有机性挥发物在肺癌组织和癌细胞株中的检测和分析

目的:通过检测肺癌组织与肺癌细胞株代谢过程中产生的挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs),寻找肺癌特征性的气体标记物,为呼吸气体检测在肺癌早期诊断中的应用提供实验依据.方法:利用固相微萃取联合气相色谱质谱联用技术(solid-phase microextraction and gas chromatography-mass spectroscopy,SPME-GCMS)检测18例原发性肺癌患者的手术标本及A549、NCI-H446、SK-MES-1、BEAS-2B 4种细胞株培养液顶空气体中的VOCs,从中筛选与肺癌相关的特征性VOCs组分.结果:2-十五烷酮和十九烷在肺癌细胞株A549、NCI-H446、SK-MES-1中均有表达,2-十五烷酮的表达量分别为(1.382±0.171 )×10-5 mg/L、(1.681±0.190)×10-4 mg/L和(2.835±0.401)×10-6 mg/L;十九烷的表达量分别为(8.382±0.606 )×10-6 mg/L、(1.845±0.130)×10-5 mg/L和(6.220±0.362)×10-6 mg/L;二十烷在肺癌细胞株A549和NCI-H446中有表达,表达量分别为(8.313±1.130)×10-6 mg/L、(1.020±0.141)×10-5 mg/L;而此3种VOCs在对照组BEAS-2B中无表达.在18例肺癌组织中,癸烷、2-十五烷酮、十九烷、二十烷等12种VOCs高表达,其中2-十五烷酮的表达量为5.421×10-6 mg/L～3.621×10-5 mg/L,十九烷为5.805×10-6 mg/L～1.830×10-5 mg/L,二十烷为2.730×10-6 mg/L～2.343×10-5 mg/L;其表达水平与肿瘤分化程度无关(P>0.05).二十烷在非鳞癌中的表达高于鳞癌,此结果与肺癌细胞株的表达情况相符.结论:2-十五烷酮、十九烷、二十烷、癸烷等12种VOCs在肺癌组织中高表达,其中2-十五烷酮、十九烷、二十烷与肺癌细胞株结果相符,提示上述物质可能为肺癌潜在的特征性标志物.     

电喷雾串联质谱法研究阿莫西林的裂解方式

目的:应用电喷雾离子阱串联技术探讨阿莫西林的裂解方式,为阿莫西林的定性定量分析等提供依据。方法:先采用液相色谱对样品进行纯化,再应用电喷雾串联质谱仪研究阿莫西林裂解方式和碎片结构。结果:阿莫西林同时具有3种不同的β-内酰胺环开环方式;m/z:114碎片可通过其中2种不同开环方式获得碎片;易失去中性碎片NH3,形成的m/z:349碎片可以作为阿莫西林分析的特征碎片用于定性和定量分析。结论:所采用的技术方法灵敏、准确,可用于进一步探讨阿莫西林的体内代谢转化情况和定性定量分析。     

精液优化处理后DNA碎片指数、精子畸形率与IVF胚胎发育、早期自然流产的相关性

目的:探讨精液优化处理后DNA碎片指数(DFI)、精子畸形率(SMR)与常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中早期自然流产的相关性和预测价值。方法:选取2013年1月至2015年6月因单纯输卵管性不孕行常规IVF获得临床妊娠的602个周期,分为早期自然流产组(97个周期)和继续妊娠组(505个周期)。取卵日,将受精剩余精子分别采用精子染色质扩散实验(SCD)和快速染色法(Diff-Quik),完成DNA碎片和精子形态检测。Logistic方程建立联合预测因子(JP),受试者工作特征(ROC)曲线分析DFI、SMR对IVF早期自然流产的预测价值。结果:早期自然流产组DFI、SMR分别为(15.91±3.69)%、(82.85±10.24)%,继续妊娠组DFI、SMR分别为(9.30±4.22)%、(77.32±9.19)%,差异均有统计学意义(P均0.05)。两组优质胚胎率分别为46.53%(342/735)、56.43%(2 263/4 010),差异有统计学意义(P0.05)。DFI、SMR均是IVF早期自然流产的危险因素,OR分别为5.96、1.66(P均0.01)。DFI、SMR及JP的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.893±0.019、0.685±0.028、0.898±0.018。根据约登指数得出DFI、SMR的预测阈值分别为15%、80%。DFI与SMR呈正相关(r=0.31,P0.01),DFI、SMR均与优质胚胎率呈负相关(r=-0.45、-0.22,P均0.01)。结论:精液优化处理后DFI、SMR与IVF胚胎发育密切相关,DFI对早期自然流产有预测价值,阈值约为15%,SMR预测效能低。     

