2017年太原市手足口病流行特征及病原学分析

目的分析2017年太原市手足口病流行特征及病原型别,为太原市手足口病防治提供科学依据。方法从中国疾病预防控制信息系统获取2017年太原市手足口病资料,通过Excel和SPSS 22.0进行流行病学分析;采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应对太原市疾病预防控制中心2017年收集的583份手足口病病例标本进行核酸检测。结果 2017年太原市手足口病发病6 494例,年发病率为149.48/10万;男女比例为1.37∶1;发病年龄以5岁及5岁以下儿童多见,占89.34%;发病率最高是阳曲县,达322.4/10万。发病高峰在6-8月,11月出现了次高峰。对583例手足口病样本进行核酸检测,阳性标本285例,阳性率为48.89%,主要型别为CVA6、EV71和CVA16,分别占比50.18%、22.11%和17.19%。结论太原市手足口病的分布呈现出人群差异、季节差异、地区差异,病毒型别以CVA6型占比最大。     

柯萨奇病毒A16型感染引起手足口病的研究进展

手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)是一种儿童常见传染性疾病,主要表现为发热和手、足、口、臀等部位出疹(典型皮疹为斑丘疹、丘疹、疱疹),可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状,少数病例可出现中枢神经系统损害,甚至心肺功能衰竭危及生命[1]。柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CA16)是引起HFMD主要病原体之一。近几年,非肠道病毒71型(enteroviruses 71,EV71)及肠道病毒感染引起重症感染有逐渐上升趋势,其中包括CA16[2-3]。但其发病机制尚不清楚,且无有效的治疗及预防措施。     

肠道病毒71 VP1基因的原核表达及其抗血清的制备

目的克隆并表达重组肠道病毒71(EV71)VP1基因,进行抗血清的制备并检测抗血清效价。方法利用原核表达系统将PCR获得的VP1片段构建成原核表达载体pET32a(+)-VP1,诱导其表达VP1融合蛋白并利用包涵体纯化方法进行重组蛋白的纯化,将纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备VP1抗血清,ELISA检测抗体效价。同时构建真核表达载体,利用其在真核细胞中的瞬时表达检测抗血清的特异性。结果通过克隆获得VP1原核表达载体,IPTG诱导VP1蛋白表达并纯化,SDS-PAGE结果显示重组蛋白表达且纯化浓度较高,将重组蛋白乳化后免疫新西兰兔3次,取血检测抗血清的效价,ELISA结果显示抗体效价为1∶64 000,利用所构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP1表达VP1对抗血清进行检测,Western blot结果表明抗血清可较好的与VP1特异性结合。结论制备具有免疫原性的VP1蛋白及其效价较高的抗血清,为进一步研究抗EV71诊断方法、血清学诊断试剂盒及抗病毒疫苗的研制奠定基础。     

2009年深圳地区肠道病毒71型毒株VP4基因进化分析

目的 对深圳地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)肠道病毒71型分离株(enterovirus 71,EV71)的VP4基因遗传进化进行分析.方法 2009年采集深圳市儿童医院就诊的HFMD患者的粪便标本491份,选取其中8份经细胞培养鉴定为阳性的EV71毒株用RT-PCR扩增VP4基因,利用MEGA4.0软件进行遗传进化分析.结果 2009年深圳地区8株EV71 VP4基因全长207 bp,编码69个氨基酸;8株EV71 VP4基因核苷酸同源性为94.2％ ～98.1％,与深圳2001至2004年分离的17株EV71毒株核苷酸同源性在89.9％ ～98.1％,与GenBank中其他EV71病毒株VP4的核苷酸同源性为79.2％～100％;其中与亚洲流行株阜阳株(EU703812)核苷酸的同源性最高(100％),其次是C4代表株及2004年深圳株(AY895144)为94.2％ ～97.1％.除了印度株和其中1株EV71的VP4编码的氨基酸在第54位(ACA)不同之外,其余7株EV71 VP4编码的氨基酸序列之间以及与GenBank报道的其他序列同源性达100％.8株EV71 VP4基因核苷酸与C4代表株相比有17处不同,除1处以外其余全在简并密码位点上;轻重症病例毒株之间VP4基因序列未见明显改变.进化树显示8株EV71均属于C4基因亚型.结论 2009年深圳市流行的EV71属于C4基因亚型,流行的EV71 VP4基因非常保守,不属于变异区段,绝大部分核苷酸的变异属无义突变,VP4基因编码的氨基酸变异几乎为0.     

吉林省2009-2012年肠道病毒71型VP1编码区氨基酸位点的变异分析

目的分析2009--2012年引起吉林省手足口病（handfootandmouthdisease,HFMD）流行的肠道病毒71型（EV—A71）的VP1区氨基酸位点的特征性变异位点。方法对2009--2012年分离于吉林省HFMD病例的70株EV—A71分离株的VPl编码区进行逆转录．聚合酶链反应,然后对扩增产物进行核苷酸序列测定,使用Bioedit软件和MEGA4．0软件分析VPl区氨基酸位点的变异特征以及基因亲缘关系。结果2009--2012年在吉林省分离到的70株EV—A71均属于C4a基因亚型,其中69株与2008年安徽阜阳的分离株亲缘关系最近,并且这69株病毒在VPl编码区第22位氨基酸位点均由谷氨酰胺转变为组氨酸（Q—H）,与2008年安徽阜阳株一致。结论引起2009-2012年吉林省HFMD流行的EV-A71可能：来源于安徽阜阳流行株延续传播。     

