LincRNA-p21敲减对胃癌细胞生长和转移的影响及其作用机制

目的：探讨LincRNA-p21敲减对胃癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测胃癌组织、癌旁组织以及3种胃癌细胞（MGC-803、MKN-45和SGC-790）和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中LincRNA-p21mRNA表达水平。以MGC-803细胞作为研究对象,实验分为sh-NC组、sh-LincRNA-p21组和AG490+sh-LincRNA-p21组。sh-NC组MGC-803细胞采用慢病毒感染sh-NC;sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞采用慢病毒感染sh-LincRNA-p21;AG490+sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞采用慢病毒感染sh-LincRNA-p21后,再采用10 μg·L^-1 AG490处理细胞。采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入法检测各组MGC-803细胞EdU掺入百分比,CCK-8法检测各组MGC-803细胞活性,Transwell法检测各组MGC-803细胞迁移数和侵袭数,Western blotting法检测sh-NC组和sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞中p-JAK1、p-STAT3和p-STAT5蛋白表达水平。将sh-NC组和sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞移植入BALB/c裸鼠颈部皮下成瘤,检测瘤体体积和质量。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中LincRNA-p21mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;与GES-1细胞比较,MGC-803、MKN-45和SGC-790细胞中LincRNA-p21表达水平均明显降低（P<0.01）。与sh-NC组比较,sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞EdU掺入百分比、细胞活性、细胞迁移数和侵袭数、p-JAK1、p-STAT3和p-STAT5蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）;与sh-LincRNA-p21组小鼠比较,AG490+sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞活性、细胞迁移数和侵袭数均明显降低（P<0.05或P<0.01）。裸鼠成瘤实验,与sh-NC组比较,sh-LincRNA-p21组小鼠瘤体体积和质量均明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：敲减LincRNA-p21可明显促进胃癌细胞的生长与转移,且该促进作用可能与其促进JAK-STAT信号通路活性有关。     

三七总皂苷对慢性心力衰竭大鼠心功能的改善作用及其机制

目的：观察三七总皂苷对慢性心力衰竭（CHF）模型大鼠心功能的改善作用,探讨其可能机制。方法：采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型。将60只模型大鼠随机分为模型组,阳性对照组,低、中和高剂量三七总皂苷组,每组12只;另取12只大鼠作为假手术组。彩色多普勒超声检测大鼠左室舒张末期内径（LVEDD）、左室收缩末期内径（LVESD）、左室后壁舒张期厚度（LVPWD）、左室射血分数（LVEF）、心输出量（CO）、左室舒张末压（LVEDP）、左室收缩压（LVSP）、左心室压力最大上升速率（+dp/dt max）和左心室压力最大下降速率（-dp/dt max）,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态表现,TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,Western blotting法检测各组大鼠心肌组织中细胞外信号调节激酶（ERK）、磷酸化ERK （p-ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK （p-JNK）、p38和p-p38蛋白表达水平,ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、LVEDP和-dp/dt max明显升高（P<0.05）,LVEF、CO、LVSP及+dp/dt max明显降低（P<0.05）;与模型组比较,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠LVEDD、LVESD、LVPWD、LVEDP和-dp/dt max明显降低（P<0.05）,LVEF、CO、LVSP和+dp/dt max明显升高（P<0.05）。模型组大鼠心肌细胞肥大、坏死,心肌纤维排列不规则,出现炎性细胞浸润,大量心肌细胞凋亡,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠心肌组织结构较完整,心肌细胞肥大减轻,心肌纤维排列疏松。与假手术组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,血清TNF-α和IL-6水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较,阳性对照组和低、中及高剂量三七总皂苷组大鼠心肌细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,血清TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05）。结论：三七总皂苷可通过下调心肌组织中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白表达水平,抑制血清炎性因子分泌,从而抑制心肌细胞调亡,对CHF有一定的改善作用。     

