二氮嗪对异丙肾上腺素诱发的大鼠心肌缺血损伤的保护作用

目的 :评价线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道 (mitoKATP)开放剂二氮嗪 (diazoxide ,Diaz)对大鼠心肌缺血损伤的保护作用。　　方法 :选用Wistar大鼠 3 6只 ,分为对照组 8只、异丙肾上腺素 (ISO)组 10只、二氮嗪 10mg/kg组 9只和二氮嗪2 0mg/kg组 9只。用ISO 5mg/kg皮下注射复制大鼠心肌缺血损伤模型 ,2 4h后采血测定血清乳酸脱氢酶 (LDH)和肌酸激酶 (CK)活性及乳酸含量 ,同时监测心电图、血压和心率的变化 ,并观察心肌组织形态学改变。　　结果 :ISO引起大鼠心肌缺血损伤时 ,ISO组与对照组比较 ,血清LDH、CK活性和乳酸含量明显增加 ,有极显著性差异 (P <0 0 1) ,组织形态学也发生明显改变 ,心肌细胞损伤严重 ,有极显著性差异 (P <0 0 1)。预先口服二氮嗪 10～ 2 0mg/kg可逆转血清LDH、CK和乳酸的升高 ,有显著性差异 (P <0 0 5～ 0 0 1) ,减轻心肌细胞损伤程度。二氮嗪 10mg/kg不影响收缩压和心率。　　结论 :二氮嗪对ISO诱发的大鼠心肌缺血损伤具有保护作用     

二氮嗪强化Celsior液可安全延长供心低温保存时限

目的 评价二氮嗪(Diazoxide,DE)强化Celsior液对移植鼠供心长时程(10 h)低温保存的有效性,并探讨其可能作用机制.方法 采用改良Heron法大鼠颈部异位心脏移植模型.SD近亲大鼠随机分为3组,(1)对照组:单纯Celsior液保存鼠心;(2)实验组:30umol/L DE+Celsior液保存鼠心;(3)拮抗组:100~enol/L 5-lid+30tnnol/LDE+C~ior液保存鼠心5h;前两组根据保存时间不同分为5、10h组.观察移植心脏复跳情况,并分别于复跳后5 trfin、l周、3个月时留取标本,检测心肌MDA含量、SOD活性、心肌pfl'p酶、TNF-a、F~/FasL、Caspase-3、AI等指标以及超微结构检查.结果 (1)相同保存时间,实验组与对照组比较,术后5 rrfin和l周各指标均有明显优越性;术后3个月时各指标亦较佳,心肌MDA含量低下、SOD和N且'.K+ATP 酶活性高及FasL、TNF-a基因表达低差异有统计学意义;(2)孓HD消除了实验组中添加DE的优势作用;(3)实验10 h组与对照5 h组比较,各指标均稍有优越性;(4)DE各组和Cetsior 5h组心肌超微结构保护相对较佳:肌纤维排列整齐,肌节清,线粒体肿胀不明显,嵴结构较为清楚;celsior 10h组心肌肌纤维疏松,部分区域肌丝肌节溶解,线粒体肿胀较明显,嵴模糊.结论 DE强化Celsior液长时程冷保存鼠供心可较国际公认4-6h延长至1Oh,仍安全有效.其主要原因可能与DE介导mito-KATrC开放,早期阶段抑制氧化应激引起的细胞凋亡、阻止细胞内钙超载、降低凋亡相关基因表达等对抗心肌缺血再灌注损伤的心肌保护作用有关.     

二氮嗪对大鼠肠道缺血再灌注保护作用的研究

目的 探讨二氮嗪能否在大鼠肠道缺血再灌注模型中发挥保护作用。方法 将24只8周龄健康雌性SD大鼠按随机数字表法分为3组（每组8只）：空白组、模型组和二氮嗪组。二氮嗪组在小肠缺血第30 min时腹腔注射二氮嗪（10 mL/kg）;模型组在相同时间点腹腔注射9 g/L盐水（10 mL/kg）。小肠缺血持续30 min,再灌注2 h后取材。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中丙二醛（MDA）水平;采用Western blot蛋白质印迹法检测肠黏膜紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin含量以及肠黏膜内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP-78)、半胱天冬蛋白酶12(Caspase-12)含量。结果 模型组血清MDA水平高于空白组及二氮嗪组,空白组与二氮嗪组血清MDA水平未见明显差异。二氮嗪组肠黏膜Claudin-1水平高于空白组及模型组,且差异有统计学意义。3组肠黏膜Occludin及GRP-78水平未见明显差异。二氮嗪组及模型组肠黏膜上皮细胞Caspase-12水平低于空白组,两组比较差异有统计学意义。结论 二氮嗪能通过降低血清MDA水平,提高大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋...     

