分子生物学在耐药基因检测中的应用

采用分子生物学手段对细菌耐药基因的检测,针对其编码基因的突变及其过度表达,对细茵同源性进行分析,控制细茼耐药流行播散发挥重要作用.     

反义肽核酸下调树突状细胞CCR7基因表达及意义

肽核酸（PNA）是一种新型核酸类似物。树突状细胞（DCs）是功能最强的抗原提呈细胞，DCs从外周迁移到淋巴组织的T细胞区完成抗原递呈并激活初始T细胞。目前认为DCs向淋巴组织的迁移动力主要通过趋化因子作用于DCs趋化因子受体CCR7这条途径。我们通过反义PNA抑制体外培养的大鼠DCs CCR7的表达及趋化活性，探讨其在调节免疫反应方面的理论意义。     

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1反义核酸抑制胃癌细胞侵袭黏附的研究

T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）是与胃癌侵袭转移密切相关的细胞骨架调节因子。我们采用反义技术抑制胃癌高侵袭转移细胞株中Tiam 1的表达，并观察对其体外黏附和侵袭、移行能力的影响。[第一段]     

反义寡核苷酸在泌尿系肿瘤中的研究进展

在肿瘤的发生发展过程中,基因的活动起着非常重要的作用,包括原癌基因的激活、抑癌基因的失活、基因突变还有可以编码一些促进细胞信号传递肽类物质的基因。以上因素的综合作用,可导致肿瘤的发生,对已发生的肿瘤还可以     

卡介菌多糖核酸膀胱灌注对膀胱癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨卡介菌多糖核酸（BCG—PSN）膀胱灌注对膀胱癌细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法132例膀胱移行细胞癌患者术前膀胱灌注BCG—PSN20mg,隔天1次,共3次。对术前术后的标本采用端粒重复序列扩增法（TRAP—PCR—EI．ISA）和末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记法（TUNEI。）分别检测肿瘤细胞端粒酶活性及细胞凋亡的情况。结果：膀胱灌注前后肿瘤细胞端粒酶活性分别为（12．78±3．67）和（3．89±1．12）,差异有统计学意义（P〈0．05）。灌注前后肿瘤细胞凋亡指数分别为（31．6±11．3）％和（69．1±12．4）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：BCG—PSN膀胱灌注能抑制膀胱癌细胞端粒酶活性,并诱导肿瘤细胞凋亡,具有明显的抗肿瘤作用。     

GA反义基因对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡的影响

目的研究反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶（GA）基因对裸鼠体内胃癌细胞凋亡作用的影响。方法将携带GA反义基因的质粒转染胃癌细胞SGC-7901，并将成功转染的胃癌细胞接种于裸鼠皮下，获得裸鼠胃癌移植瘤模型，通过TUNEL技术检测胃癌细胞凋亡的凋亡指数；RT-PCR技术检测移植瘤细胞内GAmRNA的含量。结果GA反义基因质粒载体成功转染胃癌细胞后，肿瘤生长速度减慢，癌细胞凋亡增加，肿瘤细胞内GAmRNA的含量减少。结论GA反义基因可抑制GA基因的表达，明显促进胃癌细胞凋亡。     

VEGF-ASODN转染对胃癌细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）-反义寡核苷酸（ASODN）转染胃癌细胞SGC-7901对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901,24h后实时荧光定量RT-PCR检测细胞VEGF mRNA起始拷贝数,ELISA法检测细胞及培养液上清中VEGF蛋白含量,Western blot法检测细胞生存素（survivin）蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA水平、降低胃癌细胞及其培养液中VEGF蛋白含量、降低survivin蛋白含量、增加细胞凋亡、抑制细胞活性及生长（P〈0.05）。结论VEGF-ASODN转染胃癌细胞SGC-7901能显著抑制VEGF和survivin蛋白表达、增加细胞凋亡、抑制细胞生长。     

肾癌相关新基因GYLZ-RCC18反义寡核苷酸转染对肾癌细胞系GRC-1的作用

目的：探讨肾癌相关新基因GYLZ－RCC18在肾癌发生发展中的作用机制。方法：采用逆转录PCR方法检测GYLZ－RCC18在肾癌和正常肾细胞系中的表达,将第一编码区起始处的20个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC－1,连续观察对肾癌细胞生长、增殖凋亡、死亡率、形态学的影响。结果：GYLZ－RCC18在肾癌细胞系中表达明显高于正常肾细胞系;导入GYLZ－RCC18反义寡核苷酸后,GRC－1细胞的核分裂可明显减少,导致GRC－1细胞死亡,抑制癌细胞的生长和增殖活性,并可特异诱导GRC－1连续凋亡。结论：GYLZ－RCC18是肾癌发生发展密切相关的癌基因,其表达可促进肾癌细胞的生长和增殖,并通过抗癌细胞死亡和凋亡机制对癌细胞起保护作用。     

肝癌基因治疗策略研究进展

自６０年代末提出基因治疗概念以来,其最初设想主要包括复突变或缺失的基因以及导入治疗基因,随着近十年来对癌基因认识的深入及转基因技术的日趋完善,肝癌的基因治疗策略也得以不断丰富和发展,如自杀基因及反义技术的运用等。现就这一领域的国内外研究进展作一综述。     

转化生长因子-α表皮生长因子受体反义寡聚核苷酸抑制人大肠癌细胞增殖的研究

目的 　探讨转化生长因子-α（TGF-α）、表皮生长因子受体（EGFR）反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对人大肠癌细胞株HR8348的作用。　方法　将TGF-α、EGFR反义寡核苷酸经脂质体包裹后转染人大肠癌细胞（浓度均为10 μmol/L）。采用四唑蓝比色法（MTT法）、细胞周期分析、裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。结果　TGF-α反义ODN、EGFR反义ODN均可明显抑制HR8348的增殖（抑制率分别为80.0%、82.5%）,并使裸鼠体内成瘤率下降（均为20.0%;对照组为100.0%）。G0/G1期细胞数明显增多（分别为63.9%、67.1%;对照组为31.1%）,S期细胞数相应减少（分别为35.6%、32.6%;对照组为53.9%）。结论　TGF-α反义ODN、EGFR反义ODN均能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖。