心肌缺血/再灌注中RhoA的调控作用研究进展

Rho A属于小G蛋白Rho亚家族,在细胞的增殖、迁移、黏附及凋亡等过程中发挥重要的调控作用。国内外近期研究发现,一方面Rho A/ROCK通路可通过影响心肌能量代谢、炎症反应、内质网应激等在心肌缺血/再灌注中造成心肌损伤,另一方面,Rho A的激活对再灌注损伤也具有积极作用。该文对近年来Rho A在心肌缺血/再灌注中的调控作用及机制作一综述,并探讨其作为治疗心肌缺血/再灌注损伤的药物靶点的应用前景,为研发心肌缺血/再灌注损伤治疗药物及其用药策略提供理论依据。     

玉郎伞查尔酮调控PI3K/Akt信号通路抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制研究

目的探讨玉郎伞查尔酮(YLSC)调控PI3K/Akt信号通路抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法 40只♂SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、YLSC组、YLSC+PI3K抑制剂wortmannin组(YLSC+WM组)、PI3K抑制剂wortmannin组(WM组),每组8只。除假手术组外,其它各组大鼠均结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血30 min,再灌注120 min。实验结束后,采用比色法测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)水平,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量,Western blot法检测心肌组织中总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达,FQ-PCR法分析内皮型一氧化氮合酶(eN OS)、凋亡因子caspase-3及自噬相关基因Beclin1的表达量变化。结果与I/R组比较,YLSC组CK-MB、LDH以及TNF-α血清含量明显降低,NO水平升高,Beclin1、caspase-3及LC3-Ⅱ的表达量均明显下降,同时Akt的磷酸化水平与eN OS mR NA表达增加,上述各项指标差异具有统计学意义(P<0.05),而上述变化能够被PI3K/Akt信号通路的特异性阻断剂wortmannin所阻断,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 YLSC通过激活PI3K/Akt信号通路抑制缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡和过度自噬,从而发挥对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。     

miRNAs对药物代谢酶的转录后调控

micro RNAs(mi RNAs)是一类小分子非编码RNAs,通过与靶基因互补配对在转录后水平调控基因表达。生理环境的改变(药物、致癌物、激素、压力或癌症等)会导致mi RNA表达的改变而影响药物代谢或药效的改变。对药物代谢酶相关的mi RNA进行评价可为个体化治疗提供有价值的信息。该文就mi RNA对Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶的转录后调控作用进行综述。     

耐两性霉素B的近平滑与热带假丝酵母菌的体外诱导及耐药分子机制研究

目的：体外诱导近平滑假丝酵母菌（ CP）、热带假丝酵母菌（ CT）对两性霉素B（ AMB）的耐药株,检测其中的耐药基因表达情况。方法 AMB体外构建耐药株,用实时荧光定量PCR法检测耐药基因的表达水平。结果 CP、CT 野生株经体外 AMB 浓度递增法诱导后,形成耐药株最低抑菌浓度（ MIC,≥8μg? mL－1）;CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1及MDR2基因在野生株中低水平表达,在耐药株中表达水平明显升高,差别有统计学意义（ P ＜0．05）;CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1及MDR2的表达量在CPAMB耐药株中分别是其野生株的136．92,16．33,2．07,14．84,4．07,2．38倍;在CT AMB耐药株中分别是其野生株的8．83,2．98,3．00,2．40,2．30,3．57倍。结论 CP、CT对AMB耐药与CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1及MDR2基因过度表达有关。     

老年妇女外阴营养不良组织中细胞凋亡及相关基因的表达分析

目的探讨老年妇女外阴营养不良组织中细胞凋亡及相关基因的表达情况。方法选取我院接收的70例老年妇女外阴营养不良患者作为观察1组,同时选取10例老年妇女外阴营养不良恶变患者作为观察2组,利用原位末端标记及免疫组化S-P法对两组患者蜡包埋组织中的细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax的表达情况进行检测。同时选取10例石蜡包埋的老年妇女正常外阴皮肤进行对照(对照组)。结果三组患者均在细胞凋亡及bcl-2、bax的表达现象,且观察1组患者的细胞凋亡指数及bcl-2、bax的表达方面均明显高于观察2组(P<0.05);bcl-2、bax二者间的表达呈正相关(P<0.05),在恶变部分凋亡细胞的分布区域及bcl-2、bax的表达方面则无明显相关性。结论外阴营养不良的发生发展与恶变及细胞凋亡间有较大的关系,且bcl-2、bax发挥着一定的作用。     

