二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪（DZX）介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为：①缺氧组；②DZX组：细胞缺氧培养前24h放入含100μmol／L的DZX的培养液15min；③DZX＋PDTC组：细胞缺氧培养前24h放入含100μmol／LDZX和500μmol／L二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）的培养液15min；④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16h，对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V／PI流式检测凋亡细胞，Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低（P〈0．01），Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少；②与DZX组比较，加入PDTC后，流式检测显示细胞凋亡显著增多（P〈0．01），Hoechst染色心肌细胞凋亡增多，Westem blot检测显示Bcl-2表达减少，Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用；位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。     

二氮嗪治疗高胰岛素血症的临床观察

目的探讨二氮嗪治疗高胰岛素血症的疗效。方法报道3例二氮嗪治疗高胰岛素血症的治疗情况。结果二氮嗪治疗后其中两例血糖控制良好。结论对于高胰岛素血症早期诊断和及时治疗有重要的临床意义。     

二氮嗪、环孢菌素A拮抗Aβ1 42致胆碱能神经元凋亡的研究

目的研究ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对β 淀粉样蛋白（Aβ1 42）致原代培养基底前脑胆碱能神经元凋亡的影响。方法采用2?μmol/L的Aβ1 42对原代培养大鼠胆碱能神经元进行干预,建立阿尔茨海默病（AD）细胞凋亡模型;采用500?μmol/L二氮嗪(预处理1?h)、20?μmol/L环孢菌素A以及两者协同对其干预,作用不同时间（24、72?h）后置于倒置显微镜下观察细胞形态;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率,Wes tern blot法检测细胞内凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果① Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h后,Bcl 2表达量降低（P＜0.01）,细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3的表达量增加（P＜0.01,P＜0.001,P＜0.01）,Bax未见明显变化,Bcl 2/Bax比值降低（P＜0.01）,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低（P＜0.001）;② 二氮嗪、环孢菌素A以及两者协同作用24?h后Bcl 2的表达增加（P＜0.05, P＜0.01,P＜0.01）,作用72h能明显增加Bcl 2的表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并提升Bc 2/Bax比率而抑制细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3表达量(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),细胞存活率均增高(P＜0.01,P＜0.001)。结论Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h能促使细胞凋亡,二氮嗪与环孢菌素A及两者协同可以明显拮抗Aβ1 42致细胞凋亡作用。     

二氮嗪对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法采用完全随机化设计,将32只雄性SD大鼠随随机分为4组：A.正常对照组;B.异丙肾上腺素组;C.二氮嗪组;D.格列本脲组。采用半定量RT-PCR法检测各组大鼠心肌Bcl-2、Caspase-3相对表达量;采用TUNEL法检测各组大鼠心肌凋亡,计算凋亡指数（apopticindex,AI）。结果各组大鼠心肌Bcl-2、Caspase-3相对表达量之间存在差异（P〈0.01）。C组Bcl-2、Caspase-3相对表达量与A,B,D组均有差异（P〈0.05）;B组、D组与A组之间有差异（P〈0.05）;B组、D组之间无明显差异（P=0.134,0.297）。A组大鼠心肌TUNEL染色未见阳性细胞;B、B、D各组AI上存在差异（P=0.001）;C组和B、D组织间存在差异（P〈0.01）;B组、D组之间无明显差异（P=0.156）。结论二氮嗪可以减少异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞凋亡;减少凋亡的原因可能与其能上调Bcl-2的表达,下调Caspase-3表达有关。     

二氮嗪预处理联合低温对大鼠海马神经元缺氧复氧时Bcl-2和Bax表达的影响

Objective To investigate the effects of diazoxide preconditioning combined with hypothermia on the expression of Bcl-2 and Bax during anoxia-reoxygenation in rat hippocampal neurons. Methods The hippocampal neurons isolated from newborn SD rats ( < 24 h, weighing 5-6 g) were inoculated in the culture dish or 96 well plates. The hippocampal neurons were randomly assigned into 8 groups and each group contained 36 wells or 12 dishes of neurons: normal temperature .group (group NT), diazoxide preconditioning (DP) + NT group (group DP+ NT), mild hypothermia group (group MiH) , DP + MiH group (group DP + MiH) , moderate hypothermia group (group MoH), DP + MoH group (group DP + MoH), deep hypothermia group (group DeH) and DP+DeH group (group DP+ DeH). In group DP + NT, DP + MiH, DP+ MoH and DP + DeH, diazoxide was added to the culture media, the final concentration was 100 μmol/L,and the neurons were incubated for 1 h once a day for 2 d, and then subjected to 4 h of hypoxia at 37, 34, 30 and 22℃ , respectively, followed by 48 h of reoxygenation at 37℃ . The neuronal viability, apoptotic rates and expression of Bcl-2 and Bax were determined and the ratio of Bcl-2/Bax was calculated. Results The neuronal viability was significantly higher, apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP + NT, MiH, MoH and DeH than in group NT ( P < 0.05). The neuronal viability was significantly higher, early apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP + MiH, DP + MoH and DP+ DeH than in group DP + NT ( P < 0.05), but there was no significant difference in the late apoptotic rate between group DP + MiH, DP + MoH, DP + DeH and DP + NT ( P > 0.05). The neuronal viability was significantly higher, early apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP+ MiH and DeH than in group MiH (P < 0.05), but there was no significant difference in the late apoptotic rate between group DP + MiH, DeH and MiH, and no significant difference in the above indices between group MoH and MiH (P > 0.05) . The neuronal viability was significantly higher, early apoptotic rate lower, Bcl-2 expression higher, Bax expression lower and Bcl-2/Bax ratio higher in group DP+ DeH than in group DP+ MiH ( P < 0.05). Conclusion Diazoxide preconditioning combined with hypothermia can attenuate the anoxia-reoxygenation injury in rat hippocampal neurons possibly through correcting the imbalance of Bcl-2 and Bax and inhibiting the early apoptosis of hippocampal neurons.     

