具有靶向免疫抑制作用新型重组融合蛋白B7-2-PE40KDEL真核表达载体的构建及其生物效应

目的:构建B7-2-PE40KDEL的真核表达载体,探讨通过体内表达重组融合蛋白,特异性杀伤高表达CD28 T细胞,阻断B7∶CD28/CTLA4共刺激信号途径诱导免疫耐受的可能性.方法:以原核表达载体pRSETA-B7-2-PE40KDEL质粒为模板,采用PCR及酶切连接的方法构建真核表达载体pcDNA3.1/Zeo( )-B7-2-PE40KDEL.利用RT-PCR、Western 印迹及ELISA法从mRNA、蛋白质水平检测了B7-2-PE40KDEL在RPE-CHO真核细胞中的表达情况.采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD28 T细胞的生物活性进行测定.结果:成功构建了pcDNA3.1/Zeo( )-B7-2-PE40KDEL真核表达载体,转染入RPE-CHO细胞后可转录翻译为重组融合毒素蛋白,相对分子质量约为71×103,平均106个转染细胞24 h表达0.23 μg/L.活性测定显示真核载体所表达的B7-2-PE40KDEL可特异性地抑制高表达CD28的人T淋巴细胞系,而对CD28阴性的人白血病细胞系的抑制率较低.结论:真核载体表达的B7-2-PE40KDEL具有良好的靶向性免疫抑制活性,为进一步开展其体内特异性防治移植排斥反应及自身免疫性疾病奠定了基础.     

烧伤创面绿脓杆菌感染原因分析及预防

目的　探讨引起烧伤创面绿脓杆菌感染的原因 ,为临床防治绿脓杆菌感染提供依据。方法　回顾分析 3 7例烧伤创面绿脓杆菌感染情况 ,分析其主要原因。结果　 3 7例中轻度烧伤 5例 (13 .5 1%) ;中度以上 3 2例 (86.49%) (其中休克期切削痂植皮 1例 ,伤后 3～ 5d切削痂植皮 6例 ,未切削痂植皮 2 5例 ) ;休克期渡过平稳 8例 (2 1.62 %) ;休克期渡过不平稳 2 9例 (78.3 8%)。结论　引起烧伤创面绿脓杆菌感染的原因很多 ,中度以上烧伤未切削痂植皮和休克期渡过不平稳是引起烧伤创面绿脓杆菌感染最主要的原因。     

腹膜透析并发绿脓杆菌性腹膜炎的防治及护理

腹膜透析并发绿脓杆菌性腹膜炎的防治及护理同济医科大学附属协和医院张科菊据文献报道：腹膜透析（ＣＡＰＤ）一旦并发绿脓杆菌性腹膜炎单用抗生素治疗无效，应及早拔管。我科１９８４～１９９３年收治本病５例，根据细菌培养加药敏，选择敏感性高的抗生素均获治愈，现报...     

囊性纤维性变合并绿脓杆菌肺感染的发病机制

囊性纤维性变(CF)是一种致死性、遗传性疾病,目前尚无有效的治疗方法。多数CF的发病和死亡与绿脓杆菌(PA)慢性肺感染有关。因此了解PA的微生物学特性,与宿主间的相互作用及PA所致肺损伤的发病机制非常重要。PA是一种条件致病菌,但是一经感染,其毒力很强,它能分泌多种菌体外产物,玻坏宿主的免疫功能,同时产生藻酸盐,直接或间接地损伤肺组织,使肺功能衰退。CF的成功治疗是基因治疗,但目前尚不能采用。通过适当的免疫疗法、抗生素治疗及免疫调节,可防止PA栖生,根除肺内PA,改善体质,延长CF病人的生存。     

绿脓杆菌菌苗治疗慢性支气管炎的疗效

目的　观察绿脓杆菌菌苗 (MSHA菌毛株 )治疗慢支的临床效果及不良反应。方法　选择 5 6例慢性支气管炎患者分观察组和对照组各 2 8例。观察组只给绿脓杆菌菌苗皮下注射 ,每 3天注射 1次 ,10次为一疗程 ;对照组给予常规抗感染 ,祛痰、止咳、平喘治疗 ,3 0d为一疗程。同时对观察组中条件许可的 11例患者于用药前后 1周内进行血清和痰液中有关抗体的检测。结果　观察组总有效率 93 % ,临床控制率 64 % ,不良反应发生率 4% ;对照组总有效率89 % ,临床控制率 2 5 % ,两组的临床控制率差异有显著性 (P <0 0 5 )。观察组中 11例血清绿脓杆菌MSHA菌毛株凝集抗体摘度于用药前后大幅度增加 ;痰液中绿脓杆菌菌毛株特异性sIgA荧光抗体于用药后检出阳性人数比用药前有明显增多。结论　绿脓杆菌菌苗治疗慢支有较好的临床控制效果 ,能显著提高机体免疫状态 ,不良反应少。     

α—促黑激素-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的质粒构建与表达

黑色素瘤恶性程度高,目前尚无比较有效的防治手段。黑色素瘤表面存在大量的α-促黑激素(α-MSH)受体,由α-MSH和绿脓杆菌外毒素(作用于靶细胞肽链延伸因子Ⅱ使其失活而影响蛋白质合成,最终导致靶细胞死亡),构建成的基因重组免疫毒素将能特异地杀伤靶细胞一黑瘤细胞。本实验采用PCR技术,获得α-MSH和PE40(绿脓杆菌外毒素缺失细胞结合功能区域,从而避免免疫毒素     

头孢他啶治疗顽固性绿脓杆菌感染11例

本文报告11例绿脓杆菌感染,其中呼吸道感染9例,胆囊切除术后合并胆道感染2例。因经大多数抗生素治疗无效,少数因有毒性或过敏不能继续或调用有效抗生素,最后才改用头孢他啶治疗。经7-20d的疗程,所有病例均取得一定疗效。显效率为56％。未出现明显副反应。但本药售价昂贵,故应作为抢救危重绿脓杆菌感染的病例之用     

铜绿假单胞菌外毒素A的表达、纯化与生物学活性研究

目的利用基因工程技术制备铜绿假单胞菌外毒素A(PE),为深入研究PE的致病机理和免疫防治奠定基础。方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌基因组中扩增外毒素A全长结构基因,将其克降于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109, IPTG诱导表达;制备融合蛋白包涵体,并采用Ni-NTA柱亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析分离和纯化目的蛋白;采用透析法对纯化后的目的蛋白进行复性,MTT法测定复性后的重组PE对L929细胞、B16黑素瘤细胞的细胞毒活性。结果通过对PCR反应体系的优化,扩增到了PE全长结构基因。所构建的pQE-PE重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化E.coli JM109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(M_r)约为66×10~3,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析、葡聚糖凝胶过滤和阴离子交换层析后蛋白纯度大于95%。MTT法测得重组PE对L929细胞和B16黑素瘤细胞的半数抑制浓度(IC_(50)值)分别为2.13μg/ml、2.58μg/ml。结论通过对PE的表达纯化,获得了具有细胞毒活性的重组PE,为利用基因工程手段大量制备PE的工作奠定了基础。