药突变株

目的：建立一种肽核酸（peptide nucleic acid,PNA） 反向杂交技术,用于检测乙肝病毒阿德福韦酯（adefovir dipivoxil,ADV）常见耐药突变位点。方法：利用反向杂交技术,设计出特异性的PNA探针,与PCR扩增后带有生物素标记的样本进行杂交;通过对探针浓度,杂交温度和时间等条件的优化建立起最佳反应条件。应用该技术检测了临床ADV治疗慢性乙肝患者的72例血清样本,与测序法比较了其检测的准确性。结果：（1）通过共价结合能够将PNA探针固定在尼龙膜上,特异性检测ADV常见耐药突变位点。（2）与直接测序法相比,PNA反向杂交技术检测准确性为97.88％。结论：通过优化杂交反应,建立起快速、灵敏的检测乙肝病毒ADV常见耐药突变位点的PNA反向杂交技术。     

肽核酸基因传感器检测条件的摸索及优化

目的：摸索及优化肽核酸（PNA）石英谐振式基因传感器（QOGS）阵列的检测条件。方法：设计针对HBV的bis-PNA探针，将其固定在QOGS阵列表面，具体摸索了bis-PNA探针与HBV基因组DNA杂交时的最佳pH值、最佳离子浓度、最佳探针固定量。结果：杂交缓冲液pH值为6.8、离子浓度为20mmol/L、探针浓度为1.5μmol/L时杂交条件最为适宜。结论：摸索出了PNA-QOGS阵列反应时的最佳条件，为成功地构建PNA-QOGS阵列检测系统奠定了坚实的基础。     

Ki67反义多肽核酸抑制肾癌生长的体外及动物实验研究

为研究肿瘤增殖基因Ki67反义多肽核酸(AS-PNAs)对人肾癌细胞的体内外抑制作用.将AS-PNAs(10.0μmol/L)转染人肾癌786-0细胞,采用免疫组化、Western印迹技术检测Ki67表达;3H-TdR掺入试验检测细胞增殖;免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。裸鼠移植瘤内注射AS-PNAs(10.0μmol/L)连续4d后,第3、6、12天处死小鼠,取瘤组织检测肿瘤体积、Ki67表达、细胞凋亡。结果发现,AS-PNAs处理组786-0细胞Ki67表达明显降低,3H-TdR掺入率明显降低,细胞凋亡率明显增加,与随机PNAs对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。动物实验AS-PNAs处理组小鼠肿瘤体积明显缩小,Ki-67抗原表达明显降低,细胞凋亡明显增加,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01)。Ki67基囚AS-PNAs在体外及动物体内均有抑制增殖、促进凋亡作用,是一种有前途的反义治疗药物。     

肽核酸的细胞传递

肽核酸(PNA)是第三代反义和反基因药物的代表.它是具有类多肽骨架的DNA类似物,在生物环境中非常稳定,与互补RNA和DNA有高度亲和性.PNA的细胞传递较差,限制了其作为基因表达调控剂的发展.目前已发展多种PNA的细胞传递方法,包括微注射法、电致孔、与DNA共转染、与脂溶性基团结合、与肽结合等.PNA在DNA细胞传递中有协同作用.     

肽核酸抑制HBV抗原表达的研究

肽核酸(PeptideNucleicAcids,PNAs),是20世纪90年代初发现的新型DNA/RNA同类物,是一类人工合成的用蛋白质骨架代替核酸中的磷酸核糖骨架而形成的新型分子,由于它拥有诸多DNA/RNA不具有的优点,因此具有非常广泛的生物学效应。本研究的主要目的就是研究PNA片段对HBV抗原系统的抑制,从而筛选高抗原抑制率的PNA片段,为进一步研制有效的抗病毒药物提供依据。1材料和方法1.1材料HepG2.215细胞、细胞培养瓶及培养板(丹麦NUNCTM公司产品)、细胞培养箱(CO2)(德国HERAEUS公司产品)、生物倒置相差显微镜CX40(日本OLYMPUS公司产品…     

比较三种不同方式修饰的反义核苷酸对miR-125b的抑制作用

目的探讨目前常见的甲基化、锁核酸和肽核酸三种方式修饰的反义寡聚核苷酸对miR-125b的抑制作用,寻求一种高效的、特异性的miRNA表达沉默方式。方法分别合成甲基化、锁核酸和肽核酸三种方式修饰的反义寡聚核苷酸转染U87细胞,流式细胞仪分析转染效率,MTT评价细胞毒性,实时荧光定量PCR分析miR-125b表达水平。结果 48h甲基化、锁核酸、肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸使用FugeneHD转染效率无明显差异。无转染试剂共培养甲基化、锁核酸和肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸,肽核酸修饰的转染效率均显著高于甲基化、锁核酸修饰的反义寡聚核苷酸。使用FugeneHD转染的甲基化、锁核酸和肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸三者之间无明显毒性差异。锁核酸和肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸对miR-125b的抑制作用显著高于甲基化;肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸抑制能力及持续性显著高于甲基化和锁核酸修饰。结论肽核酸修饰的反义寡聚核苷酸在抑制miRNA表达能力上具有显著的高效性、安全性和持续性。     

漏声表面波传感器生物信号放大系统的研究

目的 研究利用"RecA蛋白-互补单链DNA"探针与bis-PNA/dsDNA复合物相结合,作为生物信号放大系统提高传感器检测灵敏度的可行性.方法 漏声表面波传感器检测通道金膜表面先固定针对人乳头瘤病毒(HPV)的bis-PNA探针,加入HPV基因组DNA与之完全反应后,再加入不同浓度的"RecA蛋白-互补单链DNA"探针,在反应过程中加入ATPγS提供能量,分别探索优化RecA蛋白及ATPγS的最佳反应浓度.结果 当RecA蛋白浓度为45 μg/ml,所引起的相位变化值为(11.74±1.03)°,显著高于其他浓度组(P＜0.01);在最佳RecA蛋白浓度下,当ATPγS浓度为2.5 mmol/L时,所引起的相位变化值为(10.71±0.73)°,显著高于其他ATPγS浓度组(P＜0.01).结论 "RecA蛋白-互补单链DNA"探针复合体与bis-PNA/dsDNA复合物相结合可以有效提高传感器的检测灵敏度,并明显缩短检测时间.