EB病毒LMP2A特异性CTL的体外诱导及分析

用EBV LMP2A重组痘苗病毒 (rVV LMP2A )转染人树突状细胞 (DC ) ,转染后的DC分别在第 1、 7、 14天刺激相同MHC背景的T细胞 ,在IL 2作用下诱导LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS )检测CTL诱导分化过程中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 等细胞的分群变化 ;RT PCR检测细胞分化过程中FasLmRNA表达 ;生物活性法检测功能性细胞因子IFN γ的分泌。结果显示本法诱导的CTL对靶细胞有特异性杀伤活性 ,第 2次和第 3次DC刺激后杀伤活性有所上升 ;在CTL诱导分化的第 7、 14、 2 1天细胞分群以CD4 + 、CD8+ 细胞为主 ;RT PCR证实所诱导的细胞内有FasLmRNA的表达 ;随细胞培养天数的增加IFN γ分泌增加 ,在第 14天达到较高水平。研究表明重组痘苗病毒载体rVV LMP2A转染的DC刺激T细胞可诱导出EBV LMP2A特异性CTL。     

利用纳米颗粒的光核反应实现原位活化治疗的可行性研究

目的:利用蒙特卡罗程序Geant4模拟13.5 MeV和6 MeV X射线照射细胞内的纳米颗粒，分析其光核反应的剂量贡献份额。方法:以纳米金颗粒（GNP）为例，分别模拟6 MeV和13.5 MeV照射细胞内的GNP，给出各自条件下由GNP造成的剂量贡献。创建水模体（0.426 mm×0.426 mm×0.426 mm），包含1 103个细胞，作为GNP的载体。在6 MeV和13.5 MeV下分别模拟细胞中包含和不包含GNP所造成的剂量沉积。结果:13.5 MeV X射线照射，其由GNP造成的剂量贡献为5.12 cGy，细胞总能量沉积为25.37 cGy，由GNP引起的剂量贡献占20.19%；6 MeV X射线照射，其由GNP造成的剂量贡献为2.87 cGy，细胞总能量沉积为23.05 cGy，由GNP造成剂量贡献约为12.46%。与6 MeV相比，13.5 MeV下由GNP光核反应造成的剂量贡献占7.7%。结论:对于细胞模型内纳米金的研究表明，GNP确实能引起额外的剂量贡献。由于GNP光核反应引起的剂量贡献很低，难以作为能够被原位激活的放射源使用。     

病案信息的社会化价值

自从有了医学，就有了病案。病案是医护人员在医疗活动中形成的应归档保存的医疗信息载体。病案不仅是医、教、研的重要参考资料，也是评价医疗质量、衡量医务人员业务水平的重要依据和标志。病案中记录的原始信息成为保险公司核保退赔、交通肇事及伤残鉴定、医疗纠纷处理、计划生育、公、检、法办案的原始证明。病案信息不仅局限于医院内部使用，随着医疗体制的改革及医疗保险的实施，患者的单位、社会、公、检、法的使用率也相当高，到医院查阅、摘抄、复印病案的数量日趋增多，病案为社会公证服务提供了第一手可靠的资料。充分体现了病案的社会化价值。     

纳米锶磷灰石纤维多孔钛复合材料的生物安全性研究

目的评价新型生物材料纳米锶磷灰石纤维多孔钛复合材料的生物安全性。方法对纳米锶磷灰石纤维多孔钛复合材料的生物安全性进行体外评价,分别进行以下实验:急性全身毒性实验;血液相容性评价(溶血试验);热原试验;皮内刺激实验。结果纳米锶磷灰石纤维多孔钛复合材料对生物体无毒性、无致热原性、无刺激性,不引起溶血反应。结论纳米锶磷灰石纤维多孔钛复合材料具有良好的生物安全性,有望作为新型骨植入生物材料应用于临床。     

腺病毒载体介导的lacZ基因在NG细胞系及大鼠黑质的表达

本实验用标记基因ｌａｃＺ５型重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶｌａｃＺ）转染培养的ＮＧ细胞系，Ｘ－ｇａｌ染色检测转染效率．在培养的ＮＧ细胞系，当病毒滴度为２×１０８时，转集率达到５０％，当滴度为２×１０９时，转染率达１００％，有较好的量效关系；固定病毒液度为１０１０，培养２～１６ｈ，细胞的转染率随时间延长而提高，有较好的时效关系。将Ａｄ５ＣＭＶｌａｃＺ注射到大鼠黑质部位后，分别于注射后３～１２０ｄ取脑、切片、Ｘ－ｇａｌ染色，发现黑质局部从第７ｄ开始有部分蓝染，第１０ｄ达高峰，注射局部感染率１００％；９０ｄ时开始下降，持续至１２０ｄ；纹状体等其它部位无蓝染．上述结果提示，腺病毒载体介导的标记基因可在培养的神经细胞系和中脑黑质部位高效表达，为进一步开展中枢神经系统退变性疾病尤其是帕金森氏病的基因治疗奠定基础。     