循环microRNAs与心血管疾病的相关性研究

心血管疾病是当今世界威胁人类健康最严重的疾病之一,其发病率和死亡率均居第1位,寻找新的生物学靶点来进行心血管疾病早期诊断及干预治疗,对降低发病率和死亡率有着非常重要的意义。Micro RNAs(miRNAs)是一类内源性的小分子非编码单链RNA,通过与靶m RNA的3’末端非翻译区域(Untranslated Regions,URT)特异性结合抑制转录后基因表达。大量的研究已证实miRNAs在心血管疾     

流感病毒感染中炎症小体的激活和调控机制

炎症反应是宿主抗流感病毒感染的一个重要过程,它可以诱导产生抗病毒的炎症微环境以减少病毒的复制和扩散,同时参与对流感病毒的适应性免疫反应,在机体抗流感病毒感染过程中至关重要。然而,过度的炎症反应同时也是流感病毒重症感染、甚至死亡的主要因素。研究表明,炎症小体作为炎症反应的重要启动和调节分子,介导IL-1β和IL-18的成熟和分泌并诱导了细胞焦亡,在流感病毒发病机制中起着重要的调节作用,因此,针对炎症小体的激活和调控也成为流感病毒治疗的一个新策略。     

甲基汞通过miRNA对人胚胎神经干细胞细胞周期相关基因表达的调控

[目的]通过研究甲基汞对人胚胎神经干细胞miRNA表达的影响,探讨低剂量甲基汞对神经干细胞细胞周期调控基因的调节作用. [方法]以0、10、50 nmol/L甲基汞染毒人胚胎神经干细胞24h后,用MTT法测定甲基汞对细胞活力影响,应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测甲基汞对细胞周期调控基因(p16、p21)的mRNA的表达水平影响,利用实时荧光定量多聚酶链反应技术检测调控p16、p21的miRNA(miR-24、miR-106a)的表达情况. [结果]50 nmol/L甲基汞染毒组细胞活力降低为对照组的53.5％,差异有统计学意义(P＜0.05);p16与p21基因的mRNA表达水平随着甲基汞染毒浓度的升高而升高,差异均有统计学意义(P＜0.05),但10 nmol/L与50 nmol/L组的p16基因表达差异无统计学意义.miR-24、miR-106a的表达水平随着甲基汞染毒浓度的升高而降低,差异有统计学意义(P＜0.05). [结论]50 nmol/L的甲基汞可以引起人胚胎神经干细胞增殖抑制,并可能通过miRNA调节细胞周期调控基因的表达.     

弓形虫GRA6可溶性蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化

目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原,为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础.方法将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus（DE3）-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导下表达.超声破壁后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物的表达形式,并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化.通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性.结果GRA6以融合蛋白（GST-GRA6）的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达.对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达.在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上.Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别.结论GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别.     

实时荧光定量PCR测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶基因表达的影响

目的测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫核糖核酸还原酶（RNR）基因表达的影响。方法体外同步培养的恶性疟原虫经瑞香素及其衍生物DA78与DA79作用后,抽提总RNA,并合成相应的特异性引物,运用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）测定瑞香素类抗疟化合物对恶性疟原虫RNR基因表达的影响。结果恶性疟原虫体外经瑞香素及其衍生物作用后的RNR基因扩增标准曲线在10^5～10^9拷贝（copies）/ml范围内呈良好的线性关系,R^2为0.997 52;瑞香素及其衍生物DA78与DA79对恶性疟原虫RNR作用后,其原始拷贝数分别为81 173.23、124 830.83和74 801.35,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,而瑞香素的铁螯合能力被饱和后,对该基因的表达未产生显著抑制（P〉0.01）。结论瑞香素类抗疟化合物体外抑制恶性疟原虫RNR的基因表达,RNR可能作为瑞香素类抗疟化合物抗疟作用的候选靶分子之一。