双曲钩端螺旋体溶血素基因tlyA的克隆、表达及初步功能鉴定

目的研究双曲钩端螺旋体(简称双曲钩体)是否含有溶血素基因,并鉴定其溶血活性。方法对双曲钩体LEBIa2503基因编码产物进行结构域预测、序列比对后,PCR扩增目的片断,克隆到原核表达载体pET28b( ),转化宿主细胞,并诱导表达产物进行初步功能鉴定。同时,以RT-PCR检测LEBIa2503的转录情况。另外,也对双曲钩体菌体本身有无溶血活性进行检测。结果双曲钩体LEBIa2503基因与问号钩体tlyA溶血素基因在蛋白水平上有相同的结构域,属于直系同源基因(orthologues gene)。原核表达的重组融合蛋白在羊血平板上出现β-溶血环。以RT-PCR的方法能检测到在双曲钩体中有LEBIa2503基因的转录,但双曲钩体菌体本身则检测不到溶血活性。结论未发现双曲钩体有溶血活性,但其含有溶血素基因tlyA,并且在普通培养环境下能被转录,这对进一步研究其内在机制奠定了基础,并对探索致病性问号钩体致病机制提供了一定线索。     

榄香烯对人肺腺癌SPC-A-1细胞VEGF-C及VEGFR-3表达的影响

目的探讨榄香烯对体外培养的人肺腺癌SPC-A-1细胞株血管内皮生长因子（VEGF-C）及其受体VEGFR-3表达水平的影响。方法采用免疫细胞化学方法对药物作用后的SPC-A-1细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达水平进行检测。结果榄香烯能明显抑制肺腺癌SPC-A-1细胞的生长并降低VEGF-C、VEGFR-3的表达水平,而且有时间和浓度依赖性。结论榄香烯通过降低肺腺癌细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达水平,从而遏制了肿瘤血管、淋巴管转移。     

浆膜腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

恶性浆膜腔积液已成为恶性肿瘤转移的一个突出表现，本研究采用核酸原位杂交技术对浆膜腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA进行分析，旨在明确积液中各种脱落细胞hTERT mRNA的表达状况，探讨其在恶性浆膜腔积液中的诊断价值。     

恶性疟原虫FCC1/HN株CTP基因真核表达载体的构建

目的构建恶性疟原虫CTP 基因的真核表达载体,以便进一步研究其功能. 方法根据Genbank 已发表恶性疟原虫CTP基因序列(序列号为X084041),自行设计并合成了一对引物,通过聚合酶链反应扩增出CTP基因,经HindⅢ和BamHⅠ消化后定向克隆入测序载体pUC19,构建重组质粒pUC19-CTP.经双酶切、PCR扩增和序列测定,证实插入片段与已知CTP编码序列完全相同.用HindⅢ和BamHⅠ消化pUC19-CTP,将双酶切下的CTP编码基因片段定向亚克隆入真核表达载体pcDNA3. 结果经双酶切和PCR扩增鉴定证实CTP基因正向插入真核表达载体pcDNA3中. 结论真核表达质粒pcDNA3-CTP构建成功.     

丙型肝炎

丙型肝炎病毒NS5A蛋白对Huh7细胞周期的影响；丙型肝炎病毒非结构蛋白4A反式激活基因NS4ATP1的克隆化研究；丙型肝炎病毒感染人端粒酶逆转录酶基因转导后细胞的研究；大肠杆菌高效表达的HCV E2蛋白在丙型肝炎检测中应用；丙型肝炎病毒非结构蛋白3蛋白酶抑制剂的研究进展（综述）。     

子宫腺肌病组织中PTTG、bFGF和VEGF的表达及意义

采用免疫组化法检测26例子宫腺肌病及30例正常子宫平滑肌组织中的垂体转化基因蛋白(PTTG)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及血管内皮生长因子(VFGF).结果显示,在子宫腺肌病组织中PTTG、bFGF及VEGF的阳性表达率分别为84.6%、73%及57.7%,正常子宫组织三个指标的阳性表达率均为20%,两者三指标相比,P均<0.01;三指标在子宫腺肌病组织中的表达呈正相关(r分别为0.621、0.518、0.576,P均<0.01).认为PTTG、bFGF和VEGF共同参与了子宫腺肌病的发生和发展.     

弓形虫RH株膜蛋白P30的原核表达与鉴定

目的在E.coli中表达弓形虫RH株膜蛋白P30。方法将P30基因定向克隆到pET28b,构建含目的基因的pET28b-P30重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),接种含pET28b-P30的BL21(DE3)单菌落于LB培养基,1∶100稀释后用0.2mmol/L的IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定诱导表达产物。结果1构建了重组质粒pET28b-P30,2在E.coli中表达了一分子量约为30kDa的融合蛋白,经Westernblot鉴定正确。结论在E.coli中高效表达了弓形虫RH株膜蛋白P30,并以包涵体形式存在。     

脑组织与相关疾病蛋白质组学研究进展

21世纪初，人类基因组计划基本完成。基因组学（genomics）是一门研究基因组结构和功能的科学，它是对相对稳定DNA的静态研究。蛋白质组学是对一个基因组或一种细胞、组织、器官所表达的全部蛋白质成分的分析。基因组包含的遗传信息转录产生mRNA，mRAN经翻译产生蛋白质。同一细胞在不同的生理病理条件下翻译表达的蛋白质不尽相同，所以蛋白质组学是对细胞不同时期、不同病理生理状态下蛋白质表达的动态研究。最终执行生命活动的是蛋白质而不是基因，蛋白质的表达不仅需要基因的转录，还要有转录后的修饰、加工等许多步骤才能完成。所以蛋白质的形成除受基因的转录影响外，细胞不同时期和不同病理生理状态也会影响蛋白质的形成。因此对蛋白质的研究将会对阐明生命现象的本质提供直接的物质基础。     

刚地弓形虫P30(SAG1)基因的克隆与表达

目的构建弓形虫P30基因表达载体并获得重组表达蛋白。方法将弓形虫P30基因的开读框用PCR扩增,NcoⅠ和HindⅢ酶切后,与同样酶切的表达质粒pET30a(+)经T4连接酶连接,然后转化到DH5α中。菌液经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE和Westernblot进行鉴定。结果扩增的P30基因片段为750bp,重组质粒诱导表达产物分子质量单位为30ku,与理论值相符。Westernblot确认重组质粒表达蛋白与小鼠抗弓形虫单克隆抗体(P30McAb)发生特异性反应。结论成功构建重组体并获得弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。