小干扰RNA沉默人胰腺癌细胞内连锁凋亡抑制因子基因表达的研究

X连锁凋亡抑制因子（X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）是凋亡抑制蛋白（IAP）家族中最有效的caspases抑制剂，它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡，因而在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用。研究表明，多种肿瘤细胞中XIAP呈高表达，抑制XIAP基因表达可诱导肿瘤细胞凋亡，进而抑制肿瘤生长。本研究应用近年来开展的RNA干扰技术（RNA interference，RNAi），设计并合成针对XIAP编码基因的小干扰RNA（siRNA），于胰腺癌细胞BxPC-3中，观察siRNA能否产生肿瘤细胞内源性XIAP表达的转录后沉默，为胰腺癌基因沉寂疗法提供实验依据。     

活化PBL作用肝癌细胞的表型分析与TCR Vβ基因亚家族的优势取用

目的采用抗ＣＤ２８，ＣＤ８０，ＣＤ２及ＣＤ５８分别刺激健康人ＰＢＬ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬ的表型变化及ＴＣＲＶβ基因亚家族的表达水平进行探讨．方法用ＦＡＣＳ分析作用肝癌细胞前后ＰＢＬ表型变化，并用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析其ＴＣＲＶβ１２０的表达水平及特征．结果健康人ＰＢＬ作用肝癌细胞后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化．健康人ＰＢＬ分别加ＩＬ２，ＰＨＡ，抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８，ＣＤ２８＋ＣＤ８０，ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高．结论在癌抗原的参与下，ｍＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ呈递的相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用     

汉坦病毒L99株G2糖蛋白基因的克隆及在真核细胞中的瞬时表达

从感染病毒的Vero-E6细胞中提取总RNA,采用RT-PCR和分子克隆技术将扩增到的C2糖蛋白基因插入含有CMV启动子的真核表达质粒pVAX1.通过脂质体介导转染cos-7细胞,用间接免疫荧光法检测瞬时表达的蛋白.结果获得含有编码汉坦病毒L99株包膜糖蛋白G2基因的重组质粒pVAX/C2.在转染cos-7细胞内.用IFA可检测到细胞内有特异性荧光.证实成功构建了汉坦病毒L99株包膜糖蛋白C2基因真核表达载体,并可在cos-7细胞中瞬时表达;为出血热综合征疫苗制备奠定了基础.     

Expression of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 in pancreatic adenocarcinoma： Correlation with microvessel density

AIM: Cyclooxygenases (COX) are key enzymes for conversion of arachidonic acid to prostaglandins. Nitric oxide synthase (NOS) is the enzyme responsible for formation of nitric oxide. Both have constitutive and inducible isoforms. The inducible isoforms (iNOS and COX-2) are of great interest as regulators of tumor angiogenesis, tumorigenesis and inflammatory processes. This study was to clarify their role in pancreatic adenocarcinomas. METHODS: We investigated the immunohistochemical iNOS and COX-2 expression in 40 pancreatic ductal adenocarcinomas of different grade and stage. The results were compared with microvessel density and clinicopathological data. RESULTS: Twenty-one (52.5%) of the cases showed iNOS expression, 15 (37.5%) of the cases were positive for COX-2. The immunoreaction was heterogeneously distributed within the tumors. Staining intensity was different between the tumors. No correlation between iNOS and COX-2 expression was seen. There was no relationship with microvessel density. However, iNOS positive tumors developed more often distant metastases and the more malignant tumors showed a higher COX-2 expression. There was no correlation with other clinicopathological data. CONCLUSION: Approximately half of the cases expressed iNOS and COX-2. These two enzymes do not seem to be the key step in angiogenesis or carcinogenesis of pancreatic adenocarcinomas. Due to a low prevalence of COX-2 expression, chemoprevention of pancreatic carcinomas by COX-2 inhibitors can only achieve a limited success.     

肝细胞癌中周期蛋白A表达与乙型肝炎病毒整合的相关性研究

目的探讨周期蛋白A与乙型肝炎病毒(HBV)整合的关系及其在肝细胞癌(HCC)中的表达和临床意义.方法分别采用聚合酶链反应(PCR)、逆转录(RT)-PCR和western印迹法检测35例HCC及其相邻非肿瘤组织中的周期蛋白A基因、mRNA和蛋白的表达;采用PCR和southern印迹法检测HCC标本中的HBx基因的整合.结果35例HCC中周期蛋白A蛋白过表达率为60.0%(2l/35),mRNA过表达率为42.9%(15/35),基因扩增率为2.8%(1/35).周期蛋白A蛋白过表达与肿瘤大小之间差异有显著性(P＜0.05).结论HBV DNA整合与周期蛋白A基因表达改变有相关性,周期蛋白A基因蛋白表达失控是肝细胞癌变中的早期事件,并且可能是HBV影响肝细胞正常细胞周期的重要因素之一.     

