Bcl-2反义肽核酸诱导HL60细胞凋亡

目的　探讨不同结构的反义药物对HL6 0细胞系生物学活性的影响。方法　应用细胞计数、细胞形态观察和流式细胞术观察并比较反义肽核酸和反义寡核苷酸对白血病细胞HL6 0生物学活性的影响。结果　 10 μmol/L靶向bcl mRNA蛋白编码区的反义肽核酸能有效地抑制HL6 0细胞的生长、下调bcl 2蛋白的水平及诱导细胞凋亡。 10μmol/L同样靶点的反义肽核酸和反义寡核苷酸作用HL6 0细胞 72小时 ,细胞凋亡的百分率分别为 17.8± 1.5 3 ,13.17± 1.12 ,统计学上有显著性差异。结论　反义Bcl 肽核酸能诱导HL6 0细胞的调亡 ,比反义寡核苷酸有更好的反义作用。     

肽核酸及其应用

肽核酸是一类DNA结构类似物,是有效的反义/抗基因靶向性制剂,不被核酸酶、蛋白酶及肽酶等降解,与DNA/RNA形成的杂交体非常稳定,在抗病原体、抗肿瘤和分子杂交、PCR反应、基因分离等分子生物学领域显示出强大的应用潜力。     

反义肽核酸阻抑线粒体基因表达诱导肺癌SPC细胞凋亡的实验研究

目的:探讨以反义肽核酸(Anti-sense peptide nucleic acid,asPNA)封闭肺癌SPC-A1细胞线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)转录启动子后,对其生物学特性的影响.方法:合成针对mtDNA重链转录启动子区的asPNA,构建asPNA-三苯磷复合物并鉴定,以该复合物转染人肺腺癌SPC-A1细胞系.激光共聚焦显微镜确定该复合物的亚细胞定位,RT-PCR检测转染48h后对mtDNA编码基因转录的影响,流式细胞术评估细胞周期分布及凋亡/坏死情况,自发光荧光仪检测细胞内ATP浓度,以未转染asPNA-三苯磷复合物的肺腺癌SPC-A1细胞为对照.结果:成功获得asPNA-三苯磷复合物,激光共聚焦显微镜显示该复合物顺利进入SPC-A1细胞线粒体;同未转染组相比,转染组SPC-A1细胞mtDNA编码基因的转录水平有所下降,而细胞内ATP浓度明显降低(P＜0.01);同时,细胞周期分析显示,转染组出现明显的亚二倍体峰,而Annexin V-PI双标结果进一步证实,转染组肺癌细胞凋亡率明显增加.结论:asPNA在电子移位亲脂性阳离子-三苯磷的运载下,能够进入SPC-A1细胞线粒体并阻抑其mtDNA编码基因的转录,进而影响肺癌细胞的能量合成并诱导其凋亡.     

漏声表面波生物传感器检测系统构建时靶序列浓度的影响

目的 探讨新型的漏声表面波(LSAW)传感器检测系统构建时,人乳头状瘤病毒(HPV)靶序列浓度对其杂交效应和反应时间的影响.方法 LSAW传感器表面先固定上1.0 μmol/L的肽核酸(PNA)探针,观察终浓度为1 pg/L～1 mg/L的HPV靶序列DNA与探针进行杂交所引起的相位变化及反应所需时间,并对相位下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果 随着靶序列浓度从1 pg/L增加到1 mg/L,杂交反应引起的相位下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以100μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势;在1 pg/L～100μg/L的HPV靶序列浓度范围内,相位变化与靶序列浓度的线性回归方程为△P=2.3392 1gC+14.584,相关系数r2=0.9622.结论 随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的相位下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为:1 pg/L～100μg/L.     