K_(ATP)通道开放剂对氧糖剥夺诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及AIF信号通路的影响

目的观察KA TP通道开放剂对氧糖剥夺诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并进一步探讨K ATP通道开放剂对凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)信号通路的影响。方法取传代后3d的SH-SY5Y细胞,分为A组(正常对照组)、B组(氧糖剥夺组)、C组(二氮嗪处理组)、D组(二氮嗪+5-羟葵酸处理组)。采用MTT方法检测细胞活力,应用流式检测细胞凋亡,应用Western-blot及免疫荧光染色检测AIF蛋白表达变化及移位。结果与正常对照组细胞相比,氧糖剥夺后细胞活力明显降低,100及200μmol/L的二氮嗪处理以后细胞活力明显升高,200μmol/L二氮嗪升高细胞活力更明显。与正常对照组细胞相比,氧糖剥夺后细胞凋亡率明显增高,二氮嗪处理以后细胞凋亡率明显下降。A,B,C,D四组AIF蛋白总量表达无显著性的差异(P0.05);在正常对照组,AIF蛋白以胞浆表达为主,氧糖剥夺导致AIF发生了明显的细胞核转移,二氮嗪处理显著减少氧糖剥夺诱导的AIF发生的细胞核转移。结论 KA TP通道开放剂二氮嗪能明显增加氧糖剥夺后SH-SY5Y细胞活力,减少细胞凋亡,减少氧糖剥夺诱导的AIF发生的细胞核转移。     

二氮嗪预处理联合低温对大鼠海马神经元缺氧复氧时Bcl-2和Bax表达的影响

Objective To investigate the effects of diazoxide preconditioning combined with hypothermia on the expression of Bcl-2 and Bax during anoxia-reoxygenation in rat hippocampal neurons. Methods The hippocampal neurons isolated from newborn SD rats ( < 24 h, weighing 5-6 g) were inoculated in the culture dish or 96 well plates. The hippocampal neurons were randomly assigned into 8 groups and each group contained 36 wells or 12 dishes of neurons: normal temperature .group (group NT), diazoxide preconditioning (DP) + NT group (group DP+ NT), mild hypothermia group (group MiH) , DP + MiH group (group DP + MiH) , moderate hypothermia group (group MoH), DP + MoH group (group DP + MoH), deep hypothermia group (group DeH) and DP+DeH group (group DP+ DeH). In group DP + NT, DP + MiH, DP+ MoH and DP + DeH, diazoxide was added to the culture media, the final concentration was 100 μmol/L,and the neurons were incubated for 1 h once a day for 2 d, and then subjected to 4 h of hypoxia at 37, 34, 30 and 22℃ , respectively, followed by 48 h of reoxygenation at 37℃ . The neuronal viability, apoptotic rates and expression of Bcl-2 and Bax were determined and the ratio of Bcl-2/Bax was calculated. Results The neuronal viability was significantly higher, apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP + NT, MiH, MoH and DeH than in group NT ( P < 0.05). The neuronal viability was significantly higher, early apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP + MiH, DP + MoH and DP+ DeH than in group DP + NT ( P < 0.05), but there was no significant difference in the late apoptotic rate between group DP + MiH, DP + MoH, DP + DeH and DP + NT ( P > 0.05). The neuronal viability was significantly higher, early apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP+ MiH and DeH than in group MiH (P < 0.05), but there was no significant difference in the late apoptotic rate between group DP + MiH, DeH and MiH, and no significant difference in the above indices between group MoH and MiH (P > 0.05) . The neuronal viability was significantly higher, early apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP+ DeH than in group DP+ MiH ( P < 0.05). Conclusion Diazoxide preconditioning combined with hypothermia can attenuate the anoxia-reoxygenation injury in rat hippocampal neurons possibly through correcting the imbalance of Bcl-2 and Bax and inhibiting the early apoptosis of hippocampal neurons.     

磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/内皮型一氧化氮合酶信号通路在二氮嗪后处理缺血/再灌注大鼠心肌中的作用

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/内皮型一氧化氮合酶(phosphatidylinositol-3-kinase/protein serine threonine kinase/endothelial nitric oxide synthase,PI3K/Akt/eNOS)信号通路在二氮嚷后处理大鼠在体心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用. 方法 40只雄性SD大鼠完全随机分为5组,每组8只:假手术组(S组)、I/R组、二氮嗪组(D组)、PI3K抑制剂渥蔓菁霉素组(W组)和二氮嗪+渥蔓菁霉素组(DW组).结扎左冠状动脉前降支30 min、再开放120 min,建立在体心肌I/R损伤模型,S组不结扎.再灌注5 min前,5组依次分别经股静脉输入0.1％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)1 ml/kg、0.1％ DMSO 1 ml/kg、二氮嗪7 mg/kg、渥蔓菁霉素15 μg/kg,DW组于输入二氮嗪前5 min输入渥蔓菁霉素;所有药物均输注15 min.再灌注末,测定血浆心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)浓度,苏木精-伊红(HE)染色观察心肌病理变化,免疫组化分析eNOS的表达情况. 结果 与S组比较,其余4组cTnI显著增高(P＜0.01),心肌明显损伤,eNOS表达增高(P＜0.05或P＜0.01).与I/R组比较,D组和DW组cTnI[(36.5±5.2) μg/L与(44.5±4.5)μg/L vs (64.7±11.1) μg/L]明显降低(P＜0.01),心肌病理改变减轻,eNOS表达增高[(0.515±0.136)％与(0.394±0.100)％ vs (0.241±0.077)％](P＜0.01).与D组比较,DW组cTnI明显增高[(44.5±4.5) μg/L vs (36.5±5.2) μg/L] (P＜0.05),心肌损伤加重,eNOS表达降低[(0.394±0.100)％ vs (0.515±0.136)％] (P＜0.01). 结论 二氮嗪后处理减轻大鼠心肌I/损伤的作用部分与PI3K/Akt/eNOS信号通路激活有关.     

不同灌注保存方法对猪离体供心保护作用的比较

目的比较不同灌注保存方式对离体猪心的保护作用。方法以36只健康雄性巴拿马小香猪为实验对象,取出供心后根据保存技术不同分为不保存组、单纯浸泡组和以50 mL灌注容量为基础并递增,间隔时间为2 h的50,100,150 mL,200 mL间断灌注组,每组各6例。心脏灌注液和保存液均为二氮嗪强化的Celsior液（含二氮嗪30μmol/L）,保存温度为4℃,保存时间10 h。比较各组左心室心肌细胞凋亡指数（AI）、心肌组织ATP含量（ATPC）、心肌含水量（MWC）和电镜心肌超微结构。结果心脏保存后,与不保存组比较,心肌细胞发生较多凋亡、心肌组织ATP C明显降低以及出现不同程度的心肌水肿损伤等。单纯浸泡组AI最高（34.80±0.14）%,ATP C水平最低（1.85±0.09）nmol/mg,MWC最高（82.03±0.11）%。200 mL间断灌注组AI最低（12.35±0.10）%,ATP C水平最高（2.32±0.03）nmol/mg,MWC最低（77.12±0.85）%;电镜心肌超微结构显示,不保存组的心肌结构最为正常,其次为150,200 mL间断灌注组。结论在长时间心脏保存中,间断灌注保存技术对心肌的保护作用优于单纯低温浸泡保存技术;间隔2 h灌注1次,每次灌注容量为200 mL的间断灌注保存技术对心肌的保护效果较好。     

二氮嗪与格列吡嗪影响2型糖尿病肥胖大鼠胰岛功能的比较

60只SD大鼠分别给予正常饲料和高脂饲料喂养,8周后高脂组中选取肥胖大鼠给予腹腔内注射小剂量链脲佐菌素制备糖尿病模型.成模大鼠分为安慰剂、二氮嗪和格列吡嗪组,治疗4周.结果显示,2型糖尿病模型肥胖大鼠体重、胰岛素、胰岛素敏感性显著低于高脂对照组(P＜0.01).与格列吡嗪相似,二氮嗪可降低血糖,改善葡萄糖耐量(P＜0.01),2组之间无显著差异(P＞0.05).二氮嗪组胰岛的形态基本完整,胰岛细胞凋亡率显著低于糖尿病组(P＜0.05),同格列吡嗪组相比无显著差异(P＞0.05).提示二氮嗪作为KATP通道开放剂,能促进胰岛细胞休息,减轻胰岛素分泌负荷,改善2型糖尿病肥胖大鼠的胰岛功能.     

