携人胰岛素样生长因子-1基因的成肌细胞移植后在体存活及产物表达的研究

目的:观察并探讨携人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因的成肌细胞移植入雄性C3H小鼠体内后的存活、转归以及移植后hIGF-1基因的表达。方法:84只雄性C3H小鼠随机(20~30g,7~11w)分为A组(正常小鼠转基因细胞移植组)、B组(正常小鼠空白成肌细胞移植组)、C组(受伤小鼠转基因细胞移植组)和D组(受伤小鼠空白成肌细胞移植组),每组20只,另4只作正常对照。A、B两组分别于右侧腓肠肌中段注射转基因成肌细胞或空白成肌细胞;C、D两组以重力打击造成小鼠右侧腓肠肌中段钝挫伤,伤后第3天分别于致伤局部注射转基因成肌细胞或空白成肌细胞。注射细胞后第2、5、10、20、30天,各组随机抽取4只小鼠处死,取右侧腓肠肌中段检测,Br-dU免疫组化染色检测外源细胞在体内的存活情况;4组另行hIGF-1免疫组化染色及实时PCR检测外源转基因细胞在体内表达hIGF-1情况。结果:各组小鼠均有BrdU免疫组化阳性染色,A、C两组均有hIGF-1mRNA表达及hIGF-1分泌,B、D两组未检测到hIGF-1mRNA表达及hIGF-1分泌。结论:携hIGF-1基因的成肌细胞移植入正常及钝挫伤小鼠体内后,可存活一段时间,并能稳定地分泌hIGF-1因子。     

Experimental study on the transfection and expression of vascular endothelial growth factor in primary cultured rat skeletal myoblasts

Objective To investigate the transfection and expression of vascular endothelial growth factor in primary cultured rat skeletal moblasts.Methods VEGF121 gene was transfected to primary cultured rat skeletal myoblasts by lipofectamine in vitro.Gene expression of transfected myoblasts was detected by RT-PCR,Western-Blot and immunofluorescent staining.[第一段]     

新生C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的实验研究

目的建立C57BL/6小鼠成肌细胞体外培养、纯化和鉴定的方法。方法采用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离新生C57BL/6小鼠的成肌细胞,用Percoll分离液纯化细胞,在含15%胎牛血清的DMEM培养基中进行成肌细胞培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,Desmin抗体鉴定成肌细胞。结果经过Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离,Percoll纯化的成肌细胞纯度较高,Desmin染色95%以上的细胞胞浆染色阳性。结论采用Percoll纯化、国产胎牛血清培养,可以获得高纯度的成肌细胞。     

胰岛素样生长因子-1和肿瘤坏死因子-α对C2C12骨骼成肌细胞增殖和分化的影响

目的 观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和肿瘤坏死因子-α(TNf-α)对体外培养的C2C12小鼠骨骼成肌细胞增殖、分化的影响.方法 体外培养C2C12小鼠骨骼成肌细胞,分别采用IGF-Ⅰ、TNF-α和IGF-I TNF-α干预细胞,以MTT法、肌酸激酶(CK)活性测定法检测处理后的细胞在增殖、分化方面的变化.结果 IGF-Ⅰ组24,48和72 h增殖程度均高于对照组(P＜0.05),且增殖作用具有时间效应(P＜0.05).IGF-Ⅰ组和TNF-α组CK活性均低于对照组(P＜0.05),但随着时间延长IGF-Ⅰ组CK活性呈升高趋势. 结论 IGF-Ⅰ促进C2C12骨骼成肌细胞的增殖,延迟其分化;TNF-α抑制C2C12骨骼成肌细胞的分化.     

不同浓度的维生素C对C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察不同浓度的维生素C（VitC）对体外培养的骨骼肌成肌细胞（C2C12）增殖、凋亡的影响。方法：取体外培养的C2C12细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,离心重悬,调整细胞密度,按200 μL/孔接种,常规培养,待细胞融合率达80%且未出现细胞分化时,将细胞分6组：阴性对照组（C2C12 细胞中加入单纯无血清培养基）、H2O2组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基）和VitC 1,2,3,4组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基的基础上,分别加入不同浓度的VitC：10,20,60,100 mg/L）。分别在干预0,6,24,36,48,72 h后采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测各组C2C12细胞的增殖。在干预36 h后采用Annexin V-PI双染法检测各组C2C12细胞凋亡率。结果：在干预36和72 h时,各浓度的VitC组的吸光度（OD）值均较H2O2组显著升高（P＜0.001）,其中以VitC 4组升高最为显著,而且VitC 4组在干预36 h时的吸光度值高于阴性对照组（P＜0.05）;在干预36 h时,VitC 2,3和4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于H2O2组;VitC 2和3组的C2C12成肌细胞凋亡率高于阴性对照组,而VitC 4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：VitC能够有效抑制H2O2诱导的C2C12成肌细胞的凋亡,高浓度的VitC可能在干预36 h时对C2C12成肌细胞有促增殖的作用。     

应力作用下成肌细胞分化的信号转导研究

正1成肌细胞分化肌肉发生主要是指在胚胎发育的过程中,其中涉及诸多的生物学过程。在时间上,这一过程可以大致分为以下三个阶段:定向分化、细胞增殖和终极分化[1]。2成肌细胞分化过程中细胞周期的调节成肌细胞分化形成肌管的过程中,成肌细胞从细胞周期中退出,相互融合形成多核的肌管细胞。因此,细胞周期在肌肉发生中起着相当重要     

成肌细胞介导的基因治疗研究现状

成肌细胞介导的基因治疗研究现状王宏伟薛京伦基因治疗是８０年代初期迅速发展起来的医学分子遗传学中一个全新的研究领域，而靶细胞的选择一直是伴随基因治疗研究的中心话题。其中研究较多的有骨髓细胞、皮肤成纤维细胞、角质细胞、表皮细胞、肝细胞、内皮细胞等，至９０...     

低氧促进大鼠骨骼肌成肌细胞体外增殖

目的:探讨轻中度低氧对大鼠骨骼肌成肌细胞(SkM s)增殖的影响。方法:采用血球计数板计数法和流式细胞术观察了3%、10%氧浓度及CoC l2对SkM s数量和增殖指数的影响。结果:低氧组细胞较对照组细胞数量和增殖指数明显增加(P<0.05),10%氧浓度促增殖作用更为明显,CoC l2对大鼠SkM s没有促增殖作用。结论:轻中度低氧可以促进大鼠SkM s的增殖,为体外大量扩增细胞提供了新思路。     

自体骨骼肌成肌细胞移植治疗心力衰竭面临的问题及其发展前景

在骨骼肌成肌细胞研究不断发展的同时，近年来骨髓干细胞的研究也取得了令人瞩目的进步，从而使自体骨骼肌成肌细胞移植的进一步研究面临巨大危机。本文结合近年来的实验室及临床研究，对限制自体骨骼肌成肌细胞移植应用与临床的主要问题进行剖析，同时阐述其今后的发展方向。