超保守区非编码RNA在银屑病外周血单个核细胞中差异表达的初步研究

目的:用高通量Arraystar T-UCR芯片研究超保守区非编码RNA(T-UCR)在银屑病外周血单个核细胞(PBMC)中的差异表达谱。方法:抽取7例寻常型银屑病患者及3例正常人的外周血,分离PBMC后提取总RNA,将总RNA纯化,转录合成荧光标记的cRNA,cRNA样本片段化后与芯片杂交,使用Agilent G2505C芯片扫描仪扫描芯片,配合数据处理软件读取、处理数据,筛选出1.5倍及以上差异表达基因。结果:共有109种已知T-UCR在PBMC中表达,银屑病组与健康对照组相比,有5个T-UCR呈共同差异表达,其中上调1个,下调4个;有2 043种可能是新的T-UCR在PBMC中表达,共182种呈共同差异表达,其中上调100个,下调82个;与UCR区域重叠的mRNAs和UCR邻近基因分别有232个和67个表达有差异,Gene Ontology分析发现在参与细胞生理过程的36个差异表达的与UCR区域重叠的mRNAs中,有5个参与T细胞免疫活性相关的生物过程,例如T细胞活化、免疫反应中T细胞的分化等。结论:T-UCR可能参与寻常型银屑病的发病。     

基因芯片技术检测方法对耐多药肺结核治疗的指导价值研究

目的探讨基因芯片技术在肺结核耐药检测中的应用及指导临床治疗的价值。方法河北省胸科医院结核科住院的83位复治菌阳肺结核患者为选例对象,根据既往药敏试验结果,择符合条件的56例耐多药肺结核患者作为研究对象,随机分为基因芯片组24例根据基因芯片检测结果制定抗结核化疗方案,常规药敏组32例根据常规药敏试验结果制定抗结核化疗方案,观察评价两组在治疗后痰菌阴转情况及肺部病灶吸收情况。结果痰菌阴转情况基因芯片组58.3%(14/24),常规药敏组53.2%(17/32),基因芯片组略高于常规药敏组,组间相比无显著性差异(P0.05);X线肺部病灶吸收情况基因芯片组45.9%(11/24),常规药敏组43.8%(14/32),组间相比无显著性差异(P0.05)。结论基因芯片技术快速准确,可用于肺结核的耐药检测,指导临床用药。     

基于随机聚合酶链反应的病原菌基因芯片检测技术

目的建立一种基于随机聚合酶链反应的病原细菌基因芯片筛查检测技术。方法用生物学软件分析7种病原菌特异性基因序列的保守性区域,利用Oligo 6.0软件设计针对靶细菌的一系列探针,制备检测用基因芯片。细菌基因组DNA在随机引物扩增中掺入氨基丙烯-dUTP,产物偶联荧光染料后与芯片上探针杂交,通过芯片扫描仪和图像分析软件对结果进行判断。选取19种病原菌基因组DNA进行芯片特异性验证和灵敏度评价,使用问号钩端螺旋体对应靶探针进行基因芯片检测方法重复性验证,并制备问号钩端螺旋体模拟水污染样本进行芯片检测。结果在均一的杂交条件下4种靶细菌均能得到相应特异性杂交图谱,其他非目的细菌均为阴性结果,3种靶细菌基因组DNA最低检测浓度为14.43～363.4 pg/μl,芯片重复性变异系数CV值〈15%,最低可检测含问号钩端螺旋体7×105条/ml模拟水污染样本。结论初步建立的随机聚合酶链反应结合芯片技术的检测方法可用于多种病原菌筛查检测,为细菌高通量筛查与鉴定技术提供了新的思路和实验依据。     

人乳头状瘤病毒杂交分型检测技术在临床中的应用

目的 对人乳头状瘤病毒杂交分型技术在临床应用的分析研究.方法 对1106例患者取宫颈脱落细胞进行HPV DNA检测和分型同时进行薄层液基细胞学检测(TOT),异常者做组织病理学诊断.结果 1.1106例患者中HPV阳性682例.2.1106例患者中,细胞学异常的705例.并对异常者做病理学诊断.结果 为:慢性炎症165例,CIN Ⅰ 145例.OIN Ⅱ 157例.CINⅢ169例,宫颈癌69例.3.HPV DNA阳性病例在各组中分布:细胞学正常的有106例(26.4%),慢性炎症有101例(61.2%),CIN I有109例(89.8%).OIN Ⅱ有141例(89.8%),OIN Ⅲ 157例(92.9%).宫颈癌有68例(98.6%).结论 在人乳头瘤病毒感染检测中应用快速导流杂交分型技术.对临床有很重要的指导作用.     

乳腺癌相关分子诊断技术的新研究进展

乳腺癌是一种好发于乳腺上皮组织的恶性肿瘤,威胁女性的身心健康甚至性命。早期诊断是提高乳腺癌治愈率和生存率的关键。随着临床研究的不断发展,乳腺癌相关诊断技术也不断涌现。作为一种新的医疗诊断技术,分子诊断技术为乳腺癌的早期诊断、预后判断、化疗、内分泌治疗方案的选择等提供了重要帮助。本文将就乳腺癌相关分子诊断技术的新进展作一综述。     

子痫前期与胎儿生长受限患者激素相关基因的表达水平

目的 应用基因芯片技术检测子痫前期及胎儿生长受限患者和正常妊娠胎盘组织差异表达基因,探索两种疾病的病因.方法 用RMA的方法对芯片原始数据归一化.采用斯坦福大学的SAM (Significance Analysis of Microarrays)检验进行显著性检验.然后对显著性差异的基因做基因富集分析.结果 子痫前期组与正常孕妇组比较经SAM检验找出差异表达的111个基因,与激素的分泌、转运、调节等过程高度相关.胎儿生长受限组与正常孕妇组比较经SAM检验后找出差异表达的63个基因,其中3个与激素相关的基因.结论 子痫前期和胎儿生长受限在与激素相关的基因表达水平上都与正常孕妇存在差异,提示子痫前期和胎儿生长受限在与激素相关基因的表达水平上具有一定的相关性.     

1640例正常孕妇常见遗传性耳聋基因携带者筛查

目的探讨在正常孕妇中进行遗传性耳聋一级预防的可行性。方法应用遗传性耳聋基因芯片对正常孕妇进行常见耳聋基因筛查,对携带者的丈夫进行相同检测,相同致病基因携带者进行产前诊断及遗传咨询。结果 1 640例听力正常孕妇中检出携带者78例,其中3例携带线粒体基因突变,建议孕妇及其子女终生禁用氨基糖苷类抗生素;3例GJB3基因突变携带者,因为GJB3基因的基因型与表型关系不明确,不建议进行产前诊断。其余72例携带GJB2或SLC26A4基因突变的孕妇中,有4例配偶为携带者,包括两对夫妇携带相同致病基因,孕妇行羊水穿刺进行产前诊断,结果显示,胎儿基因型皆为杂合子,为携带者。另外两对夫妇携带不同致病基因,未进行产前诊断。对已经出生的78例携带者孕妇进行电话回访,均通过新生儿听力筛查。结论常见耳聋基因突变在孕妇人群中有较高的携带率,常规产前筛查能有效减少遗传性耳聋的发生。     

应用基因芯片筛选白念珠菌耐药基因的研究进展

近年来,临床上白念珠菌耐药现象日趋增多,耐药性形成的主要原因为耐药基因突变或表达异常,可利用基因芯片来绘制相关基因表达图谱,可对临床大量白念珠菌耐药菌株进行大量差异表达基因进行分析,可用来筛查并检测耐药相关基因,更有助于白念珠菌耐药基因的研究进展.     

本经取穴调控无先兆偏头痛患者基因表达谱的研究

【目的】研究针刺少阳经穴与针刺非经非穴治疗无先兆偏头痛患者前后的基因表达谱。【方法】采用基因芯片技术,分析比较采用经穴（经穴组）和非经非穴（非经非穴组）治疗无先兆偏头痛患者（各10例）后基因表达谱的差异;选取部分基因进行Real-time聚合酶链反应（RT－PCR）,验证基因芯片结果的准确性。【结果】经穴组治疗前后筛选出72个差异基因;非经非穴组治疗前后筛选出110个差异基因。经穴组差异基因涉及的功能包括脑内啡肽酶、 ATP合酶等,与治疗该病的关联性大。但非经非穴组涉及的基因功能广泛且分散,与治疗该病关联性较小,如细胞凋亡、 DNA修复等。 RT－PCR检测了经穴组的ATPAF2、 PTGS2、 TOR3A基因,非经非穴组的ACP2、 AURKA、 ARHGEF11、 CASP8基因,验证了基因芯片数据的可靠性。【结论】本经取穴治疗无先兆偏头痛的经穴效应在分子水平是多基因作用的综合结果,而非经非穴产生的安慰效应并未找到与之对应的与治疗无先兆偏头痛相关的靶基因,进一步证明了经穴效应的存在。