肽核酸的研究与应用

肽核酸(PNA)是近年设计合成的一种不带磷酸戊糖骨架的寡核苷酸类似物。不同碱基寡聚体PNA均能与DNA和RNA的序列特异性靶位点结合,形成稳定的特殊结构,可用于不同的目的:①基因组定点切割、基因克隆与图谱分析;②基因表达调控;③基因突变检测。如果PNA能在细胞内发挥作用,将成为最理想的基因靶向药物。     

反义肽核酸下调树突状细胞CCR7基因表达及意义

肽核酸（PNA）是一种新型核酸类似物。树突状细胞（DCs）是功能最强的抗原提呈细胞，DCs从外周迁移到淋巴组织的T细胞区完成抗原递呈并激活初始T细胞。目前认为DCs向淋巴组织的迁移动力主要通过趋化因子作用于DCs趋化因子受体CCR7这条途径。我们通过反义PNA抑制体外培养的大鼠DCs CCR7的表达及趋化活性，探讨其在调节免疫反应方面的理论意义。     

离子浓度对肽核酸压电基因传感器杂交效应的影响

目的　探索不同离子浓度的PBS缓冲液对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响。方法　压电基因传感器阵列表面固定上 1 .5 μM的bis PNA探针后 ,分别观察在 1 0、2 0、5 0、1 0 0mM的PBS缓冲液环境中与相应的靶序列杂交 ,记录频率的下降值及反应所需的时间。结果　钠离子浓度从 1 0mM增加至 2 0mM时 ,杂交导致的频率下降值及平衡时间均增加 (P <0 .0 5 ) ;从 2 0mM增加至 5 0、1 0 0mM时 ,杂交导致的频率下降值各组间无显著差异 ,但杂交平衡时间却呈倍数增长。结论　离子浓度极大地影响了杂交反应的时间 ,低盐离子浓度更有利于提高bis PNA和dsDNA的杂交速率 ,高盐离子浓度则会大大降低bis PNA的结合速率。     

"RecA蛋白-互补单链DNA探针"生物信号放大系统用于压电基因传感器的研究

目的利用"RecA蛋白-互补单链DNA探针"与固定的肽核酸(bis-PNA)探针相结合,摸索最适的液相反应条件,以提高压电基因传感器基因传感表面的质量负载,从而提高传感器的灵敏度.方法基因传感器阵列固定上针对乙肝病毒的bis-PNA探针,加入靶DNA与之反应,然后加入预先处理过的不同浓度(0.5～6mg/ml)的"RecA蛋白-互补单链DNA探针".结果当RecA蛋白浓度为3mg/ml时,ATPγS浓度为12.5μM,所引起的频率变化最显著.结论在反应体系中加入"RecA蛋白-互补单链DNA探针",有效的提高了压电基因传感器的灵敏度.     

肽核酸的研究进展

肽核酸的研究进展司履生寡核苷酸（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）指人工合成的长度为十几至几十个碱基的ＤＮＡ或ＲＮＡ片段,是天然ＤＮＡ或ＲＮＡ的严格类似物,已经成为分子生物学实验室不可缺少的工具,在医学日常实践中可被用作诊断试剂,也可能用做药物,如反义...     

靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸对树突状细胞凋亡的影响

目的研究靶向趋化因子受体CCR7的反义肽核酸（PNA）对树突状细胞（DC）CCR7蛋白表达及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法体外培养大鼠骨髓来源的Dc，脂多糖（LPS）诱导成熟。设计靶向CCR7mRNA翻译起始区的反义PNA，以随机PNA和空白组为对照处理体外培养7d的未成熟Dc，脂多糖诱导48h后收集成熟Dc，免疫细胞化学染色法检测CCR7蛋白表达，流式细胞术检测细胞凋亡率，Westernblot检测磷酸化Akt和Akt蛋白表达。应用渥曼青霉素（wortmannin）抑制磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，P13K）／Akt信号通路进一步观察磷酸化Akt蛋白表达和细胞凋亡率的变化。结果反义PNA组DCCCR7蛋白表达明显低于随机PNA组和空白组，而细胞凋亡率却明显增高，差异有统计学意义（P〈0．05），Westernblot检测显示反义PNA组Akt蛋白磷酸化水平明显低于随机PNA组和空白组，差异有统计学意义（P〈0．05）。DC经P13K抑制剂预处理后，CCR7介导的Akt蛋白磷酸化及抗凋亡作用被阻断。结论CCR7反义PNA能够有效抑制体外培养的大鼠DC趋化因子受体CCR7的表达并导致其发生凋亡，其机制可能是阻断了CCR7介导P13K／Akt信号转导通路的活化。