EV71、CA16及通用型肠道病毒实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研发

目的 研制一种新的含竞争性内标引物,能同时检测EV71、CA16及通用型肠道病毒的四重实时荧光定量PCR诊断试剂盒,用于手足口病的临床诊断及流行病学监测.方法 设计特异性的EV71型、CA16型及其他型肠道病毒和内参基因的引物,改进病毒核酸提取方法,优化实时荧光定量PCR检测体系,并研究产品的准确度、稳定性、精密度和扩增效率和检测线性范围.结果 本试剂盒的引物和探针特异性好,试剂盒采用的的病毒RNA抽提效果与QIAGEN公司QIAamp Viral RNAmini Kit抽提效果相当,但具有更低的试剂成本.优化引物探针浓度分别为0.2μmol/L的上下游引物浓度、0.06 μmol/L的通用探针浓度、0.08 μmol/L的EV71分型探针浓度和0.08μmol/L的CA16分型探针浓度.产品具有较好的稳定性和良好的准确度、精密度,CA16、EV71和肠道病毒通用型对引物的扩增效率分别是106％、101％和105％,线性检测范围是109拷贝/μl ～ 102拷贝/μl.结论 采用四重荧光定量PCR技术开发的能同时检测EV71、CA16、其他肠道病毒和内标的手足口病诊断试剂盒具有良好的准确性、稳定性、精密度和扩增效率等,具有很好的临床应用价值.     

血清CK-MB、IL-6、PA水平与小儿手足口病严重程度及预后的关系分析

目的 分析血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-6(IL-6)、前清蛋白(PA)水平与小儿手足口病严重程度及预后的关系.方法 选取通渭县中医医院2018年1月至2019年6月收治的96例手足口病患儿作为研究对象,按病情严重程度分为轻症组(45例)、重症组(32例)和危重组(19例).检测患儿入院后第2、4、7、10天血清CK-MB、IL-6、PA水平,分析这3项指标与患儿病情严重程度和预后的相关性.结果 不同时间点轻症组、重症组和危重组血清CK-MB、IL-6、PA水平差异有统计学意义(P<0.05),两两比较,危重组、重症组血清CK-MB、IL-6水平高于轻症组,危重组高于重症组(P<0.05);危重组、重症组血清PA水平低于轻症组,危重组低于重症组(P<0.05).根据预后情况分为后遗症组(29例)和非后遗症组(67例),后遗症组血清CK-MB、IL-6水平高于非后遗症组(P<0.05),而PA水平低于非后遗症组(P<0.05).血清CK-MB、IL-6水平与手足口病的严重程度呈正相关(r=0.413、0.385,P<0.05),而PA水平与手足口病的严重程度呈负相关(r=-0.367,P<0.05).ROC曲线分析显示,CK-MB高于17.12 U/L、IL-6高于15.67 pg/mL或PA低于219.64 mg/L时患儿更易遗留后遗症.结论 血清CK-MB、IL-6、PA水平变化有助于评估手足口病患儿治疗效果,预测病情进展及预后情况.     

肠道病毒性脑膜炎基因诊断的研究

肠道病毒（ＥＶＳ）感染是无菌性脑膜炎和脑炎常见的病因之一，由于其临床表现及脑脊液（ＣＳＦ）检查无特异性，故临床难与其它细菌性或病毒性感染相鉴别。本文用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了临床诊断的２４例病毒性脑膜炎及２０例其它神经疾病（ＯＮＤ）对照组患者的ＣＳＦ中ＥＶｓ－ＲＮＡ。所用的引物选自ＥＶｓ基因组中高度保守的５＇－非编码区（５＇－ＮＣＲ），这些引物已被证明能够检测出ＥＶｓ广泛的型别。结果在２４例病毒性脑膜炎患者ＣＳＦ中检出ＥＶｓ－ＲＮＡ阳性者７例，而对照组全部阴性。提示经ＲＴ－ＰＣＲ的早期诊断有助于对ＥＶｓ脑膜炎采取早期特异的抗病毒治疗。     

2013-2014年天津市手足口病流行病学特征分析

目的 分析天津市2013-2014年手足口病流行病学特征,探讨其流行规律。方法 收集《中国疾病预防控制信息管理系统》天津市报告的手足口病数据,应用描述流行病学分析和相关统计分析方法对天津市2013-2014年手足口病发病情况进行统计和分析。结果 天津市2013-2014年累计报告手足口病33 587例,重症6例,死亡2例。年均发病率116.41/10万。发病高峰在23-30周(6-7月),年均发病率最高的是静海县(248.69/10万)。61.12%的病例为散居儿童,1岁年龄组年均发病率最高,为3025.76/10万。实验室诊断病例2267例,除了肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16),还检测出Cox A6阳性280例,Cox A10阳性70例,分别占实验室诊断病例的12.35%和3.09%。结论 天津市手足口病季节性明显,农村和郊区是重点防控地区,尽管EV71和Cox A16仍为天津市手足口病的主要病原,Cox A6和Cox A10已经出现并成为手足口病的致病原,应引起关注。