IGF-1R硫代反义寡核苷酸抗人肝癌裸鼠原位移植瘤的研究

目的探讨IGF-1R硫代反义寡核苷酸（IGF-1R APSODN）对人肝癌裸鼠原位移植瘤的治疗效果及毒性作用。方法构建40只人肝癌裸鼠原位移植瘤模型，设溶剂对照组、IGF-1R APSODN（75，50，25mg／kg）三剂量组及氟尿嘧啶阳性对照组，各组裸鼠静脉给药25次，用药期间监测裸鼠体重变化，实验结束后行全血分析，肝肿瘤体积、重量测量，计算抑瘤率，病理组织学检查。重复实验一次。结果两次实验IGF-1R APSODN各剂量组肝肿瘤体积和重量均小于溶剂对照组，其中75mg／kg组抑瘤率分别为76．36％、71．81％，50mg／kg组抑瘤率分别为55．65％、61．74％，25mg／kg组抑瘤率分别为47．72％、50．34％。结论IGF-1R APSODN是一种高效、低毒的抗肝癌生物学药物。     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌原代细胞凋亡的实验研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸对人胃癌原代细胞凋亡的影响，为胃癌的靶向治疗提供实验依据。方法利用人胃癌实体瘤新鲜标本培养胃癌原代细胞，胃癌细胞分为空白对照组、脂质体组、正义寡核苷酸组及反义寡核苷酸转染组。用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染胃癌原代细胞，48h后，观察肿瘤细胞的形态变化，Westernblot检测survivin蛋白的表达，流式细胞术检测细胞的凋亡。结果反义寡核苷酸转染组肿瘤细胞体积变小，细胞碎裂，出现凋亡小体；survivin蛋白量下降；流式细胞术检测到肿瘤细胞的凋亡率增高。与其他各组相比，其差异有统计学意义（P〈0．05），而空白对照组、脂质体组、正义寡核苷酸组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论survivin反义寡核苷酸在脂质体介导下转染人胃癌原代细胞，可以诱导肿瘤细胞发生凋亡，抑制细胞生长，反义survivin可能成为一个促进胃癌细胞凋亡的手段。     

亨廷顿病基因治疗的进展与挑战

亨廷顿病是一种常染色体显性遗传病,基因治疗是控制病情进展甚至实现根治的有效手段。随着反义核苷酸疗法在亨廷顿病基因治疗中获得初步成功,针对基因组水平及mRNA水平的各项技术也正在积极开发、改良,在不久的将来相继开展临床试验。本文围绕亨廷顿病基因治疗的现状、发展方向及临床挑战,开展相关研究状况的综述。     

一种核酸适配体高敏检测方法的建立及应用评价

本文建立一种基于免疫印迹的核酸适配体高敏定量分析的检测方法,并探讨其在适配体药物靶向性研究中的应用价值。首先用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸适配体的分离,然后利用电转的方法将凝胶上的核酸适配体转移至PVDF膜上,先后孵育Rabbit Anti-Biotin和HRP-Streptavidin抗体,最后利用化学发光仪进行成像。结果显示核酸适配体可以通过该方法进行定量检测分析,且该方法检测灵敏度高,能够识别荧光染料法检测不到的浓度范围。此外,该方法只识别被生物素修饰的核酸适配体,特异性强。结果提示,核酸免疫印记法可以作为核酸适配体药物靶向性研究的一个定量检测手段。     

microRNA-29a在结直肠癌组织中的表达及意义

目的 探讨microRNA-29a（miR-29a）在结直肠癌组织中的表达,以及miR-29a反义寡核苷酸对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 选取行手术治疗的初诊结直肠癌患者195例,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测结直肠癌和癌旁组织中miR-29a表达,培养人结直肠癌LoVo细胞,随机分为ASO-miR-29a组、ASO-对照序列组和空白对照组,检测各组细胞中miR-29a表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果 结直肠癌组织miR-29a相对表达量为（1.93±0.19）,癌旁组织为（1.26±0.12）,两者比较差异有统计学意义（P?<0.05）;结直肠癌组织中miR-29a相对表达量与TNM分期和淋巴结转移有关（P?<0.05）,多元线性回归分析结果显示,TNM分期和淋巴结转移是影响结直肠癌组织中miR-29a表达的因素（P?<0.05）;ASO-miR-29a组细胞中miR-29a相对表达量低于ASO-对照序列组和空白对照组（P?<0.05）;MTT实验结果显示,ASO-miR-29a组与ASO-对照序列组和空白对照组相比吸光度值降低（P?<0.05）;与ASO-对照序列组和空白对照组比较,ASO-miR-29a 组迁移细胞数和侵袭细胞数均减少（P?<0.05）。结论 miR-29a在结直肠癌组织中呈高表达,参与结直肠癌发生、进展过程,特异性抑制结直肠癌细胞中miR-29a表达可减少细胞增殖,抑制细胞迁移和侵袭能力。     

10% 5-氨基酮戊酸光动力疗法联合卡介菌多糖核酸注射液治疗面部扁平疣临床观察

目的探讨10%5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)联合卡介菌多糖核酸注射液治疗面部扁平疣的临床疗效。方法将70例面部扁平疣患者按治疗方法不同随机分为观察组和对照组,各35例。观察组采用10%ALA-PDT联合卡介菌多糖核酸注射液治疗,对照组采用二氧化碳(CO_2)激光联合卡介菌多糖核酸注射液治疗。若第1次治疗皮损未完全消退,需进行第2次或第3次治疗,每次治疗间隔2周,观察第2周、第4周、第6周及治疗结束后3个月时的疗效和不良反应。结果两组患者治疗后与治疗前比较,皮损均明显消退及改善;治疗后6周,观察组总有效率为88.57%(31/35),对照组为68.57%(24/35),差异有统计学意义(P0.05)。随访3个月,观察组复发率为2.86%(1/35),对照组复发率为17.14%(6/35),差异有统计学意义(P0.05)。结论 10%ALA-PDT联合卡介菌多糖核酸注射液治疗面部扁平疣安全有效,并降低其复发率。     

呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价

目的 采用聚合酶链式反应（PCR）技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。 方法 根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区（ITS）基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素（Biotin）和异硫氰酸荧光素（FITC）进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。 结果 水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180 μg·L^－1以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100 μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为 3.3 μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白（BSA-Biotin）浓度为2.00 g·L^－1,检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^－1。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10^－4、10^－2和10^－3 mg·L^－1时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^－1;重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。 结论 本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。     

新型冠状病毒肺炎患者病毒核酸“持久阳性”的中医病机初探

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)患者病毒核酸“持久阳性”是COVID-19治疗中的一大难题,延长了疾病康复周期,阻碍了疫情防控进程,加重了社会负担。由于该病的具体机制目前尚未完全阐明,笔者结合该病的临床表现与众多医家的观点,认为该病的病机特点与中医“湿、瘀、虚”理论相符合,本文试从“湿、瘀、虚”理论来探析COVID-19患者病毒核酸“持久阳性”的病机,旨在为其治疗提供新思路。