二氮嗪预处理对深低温停循环脑早期保护作用的实验研究

目的观察二氮嗪预处理对深低温停循环（DHCA）所致的脑损伤的早期保护作用，并探讨其可能机制。方法健康大耳白兔24只，随机分为3组，每组8只：对照组（安慰剂组）：DHCA＋安慰剂；实验组（二氮嗪组）：DHCA＋二氮嗪（二氮嗪5mg／kg，CPB前15min静脉注入）；拮抗剂组（5-HD组）：DHCA＋5-HD（20mg／kg，给予二氮嗪前静脉注入）＋二氮嗪（5mg／kg，CPB前15min静脉注入）。每组均经CPB降温至鼻咽温18℃，停循环60min，复温，停机，取脑组织。观察指标为脑组织含水量、脑组织匀浆中兴奋性氨基酸（EAA）及丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化，并制作电镜标本行透射电镜观察脑组织超微结构的改变。结果实验组脑组织含水量及MDA含量明显低于对照组（P〈0．05b）及拮抗剂组（P〈0．05）；实验组EAA含量及SOD活性明显高于对照组（P〈0．01）及拮抗剂组（P〈0．05）；拮抗剂组各项指标与对照组比无统计学意义（P〉0．05）；电镜结果示各组脑细胞超微结构明显损伤，总体印象实验组各种神经元细胞器损伤较上述组有所减轻。结论二氮嗪预处理对DHCA引起的神经元损伤具有早期保护作用。     

心肌线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂二氮嗪对体外大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

近年来研究证明 ,心肌线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKATP)是心肌缺血的重要治疗靶点[1 ] 。 2 0世纪 6 0年代二氮嗪作为抗高血压药在美国合成并上市 ,近来研究表明 ,二氮嗪是mitoKATP开放剂 ,具有耐缺血缺氧损伤的心脏保护作用。本研究采用体外大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 ,观察了二氮嗪对冠状动脉流量、灌流液乳酸脱氢酶 (LDH)活性等的影响。1　材料与方法大鼠断颈后迅速取下心脏 ,置于预先充氧的K H缓冲液中 ,行主动脉根部逆行插管 ,悬挂于Langendroff装置上 ,灌注含有 95 %O2 和 5 %CO2 的K H缓冲液 (pH 7.4 ,37℃ )。平衡灌注 1…     

二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪(DZX)介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为:①缺氧组;②DZX组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L的DZX的培养液15 min;③DZX+PDTC组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L DZX和500μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的培养液15 min;④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16 h,对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V/PI流式检测凋亡细胞,Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低(P<0.01),Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少;②与DZX组比较,加入PDTC后,流式检测显示细胞凋亡显著增多(P<0.01),Hoechst染色心肌细胞凋亡增多,Western blot检测显示Bcl-2表达减少,Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用;位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。     

二氮嗪对缺血再灌注心肌细胞脂质过氧化反应和超微结构的影响

目的:研究二氮嗪对体内大鼠心脏缺血再灌注损伤的保护效果并对其作用机制进行初步探讨。方法:健康SD大鼠随机分为两组,对照组静脉注射相应量溶媒,实验组按12.5 mg/kg剂量静脉注射二氮嗪进行预处理。10 min后行左侧开胸结扎前降支,造成局部心肌缺血2 h,恢复灌注2 h后取心脏,测量缺血心肌组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,同时电镜观察缺血区心肌细胞超微结构的改变。结果:与对照组相比,实验组MDA含量明显降低(P<0.05),超微结构显著改善,但 SOD活性却无明显改变。结论:二氮嗪对体内大鼠心脏缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,其机制可能是通过减轻脂质过氧化反应而发挥作用。     

二氮嗪对大鼠缺血再灌注损伤脑组织线粒体ATP酶活性的影响

目的 探讨线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织线粒体ATP酶活性的影响.方法 采用改良线栓法建立大鼠局灶性大脑中动脉缺血再灌注损伤模型.将21只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组(N组)、缺血再灌注组(IR组)、二氮嗪干预组(DZ组).缺血1 h再灌注24 h后留取标本,测定脑组织线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的变化.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显降低(P<0.05);二氮嗪干预组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均较缺血再灌注组有不同程度的提高(P<0.05).结论 二氮嗪预处理能通过提高脑组织线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,减轻脑缺血再灌注损伤,保护神经元线粒体的功能,有效维持大脑能量代谢,发挥脑保护作用.