蛋白激酶和病毒的转化作用

具有急性转化作用的逆转录病毒野生型逆转录病毒仅有微弱的转化作用,它们通过特有的基因gag,env和pol编码相应的蛋白质。具有急性转化作用的逆转录病毒从细胞中获得了额外的基因或其一部分,即癌基因,后者的突变或异常的表达即导致细胞转化。众所周知,有些癌基因编码蛋白激酶,然而,这并非转化基因的一个基本特征,因为,ras、myc和sis病毒癌基因编码的是其它类型的转化蛋白质。癌基因编码的蛋白激酶彼此间相差甚远,例如,     

腺病毒载体介导bcl-2基因转染在离体和在体状态下对损伤运动神经元的保护作用

本文目的在于观察携带 bcl-2基因的重组腺病毒 (Ad/ s-bcl-2 )在离体和在体条件下对损伤运动神经元的保护作用。采用培养脊髓运动神经元的谷氨酸损伤模型和大鼠坐骨神经切断损伤模型 ,评价重组 bcl-2腺病毒对损伤运动神经元的影响。指标是bcl-2原位杂交和免疫组化反应、台盼蓝拒染法检测培养神经元存活、TU NEL 阳性神经元计数以及脊髓运动神经元 ACh E反应。结果 :(1) Ad/ s-bcl-2可转染离体和在体脊髓运动神经元并使其过表达 bcl-2。 (2 )过表达 bcl-2可延长培养神经元的生存时间。(3 )过表达 bcl-2可显著地减少谷氨酸诱导的原代培养脊髓运动神经元的凋亡以及坐骨神经切断损伤诱导的脊髓运动神经元的凋亡。 (4 )过表达 bcl-2可显著地缓解坐骨神经损伤诱导的神经元内 ACh E的活性降低 ,并加速其恢复。本研究结果提示 :腺病毒载体中介 bcl-2基因转染对离体和在体损伤的运动神经元均具有保护作用     

微小隐孢子虫CPl5基因高效真核表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达

目的：构建隐孢子虫CP15真核表达载体pCB3．1—15，观察其在Hela细胞中的表达。方法：用BglⅡ从pMD18-T-15中酶切得到CP15基因，将其插入真核表达载体pCR3．1( )的BamH I位点，构建CP15真核表达载体pCR3．1—15，脂质体介导法将其转染Hela细胞，并用G18加压筛选，用RT—PCR方法检测外源CP15基因的转录，用ELISA法和间接免疫荧光法检测其活性。结果：酶切鉴定表明已成功构建了重组真核表达载体pCR3．1-15；外源CP15基因能在转染细胞中有效转录；ELISA法和间接免疫荧光法实验结果表明表达产物具有良好的生物活性。结论：构建的pCR3．1—15真核表达载体在Hela细胞中具有良好的表达活性。     

肝癌特异性超抗原SEA(D227A)基因表达载体的构建与表达

目的：构建受AFP顺式作用元件调控的超抗原表达载体，将SEA(D227A)特异性的表达于AFP阳性肝癌细胞膜表面。方法：PCR扩增AFP基因启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)。将上述片断插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点，构建AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体(pLXSN SEA(D227A)—linker—CD80tm)。通过脂质体介导，以表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系，用RT—PCR和间接免疫荧光染色，检测SEA的表达。结果：成功地将AFP基因的启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)克隆到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点，酶切鉴定和DNA序列分析无误，RT—PCR和间接免疫荧光法检测证实，SEA(D227A)能在AFP阳性的肝癌细胞膜特异性表达。结论：AFP顺式作用元件修饰的超抗原表达载体的构建，为下一步用其强化肝癌的免疫治疗奠定了基础。     

生物功能化半导体量子点对活细胞内蛋白质分子可视化的研究进展

半导体量子点(或称半导体纳米微晶体)具有独特的光谱特性和良好的光化学稳定性。通过改变量子点的材料或粒径大小可在同一波长光激发下获得从紫外到近红外(或从蓝色到红色)波长范围内任意点的发射光谱。随着近年来生物亲和性功能化纳米技术的发展,为半导体量子点用于多通道、高通量对活细胞内蛋白质分子直接观察研究这一国际未解决的难题提供了可能。概述了生物功能化半导体量子点在活细胞生理条件对蛋白质分子进行可视化研究的最新进展,评价了其作为荧光探针对活细胞蛋白质分子进行实时动态研究的发展前景。