小儿遗传代谢缺陷病的筛查诊断

目的：了解遗传性代谢缺陷疾病发病种类。评估其发病率，为我国新生儿筛查项目的扩展提供科学依据。方法：利用气相色谱-质谱（GC／MS）技术对来我院就医的182例可疑代谢病患儿的尿液样本进行GC／MS筛查。结果：发现阳性患儿19例，涉及遗传代谢病12种，总诊断阳性率为10．4％。其中甲基丙二酸血症6例（1例伴同型半胱氨酸血症），高甘油血症和高乳酸血症各2例，丙酸血症、戊二酸尿症、二羧基酸尿症、果糖1，6-二磷酸酶缺陷病、酪氨酸血症Ⅰ型、枫糖尿症、苯丙酮尿症、多种羧化酶缺乏症和β-氨基异丁酸尿症各1例。结论：仅靠临床、普通生化和辅助检查诊断遗传代谢病很困难，而GC／MS是诊断遗传代谢病的有效工具。     

男性不育患者精子染色体畸变及精子DNA完整性分析

目的 探讨男性不育患者精子染色体和精子DNA完整性的改变.方法 精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)实验分析精子DNA碎片,正常生育男性(对照组)32名,特发性严重少弱精子症患者(idiopathic severe oligoasthenozoospermia,ISOA)19例,妻子不明原因反复自然流产(unexpbined recurrent miscarriage,URM)38例;多色荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)技术检测URM妇女丈夫(n=12)、ISOA不育者(n=10)及对照组(n=5)精子13、21、18、X和Y染色体畸变.结果 对照组、ISOA不育者及URM妇女丈夫精子13、18和21染色体数目总体异常的比率分别为1.29%、4.02%和3.91%,而X和Y染色体数目总体异常的比率分别为0.61%、2.03%和1.98%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).SCD实验分析精子DNA碎片,ISOA不育患者(n=19)及URM妇女丈夫(n=38)精子DNA碎片比例平均为40.7%±17.8%和22.1%±10.3%,均显著性高于对照组(12.1%±5.2%,P＜0.01).FISH精子染色体(13、21、18、X和Y探针)数目畸变率与精子DNA碎片比率呈正相关(r=0.874,P＜0.01,n=27),精子DNA碎片比率与精子密度及前向运动精子率呈负相关(r=-0.571,P＜0.01,和r=-0.616,P＜0.01,n=89),与畸形精子比率呈正相关(r=0.637,P＜0.01,n=89).结论 精子染色体畸变率和精子DNA碎片比率增高,可能是ISOA和妻子URM不育男性的原因之一,精子DNA损伤筛查町能为特发性男性不育患者提供有用的信息.     