双氢青蒿素对甲型流感病毒H1N1诱导人支气管上皮细胞TNF-α和IL-6表达的影响及机制研究

  目的  探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）A/PR/8/34（H1N1）诱导人支气管上皮细胞（BEAS-2B）促炎症因子和细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号通路蛋白表达的影响。  方法  采用不同浓度的DHA（即0、12.5、25、50和100 μmol/L）作用BEAS-2B细胞24 h ,CCK8法检测DHA对BEAS-2B细胞活性的影响。IAV吸附BEAS-2B细胞1 h ,分别采用不同浓度的DHA（低、中、高浓度DHA ,即12.5、25和50 μmol/L）作用24 h,同时设置正常对照组和IAV组。采用实时荧光定量PCR法（real time quantitative PCR, RT-qPCR）和酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）的mRNA和蛋白表达水平,蛋白质印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK（phospho-ERK, p-ERK）蛋白表达水平。采用特异性ERK激动剂（ERK agonist,20 ng/mL）作用BEAS-2B细胞（分组为正常对照、IAV、DHA、DHA+IAV、ERK agonist、DHA+IAV+ERK agonist组）24 h,观察对DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α、IL-6和p-ERK表达的影响。  结果  DHA浓度在12.5、25、50 μmol/L时,BEAS-2B细胞存活率与正常对照组比较差异无统计学意义;与正常对照组比较,IAV组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白及p-ERK蛋白表达水平增高 (P<0.05),与IAV组比较,IAV+ DHA低、中、高浓度组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6、p-ERK蛋白表达水平呈剂量依赖性的下降(P<0.05);而ERK激动剂减弱了DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞ERK信号通路蛋白p-ERK表达和促炎症因子TNF-α、IL-6的分泌。  结论  DHA可通过ERK信号通路抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α和IL-6的表达。     

HOTAIR通过STAT3/NANOG信号通路调控脑胶质瘤干细胞的增殖与分化

【摘要】目的 探讨HOTAIR通过STAT3/NANOG信号通路对脑胶质瘤干细胞（BGSCs）的增殖与分化的调控作用。方法 U251干细胞分别转入siHOTAIR（干扰组）及Control si序列（空载组）,设置空白对照组。RT qPCR、MTT及流式细胞术检测各组细胞HOTAIR mRNA表达、细胞增殖及细胞周期分布情况;RT qPCR及Western blot检测诱导分化后CD133、胶质酸性纤维蛋白（GFAP）、β 微血管蛋白Ⅲ（β TublinⅢ）及髓鞘碱性蛋白（MBP）阳性细胞占比、白血病抑制因子（LIF）、STAT3、NANOG mRNA和蛋白及pSTAT3蛋白表达情况。结果 与空白对照组和空载组相比,干扰组HOTAIR基因相对表达量下调,OD值降低,细胞周期G0/G1期占比降低,S、G2/M期占比升高,诱导分化后CD133、GFAP、β TublinⅢ及MBP阳性细胞占比均较高,LIF、NANOG mRNA和蛋白相对表达量及pSTAT3/STAT3均较低（P＜005）;空白对照组与空载组上述各项指标比较差异均无统计学意义（P＞005）。结论 沉默HOTAIR基因可有效抑制BGSCs的增殖、促进分化进程,其调控机制可能与抑制LIF磷酸化激活STAT3,下调NANOG有关。     

醋酸甲羟孕酮联合甲硝唑对子宫内膜炎大鼠炎性因子及TLR4/NFκB通路的影响

【摘要】目的 研究醋酸甲羟孕酮联合甲硝唑对子宫内膜炎大鼠炎性因子及TLR4/ NF κB信号通路的影响。方法将40只SPF级SD大鼠随机分为5组,每组8只。空白组不做处理,其余4组均先构建子宫内膜炎大鼠模型,造模成功后的第2天起,模型组（不给药）,其余3个组（醛酸甲羟孕酮组、甲硝唑组、联合用药组）分别按醋酸甲羟孕酮（4 mg〖DK〗·kg-1〖DK〗·d-1）、甲硝唑（002 g〖DK〗·kg-1〖DK〗·d-1）、醋酸甲羟孕酮联合甲硝唑（4 mg〖DK〗·kg-1〖DK〗·d-1+002 g〖DK〗·kg-1〖DK〗·d-1）灌胃治疗,连续14 d后处死,采样待检。HE染色观察子宫组织病理学变化;免疫组化检测子宫组织MMP 2、MMP 9表达;ELISA检测血清IL 1、PGE2、MDA、NO、SOD水平;Western Blot检测子宫组织NF κB p65、TLR4表达。结果 不同给药组均可减轻子宫内膜炎大鼠子宫组织病理损伤;与空白组比较,模型组大鼠IL 1、PGE2、MDA、NO、NF κB p65、TLR4表达明显升高,SOD、MMP 2、MMP 9表达明显降低（均P＜005）;与模型组比较,联合用药可明显降低子宫内膜炎大鼠IL 1、PGE2、MDA、NO、NF κB p65、TLR4表达,明显升高SOD、MMP 2、MMP 9表达,且联合用药组IL 1表达明显低于甲硝唑组,TLR4表达明显低于醋酸甲羟孕酮组及甲硝唑组,MMP 2表达明显高于甲硝唑组,MMP 9表达明显高于醋酸甲羟孕酮组及甲硝唑组（均P＜005）。结论 醋酸甲羟孕酮联合甲硝唑通过影响TLR4/NF κB信号通路,改善炎性指标,发挥对子宫内膜炎大鼠的治疗作用。     

