肝细胞黏附分子对膀胱移行癌细胞基因表达谱的影响

目的利用Affymetrix基因表达谱芯片探讨肝细胞黏附分子(hepaCAM)对膀胱移行癌细胞基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法运用Affymetrix Human plus 2.0全基因组芯片检测膀胱移行癌细胞株EJ细胞腺病毒-绿色荧光蛋白-hepaCAM感染组与腺病毒-绿色荧光蛋白感染组的基因表达谱,用SAM法进行差异基因分析、DAVID软件进行基因本体论分析及wikiPathway分析,并用RT-PCR和Western blot验证芯片结果。结果 hepaCAM能引起EJ细胞系基因表达谱的广泛变化,表达差异超过2倍以上的基因共2469个,其中上调基因1602个、下调基因867个。这些差异表达的基因功能主要涉及细胞周期、细胞增殖调节等方面。用RT-PCR对差异基因DNA修复蛋白,肝脏激酶B1和细胞周期蛋白D1进行验证,结果与基因芯片相符;进一步在3细胞株中用Western blot佐证DNA修复蛋白、肝脏激酶B1变化与芯片结果一致。结论 hepaCAM能够诱导EJ细胞基因表达谱的广泛变化,在基因水平通过多条通路作用于膀胱癌细胞。     

大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32的抗凝血活性分析

目的：比较大肠杆菌与毕赤酵母表达系统制备的Annexin32对凝血时间及大鼠下腔静脉血栓形成的影响。方法：采用白陶土训分凝血活酶时间（KPTT）法体外检测凝血指标，并观察大鼠下腔静脉血栓形成情况。结果：两种表达体系制备的蛋白对KPTT有明显延长作用，且1mg/kg的蛋白均可显著抑制大鼠下腔静脉血栓形成。结论：两种表达体系制备的Annexin32均有抗凝血及抑制血栓形成的作用。     

GFR/DDR2嵌和受体的构建和稳定表达的鉴定

目的：将一在细胞膜表面不表达或低表达的受体胞外区与盘状结构域受体2(DDR2)的胞内区融合，构建一嵌和DDR2受体，避免在活化此受体的同时激活与DDR2有相同配体的受体介导的信号通路，为探索DDR2介导的胞内信号途径奠定基础．方法：采用PCR扩增和限制性酶切的方式，将表皮生长因子受体(EGFR)的胞外区与DDR2的跨膜及胞内区进行融合并稳定转染EGFR低表达的293细胞，G418筛选，流式细胞仪检测嵌和受体在膜表面的表达状况．结果：成功构建了EGFR／DDR2嵌和表达载体；筛选到稳定表达此嵌和受体的293细胞株．结论：融合并稳定表达了EGFR／DDR2嵌和受体．     

稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立

目的：构建黑色素浓集激素受体2（MCHR2）/增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法：采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1,构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,并用Lipofectamine^TM转染到SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位。结果：扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2;RT-PCR、Western blotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达,激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPN1-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜,而转染空质粒pEGFPN1的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质。结论：成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株。     

王彦刚主任中医师从“气、湿、瘀”论治胃息肉经验

总结王彦刚主任中医师治疗胃息肉(GP)的临床诊疗经验。根据GP的临床病症特点,认为GP的发生与劳倦过度、饮食失宜、情志不畅密切相关,诸多因素可导致脾胃受损,运化失职,痰湿结聚,或气机不畅,瘀血阻络,总结其核心病机“气机不畅、湿聚痰阻、瘀血阻络”。治疗上提出从气、湿、瘀三方面论治GP,以“理气机、化痰湿、散瘀血”为核心治法,兼以调摄脾胃,善用清、消之法,重视饮食调控,随症加减,获效良多。     

神经再生素对皮层细胞基因表达影响的基因芯片研究

目的：采用基因芯片技术,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮质细胞基因表达的影响。方法：取ICR胚鼠（15d)大脑皮层细胞,无血清培养。实验组加入神经再生素（2μg/ml）,对照组加入等量基础培养液。培养6h后,抽提实验组和对照组皮层细胞总RNA,经反转录分别用Cy5、Cy3荧光标记成cDNA探针。将荧光标记的cDNA与MGEC－40s基因表达谱芯片杂交,芯片扫描、数据处理。结果：实验组与对照组大脑皮质细胞出现64条差异性表达的基因。呈现上调的基因有：钙调素结合蛋白、锌指蛋白激酶、核糖体蛋白等基因;下调基因有：抑制细胞分裂因子等基因。结论：神经再生素可作用于体外培养的胚鼠大脑皮层细胞,从基因调控水平促进脑细胞生长。     

糖肾平胶囊对糖尿病小鼠脾脏基因表达的影响

目的:研究糖肾平胶囊作用于糖尿病小鼠后对脾脏基因表达的影响。方法:用高脂高糖饲料诱发C57BL/6J小鼠Ⅱ型糖尿病模型,口服给予糖肾平浸膏粉后提取脾脏mRNA,与基因芯片进行杂交,经扫描,计算机软件分析后观察基因表达的变化。结果:找到脾脏中相关表达基因。结论:糖肾平胶囊治疗糖尿病的机理与调节蛋白质代谢,预防血栓形成,降低细胞分裂增生能力有关。     

利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子—2（IGF—2）

目的;研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子－2（rhIGF-2)。方法：将14kD hIGF-2前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒（BmNPV)转移载体pBakPAK8中,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后,通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF-2。以BmNPV/IGF-2感染5龄家蚕幼虫,分别在蚕染后24,48,72,96,108,120h提取家蚕血淋巴液,以ELISA法测定不同时家蚕血中IGF－2浓度,采用Westernblot分析鉴定IGF－2免疫学活性,MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响。结果：ELISA测定显示,BmNPV/IGF-2感染家蚕幼虫96h后IGF－2表达率最高,每毫升血淋巴中约含IGF－2 14μg,Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成7.0kD成熟hIGF-2,并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应,其促细胞生长能力明显优于来源于E.coli的IGF－2标准品。结论;本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rhIGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达。