二氮嗪对氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用

目的探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)开放剂二氮嗪(DZ)能否减轻氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元的氧化应激损伤。方法随机将成年雄性Wistar大鼠84只,分为对照组、癫痫组(PILO组)、DZ组(DZ组)、DZ+5-羟基癸酸(5-HD)组(DZ+5-HD组),后两组用氯化锂-匹鲁卡品制作癫痫持续状态模型之前,DZ组用DZ 5 mg/kg,DZ+5-HD组先用5-HD 8 mg/kg,再用DZ 5 mg/kg,皆腹腔内注射。观察各组大鼠行为学变化,癫痫发作后48 h,用多聚甲醛灌注取脑,石蜡包埋切片,HE和Nissl染色观察大鼠海马神经元的损伤情况。分别在致痫后24 h、48 h断头取脑,分离海马,检测海马中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。提取海马总DNA,检测海马DNA 8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。结果与对照组比较,PILO组大鼠HE和Nissl染色显示海马CA1区和CA3区神经元损伤和丢失明显,海马中MDA的含量升高,SOD、GSH-Px的活力下降,海马DNA 8-OHdG的含量升高(P均<0.05);与PILO组及DZ+5-HD组比较,DZ组大鼠癫痫发作的潜伏期延长,神经元损伤和丢失明显减轻,癫痫发作急性期的死亡率降低,DZ能明显降低大鼠癫痫发作后海马中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px的活力,降低海马DNA 8-OHdG的含量(P均<0.05)。DZ的作用能被5-HD阻断。结论 DZ可减轻大鼠癫痫发作后的氧化应激损伤,对癫痫发作具有神经保护作用。     

二氮嗪预处理联合低温对大鼠海马神经元缺氧复氧时Bcl-2和Bax表达的影响

目的 二氮嗪预处理联合低温对大鼠海马神经元缺氧复氧时Bcl-2和Bax表达的影响.方法 清洁级SD大鼠,出生<24 h,体重5～6 g,离体培养海马神经元,接种于培养皿或96孔板.海马神经元随机分为8组,每组36孔或12皿:常温组(NT组)、二氮嗪预处理+常温组(DP+NT组)、浅低温组(MiH组)、二氮嗪预处理+浅低温组(DP+MiH组)、中低温组(MoH组)、二氮嗪预处理+中低温组(DP+MoH组)、深低温组(DeH组)和二氮嗪预处理+深低温组(DP+DeH组).DP+NT组、DP+MiH组、DP+MoH组和DP+DeH组培养液中加入二氮嗪,终浓度为100μmol/L,孵育1 h,1次/d,连续2 d,随后分别在37、34、30和22℃下缺氧4 h,37℃复氧48 hoNT组、MiH组、MoH组和DeH组分别在37、34、30和22℃下行缺氧4 h,37℃复氧48 h.于复氧48 h时测定海马神经元活力、凋亡率和Bcl-2和Bax 的表达水平,计算Bcl-2/Bax.结果 与NT组比较.DP+NT组、MiH组、MoH组和DeH组海马神经元活力升高,凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl/21Bax升高(P<0.05);与DP+NT组比较,DP+MiH组、DP+MoH组和DP+DeH组海马神经元活力升高,早期凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax 表达下调,Bcl-21Bax升高(P<0.05),晚期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);与MiH组比较,DP+MiH组和DeH组海马神经元活力升高,早期凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bel-2/Bax升高(P<0.05),晚期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),MoH组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与DP+MiH组比较,DP+DeH组海马神经元活力升高,早期凋亡率降低,Bcl-2表达上调,Bax表达下调,Bcl-2/Bax升高(P<0.05).结论 二氮嗪预处理联合低温减轻大鼠神经元缺氧复氧损伤的机制可能与纠正Bcl-2与Bax失衡,抑制神经元早期凋亡有关.