FLAIR血管高信号征在大脑中动脉供血区急性脑梗死中的临床价值

目的探讨磁共振液体衰减反转恢复(FLAIR)序列高信号血管征(HVS)在评估大脑中动脉供血区急性脑梗死患者病情严重程度及预后中的应用价值。方法回顾性分析大脑中动脉供血区急性脑梗死的患者共52例。根据T2 FLAIR图像上血管高信号征是否存在分为有血管高信号征组和无血管高信号组。比较两组患者弥散序列(DWI)上梗死体积大小、入院时及治疗10天后NIHSS评分、早期神经功能恢复情况及基本临床资料。结果大脑中动脉供血区急性缺血性脑梗死患者52例中无远端HVS组35例(67%)和远端HVS组17例(33%)中,梗死体积大小分别为(89.74±28.82)和(73.15±26.37),入院时NIHSS评分分别为16(6~27)分及10(2~21)分,入院10天NIHSS评分分别为13(6-26)和8(0~19)分,无远端HVS组与远端HVS组差异存在统计学意义(P<0.05)。梗死侧大脑中动脉狭窄程度分为轻度狭窄、明显狭窄、闭塞,HVS组的发生率分别为19例(42%)、11例(73%),16例(89%)。HVS组中大脑中动脉严重狭窄或闭塞者27例,占HVS阳性组77%,血管高信号征阴性组中大脑中动脉严重狭窄或闭塞者5例,占HVS阴性组29%,两组之间存在显著差异(P<0.05)。结论 T2 FLAIR序列HVS是大脑中动脉供血区急性脑缺血性梗死重要的影像学征象。有远端HVS的患者急性梗死灶体积较小,NIHSS评分较低,临床预后较好。责任血管狭窄程度越严重,HVS的出现率越高。大脑中动脉区HVS联合MRA有利于临床评估脑梗死的病变范围、血管病变的大致位置、血管的狭窄程度,可指导临床进行早期干预,改善患者的预后。     

VEGFR2促进脑胶质瘤干细胞增殖和生长的机制研究

[目的]探讨VEGFR2促进脑胶质瘤干细胞增殖和生长的机制。[方法]通过19例新鲜分离的人脑胶质细胞瘤(Glioblastoma multiforme, GBM)标本进行组织分离、细胞培养,然后对培养的细胞进行慢病毒转染后进行BALB/c(nu/nu)小鼠成瘤实验,并获得神经胶质细胞瘤样本(T556, T1966, T4121, T3691)。分别对分离的人GBM细胞和异种移植神经胶质细胞瘤样本细胞进行流式细胞术CD133干细胞分选及VEGFR2、免疫组化、免疫荧光检测等分析、检测。[结果]CD133~+细胞表面VEGFR2的表达与CD133~-对照组相比富集(CD133~+阳性率19.6%而CD133~-对照的阳性率为4.7%;P<0.001 7);表面VEGFR2阳性的肿瘤细胞比例不同,从1.4%到25.9%(平均13.8±8.3%)不等。对石蜡包埋标本进行免疫组化分析发现GBM细胞表面及细胞浆均有分布VEGFR2,而胞浆VEGFR2则较为显著。对人GBM活检冰冻切片进行的免疫荧光染色证实VEGFR2细胞群聚集靠近血管结构;进一步对标本进行免疫荧光定位、免疫共沉淀和细胞表面蛋白生物素化实验发现VEGFE、VEGFR2和NRP1及磷酸化p-VEGFR2和增值标记蛋白Neuropilin-1在恶性脑胶质瘤病灶和周围正常组织及脑小血管周围的差异表达。[结论]VEGFR2优先表达于CD133人胶质瘤干细胞(GSC)的细胞表面及恶性脑胶质瘤病灶小血管周围,其增殖、生长能力和致瘤性,可能部分依赖于通过VEGFR2-Neuropilin-1 (NRP1)的信号传递,可能在GBM的增殖和生长过程中发挥一定作用。