基于ROS-NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡探究利拉鲁肽对糖尿病肾病大鼠肾损伤的保护作用

目的 探究利拉鲁肽对糖尿病肾病大鼠的作用及其调控机制。方法 采取多次小剂量ip链脲佐菌素40 mg/kg构建糖尿病肾病大鼠模型,分为模型组、利拉鲁肽组、活性氧簇（ROS）抑制剂（NAC）组、利拉鲁肽+NAC组,另设置对照组,每组10只。利拉鲁肽组大鼠sc 200μg/(kg·d)的利拉鲁肽;NAC组大鼠ip 20 mg/(kg·d)的NAC;利拉鲁肽+NAC组大鼠sc 200μg/(kg·d)的利拉鲁肽的同时ip 20 mg/(kg·d)的NAC;对照组和模型组大鼠sc等量的生理盐水,1次/d,连续治疗4周。全自动分析仪检测24 h尿微量蛋白排泄率（MAER）;血糖仪测定空腹血糖（FBG）;试剂盒检测血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）水平;HE染色、Masson染色观察肾组织病理变化;二氢乙锭（DHE）荧光探针检测肾组织活性氧（ROS）水平;化学比色法检测肾组织丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性;Western blotting检测肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和焦亡相关蛋白表达。结果 与模型组相比,利拉鲁肽组和NAC组大...     

槐杞黄颗粒对糖尿病肾病大鼠及高糖环境下肾细胞的保护机制

观察槐杞黄颗粒对糖尿病肾病（DKD）大鼠及高糖环境下肾细胞的保护机制。【方法】（1）体内实验：采用高脂肪 饲料喂养结合链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法构建DKD大鼠模型。实验设正常组,模型组,槐杞黄颗粒低、中、高剂量组及氯 沙坦组,每组10只大鼠。给予对应处理后,测定尿微量白蛋白、空腹血糖、血清肌酐、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇等 主要生化指标,分别采用苏木素-伊红（HE）染色、高碘酸希夫（PAS）染色和马松（Masson）染色观察肾组织病理改变。（2）体外 实验：构建高糖诱导肾小管上皮细胞HK2模型。实验分为正常糖组、高糖组和槐杞黄颗粒组及甘露醇组。给予对应处理后, MTT法检测细胞增殖情况,采用2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）法和MitoSOX/Hoechst 33342染色法分别检测细 胞内、线粒体活性氧簇（ROS）的生成,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测炎症小体相关蛋白 NOD 样受体蛋白 3（NLRP3）、 裂解型半胱天冬酶 3（cleaved-Caspase-3）和白细胞介素 1β（IL-1β）及肾纤维化相关蛋白纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原蛋 白（Col Ⅳ）的表达。【结果】（1）在体内实验中,槐杞黄颗粒可显著改善DKD大鼠尿微量白蛋白排泄、血清肌酐异常,高血糖 和脂质代谢紊乱,减轻肾脏组织病理损害;（2）在体外实验中,槐杞黄颗粒可显著抑制高糖诱导HK2细胞增殖和ROS的过量 产生,降低高糖诱导HK2细胞NLRP3炎症小体的激活和肾纤维化相关蛋白FN和Col Ⅳ的表达。【结论】 槐杞黄颗粒可有效改 善DKD大鼠,其对高糖环境下肾细胞的保护机制可能与抑制ROS生成、NLRP3炎症小体活化及纤维化蛋白高表达有关。     

艳山姜挥发油通过调控巨噬细胞CD36和ABCA1表达抑制泡沫细胞的形成

目的:观察艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞的抑制作用,并探索其机制。方法:使用佛波酯(PMA,100μg·L^-1)诱导人白血病单核细胞(THP-1)24 h后形成巨噬细胞,实验分为4组,分别为空白组(无血清RPMI 1640),模型组(80 mg·L^-1ox-LDL),艳山姜挥发油低剂量组(80 mg·L^-1ox-LDL+4μg·L^-1艳山姜挥发油),艳山姜挥发油高剂量组(80 g·L^-1ox-LDL+20μg·L^-1艳山姜挥发油)。噻唑蓝(MTT)比色法检测艳山姜挥发油对巨噬细胞的活性的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞中白细胞分化抗原36(CD36)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测巨噬细胞内胆固醇酯含量,油红O染色法检测巨噬细胞中脂质小滴的含量。结果:艳山姜挥发油对巨噬细胞无毒性。与空白组比较,模型组的巨噬细胞内脂滴和胆固醇酯的含量显著增加(P<0.01),CD36蛋白表达显著上升(P<0.01),ABCA1蛋白表达无显著变化;与模型组比较,艳山姜挥发油显著抑制巨噬细胞中脂滴和胆固醇酯的含量(P<0.01),下调CD36的蛋白表达(P<0.01),上调ABCA1蛋白的表达(P<0.01),艳山姜挥发油可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化。结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导的巨噬细胞向泡沫细胞的形成具有抑制作用,该药理作用与艳山姜挥发油下调巨噬细胞CD36和上调ABCA1蛋白的表达有关。     

INSM1、CD200、突触素在胰腺神经内分泌肿瘤诊断中的作用及实用性探讨

目的 探讨INSM1、CD200、突触素在胰腺神经内分泌肿瘤诊断中的作用。方法 以免疫组织化学法为基础对2019年10月—2020年1月山东省聊城市第二人民医院参与研究的66例胰腺神经内分泌肿瘤患者进行病理诊断,选取60例胰腺非神经内分泌肿瘤患者,检测INSM1、CD200、突触素的表达,通过病理结果为金标准对INSM1、CD200、突触素及其组合在胰腺神经内分泌肿瘤中的诊断意义进行分析。结果 胰腺神经内分泌肿瘤中,INSM1、CD200、突触素阳性率高于胰腺非神经内分泌肿瘤,差异有统计学意义(χ²=58.570、67.120、64.156,P<0.05);INSM1、CD200、突触素对胰腺神经内分泌肿瘤的诊断效能差异无统计学意义(P>0.05),三者联合检测时,诊断的敏感度、特异度及准确度为98.48%、100.00%、99.21%,明显高于单项指标的诊断效能,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 INSM1与CD200、突触素是胰腺神经内分泌肿瘤临床诊断中的新型标志物,其对胰腺神经内分泌肿瘤得到有效诊断有积极意义,将三者联合应用,能进一步...     