TSHR大分子及其活性多肽在BALB/c小鼠体内的免疫原特性研究

目的：观察促甲状腺激素受体(TSHR)及其活性片段aa352-366在BALB/c小鼠体内的免疫原特性研究，探讨TSHR分子结构与功能的关系。 方法: 将血蓝蛋白(KLH)偶联的多肽TSHRaa352-366-KLH和多肽加受体混合组-TSHRaa352-366-KLH 加豚鼠TSHR(gTSHR),间隔15 d分两组分别注入BALB/c小鼠腹腔内，对照组注射KLH， 测定各时相血清中甲状腺激素及促甲状腺激素受体抗体水平；90 d后处死动物，检测小鼠甲状腺组织TSHR mRNA水平及其病理变化。 结果: 与各组自身0 d的数据比较，多肽组小鼠血清TT3、TT4水平降低(P<0.01)，TRAb升高(P<0.01)； 多肽加受体混合组TT3、TT4水平降低(P<0.01)，TRAb(P<0.01)、TBAb(P<0.05)和TSAb(P<0.05)均升高。 此外，混合组甲状腺组织TSHR mRNA水平明显高于正常组(P<0.05)；多肽组小鼠甲状腺组织显示滤泡上皮细胞扁平、核缺失、皱缩及胶质浓缩等甲减的病理改变, 而混合组则呈现不均一的病理变化。 结论: TSHR以及活性片段hTSHRaa 352-366都具有免疫原性， 刺激小鼠血清TRAb、TSAb和TBAb的产生，引起甲状腺组织的病理改变。     

精子DFI与精液常规、精子形态学的相关性及其对IVF-ET/ICSI结局的影响#br#

摘要：目的　分析精子DNA碎片指数（DFI）与精液常规、精子形态学及体外受精-胚胎移植（IVF-ET）/卵胞浆内单精子注射（ICSI）结局的关系,探讨精子DFI预测男性生育力及IVF-ET/ICSI结局的价值。方法　回顾性分析2420例男性不育患者精液检查数据,根据DFI值分为A组（DFI≤15%）、B组（15%＜DFI＜30%）、C组（DFI≥30%）,分析精子DFI与精液常规、精子形态学相关性。检测117对IVF-ET/ICSI不孕夫妇中男性患者精子DFI,精液常规、精子形态学,根据DFI值分为IVF-1组（DFI≤15%）、IVF-2组（15%＜DFI＜30%）、IVF-3组（DFI≥30%）,ICSI-1组（DFI≤15%）、ICSI-2组（15%＜DFI＜30%）、ICSI-3组（DFI≥30%）,研究精子DFI对IVF-ET/ICSI结局的影响。结果　A、B、C组患者年龄、精子畸形率逐次升高,精子浓度、前向运动精子（PR）、精子活动率逐次降低（P＜0.01）;精子DFI与年龄、精子畸形率呈正相关,与精子浓度、PR、精子活动率呈负相关（P＜0.01）;与IVF-1组比较,IVF-3组精子浓度、PR降低;IVF-3组精子畸形率较IVF-2组升高;与ICSI-1组和ICSI-2组比较,ICSI-3组PR降低;ICSI-3组精子畸形率较ICSI-1组升高（P＜0.05）;IVF组和ICSI组中,各亚组受精率、卵裂率、优胚率及临床妊娠率差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论　精子DFI可有效评估男性生育力。精子DFI对IVF/ICSI的临床结局没有预测价值,不建议将精子DFI检测作为选择辅助生殖技术方案检查项目。      

年龄对不明原因不育男性精子运动参数及DNA损伤的影响

目的 探讨不明原因不育男性的年龄对其精子运动力及DNA损伤的影响。方法 回顾性分析2013年1月至2018年12月在本院不孕不育专科门诊就诊的400例不明原因不育患者,按年龄分为二组：<35岁组和≥35岁组,通过计算机辅助精液分析系统(CASA)检测获得前向运动精子百分率(PR%)、总活力和精子运动参数(VAP、VSL、VCL、ALH、STR、LIN、BCF);采用精子染色质扩散法(SCD)评估精子DNA损伤程度,结果以DNA碎片指数(DFI)报告。结果 不明原因不育患者年龄与PR%、总活力、VAP、VSL和VCL呈负相关(r分别为-0.142、-0.125、-0.142、-0.114和-0.161,P均<0.05),而与精子DFI呈正相关(r=0.161,P<0.05);≥35岁组的PR%、VAP和VCL均明显低于<35岁组(P均<0.05),而≥35岁组的DFI水平及DFI异常率均高于<35岁组且差异具有统计学意义;同时,≥35岁组的精子DNA损伤率风险是<35岁组的两倍多。结论 在不明原因不育男性中,年龄越大的患者其精子运动参数可能越低,...