POMC在异源ACTH综合征中的基因表达调控研究

异源促肾上腺皮质激素综合征发生的分子机制是垂体特异性的阿片-促黑素细胞-皮质素原启动子在垂体和下丘脑以外的组织被异常激活。这种激活与许多因素,包括基因的甲基化、特异的和非特异的细胞转录因子如Tpit、NeuroD1、Ptx1等,以及调节细胞分化的因子如血管加压素受体等均有关系。     

术前促性腺激素释放激素激动剂治疗对子宫内膜异位症患者血清学指标及内膜组织相关基因表达的影响

目的：分析术前促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)治疗对子宫内膜异位症患者血清学指标及内膜组织相关基因表达的影响。方法选择于2012年12月~2014年12月在湖南省人民医院住院治疗的子宫内膜异位症患者82例作为研究对象,按照随机数字表法将其分为观察组和对照组,每组各41例。观察组患者接受术前GnRH-a联合腹腔镜治疗,对照组患者接受单纯腹腔镜治疗。比较两组患者的激素水平、疾病相关指标及复发相关指标、内膜组织基因表达等情况差异。结果观察组患者接受治疗后的雌二醇、卵泡刺激素、孕激素、黄体生成素水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者接受治疗后的CA125、CA199、基质金属蛋白酶抑制剂-1、血管内皮生长因子水平均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者的内皮型一氧化氮合酶、CD34、LIvin表达水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论术前GnRH-a治疗有助于降低子宫内膜异位症患者的激素水平,有利于腹腔镜手术的病灶彻底切除,降低术后复发可能性。     

人脐带间充质干细胞诱导分化心肌样细胞的研究进展

人脐带间充质干细胞是来源于间充质的多潜能干细胞,易分离,无特异分子标记,在体内、外可诱导分化为心肌样细胞。诱导后,人脐带间充质干细胞内ERK的磷酸化和MEF-2蛋白的表达水平明显升高,进而引发STAT3磷酸化的增加以及MEF-2C和MyoD基因表达的上调,从而激活肌源性以及心肌特异基因的转录,促使人脐带间充质干细胞向心肌方向分化。但其分化机制还有待深人研究。     

环氧合酶-2调控血管内皮生长因子表达的研究

目的 环氧合酶-2参与肿瘤的发生发展，但其在致癌过程中的作用机制尚不清楚。对胚胎小鼠成纤维细胞中不同基因型的环氧合酶(COX)，如COX-1^-/-/COX-2^-/-及野生型COX-1^ / ／COX-2^ / 与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系进行探讨。方法 培养小鼠胚胎成纤维细胞，用ELISA方法测量细胞中VEGF水平，从培养的细胞中提取mRNA，用RT-PCR技术确定VEGF的表达。结果 在COX-2基因缺失(COX-2^-/-)细胞中几乎测不出VEGF，而在含有COX-2基因(COX-2^ / )的细胞中VEGF水平明显增高，抑制剂赛来昔布(celecoxib)能抑制VEGF。VEGF的水平与COX-1无关。COX-2在mRNA水平调控VEGF的表达。结论 COX-2在VEGF的分泌与合成中起重要作用，从而影响肿瘤新生血管生成及肿瘤生长。     

慢性心房颤动患者心房肌钙转运调控蛋白和钙激活中性蛋白酶基因转录表达的变化

目的探讨心房颤动（简称房颤）患者心房肌电和结构重构以及心功能下降的分子生物学机制。方法采集风湿性心脏瓣膜病（简称风心病）窦性心律患者12例（窦律组）和房颤患者16例（房颤组）的右心耳组织，应用半定量逆转录一聚合酶链反应方法，测定心房肌钙转运调控蛋白和钙激活中性蛋白酶（calpainl）的mRNA表达水平。结果与窦律组比较，房颤组L-型电压依赖钙通道alc亚基（LVDCCalc）、肌浆网Ca^2＋-ATP酶、兰尼碱受体的mRNA表达水平显著下调（P均〈0．01），三磷峻肌醇受体的mRNA表达水平，卜调（P〈0．05）；房颤组心房肌calpainl的mRNA表达水平上调（P〈0．05），且与LVDCCalC的mRNA表达呈负相关（r=-0．583，P=0．019）。结论房颤患者心房肌钙转运调控蛋白和calpainl转录水平调控失衡可能是心房肌电和结构重构以及心功能下降的分2子生物学机制之一。