活性氧簇与糖尿病肾病

活性氧簇(ROS)是高血糖引起肾脏病变的重要介导因素。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶途径和线粒体途径及晚期糖基化终末产物均参与高血糖状态下ROS的产生。ROS可激活蛋白激酶C(PKG)，而PKC通过活化蛋白激酶K，转录因子如核因子-κB、活化蛋白-1来达到对糖尿病时肾脏的损伤。抗氧化剂可能对糖尿病肾病的防治有作用。     

阿司匹林抗高糖诱导内皮细胞衰老过程中对一氧化氮-一氧化氮合酶系统的影响

目的 探讨阿司匹林是否通过影响一氧化氮（NO）-一氧化氮合酶（NOS）系统发挥抗高糖诱导的内皮细胞衰老的作用. 方法 人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分别于正常糖浓度培养液（5.5 mmol/L）、高糖培养液（33 mmol/L）、含阿司匹林（0.01～1mmol/L）培养液及含L-NAME（300 μmol/L）培养液中培养48 h.采用β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色鉴定衰老细胞,流式细胞仪检测细胞内活性氧簇（ROS）水平.Griess法检测细胞总NO水平,荧光酶标仪检测细胞内NOS活性.Westernblot分析eNOS蛋白及eNOS人丝氨酸（Ser-1177）蛋白表达. 结果 高糖作用内皮细胞48 h后与正常糖浓度相比,SA-β-gal阳性细胞数明显增多.阿司匹林剂量依赖性地减少SA-β-gal阳性细胞数,降低ROS的水平,升高NO的水平、总NOS活性和eNOS Ser-1177蛋白表达（P＜0.05）.L-NAME（NOS的抑制剂）能完全抑制高糖环境下阿司匹林的上述作用（P＜0.05）.各组间eNOS总蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）. 结论 高糖环境下阿司匹林通过提高细胞NOS活性而升高NO水平,降低氧化应激反应而发挥抗衰老作用.     

NADPH氧化酶与糖尿病肾病

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶是许多非吞噬细胞中活性氧簇(ROS)产生的主要来源。生理情况下,NADPH氧化酶处于低表达与低活性状态,但在细胞因子、高糖、高脂等作用下,它能被激活,产生更高水平的ROS。ROS作为氧化应激的中心环节,参与糖尿病肾病病理生理过程。NADPH氧化酶通过其产生的ROS,可改变肾脏血液动力学、影响细胞外基质的重构、激活细胞内信号转导等,促进糖尿病肾病的发生、发展。调节酶复合物的活性以减弱肾脏的氧化应激,有望成为延缓肾功能损害的有效治疗措施。     

高迁移率族蛋白B1对大鼠局灶脑缺血/再灌注后大脑皮质梗死周围区神经干细胞增殖的影响

 目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对局灶脑缺血/再灌注大脑皮质梗死周围区神经干细胞增殖的影响。方法：选取雄性SD大鼠48只,分为假手术组、模型组、RNA干扰组和阴性干扰组。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,缺血1 h再灌注7 d时观测。用携带大鼠HMGB1 shRNA的慢病毒载体介导RNA干扰抑制脑内HMGB1的表达,通过免疫荧光双标记HMGB1/GFAP和Western blotting法检测RNA干扰效果。通过免疫荧光双标记5-溴脱氧尿嘧啶（BrdU）/神经巢蛋白（nestin）检测大脑皮质梗死周围区神经干细胞的增殖。结果：与假手术比较,再灌注7 d时,模型组大脑皮质梗死周围区HMGB1蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,RNA干扰有效抑制HMGB1蛋白的表达（P<0.05）。与假手术组比较,模型组的BrdU/nestin双标记细胞明显增多（P<0.05）;与模型组比较,RNA干扰组的BrdU/nestin双标记细胞明显减少（P<0.05）。结论：局灶脑缺血/再灌注后大脑皮质梗死周围区HMGB1蛋白表达水平升高可促进该部位的神经干细胞增殖。     

分化抗原gp42在人免疫细胞的表达

目的　明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法　用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果　制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论　gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。     

新的识别人活化B细胞分化抗原5C5单克隆抗体（5C5－G＿1）的制备和鉴定

新制备的抗人活化Ｂ细胞分化抗原５Ｃ５单克隆抗体５Ｃ５－Ｇ＿１经Ｗｅｓｔｅｒ印迹分析表明，该分化抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（还原条件下）显示五条带，分子量分别为９２ｋＤ、５２ｋＤ±（两条）、４０ｋＤ和２０ｋＤ。用单抗５Ｃ５和单抗５Ｃ５－Ｇ＿１的混合物，从３Ｄ５细胞的λｇｔｌｌｃＤＮＡ文库中筛选到７个阳性ｃＤＮＡ克隆。