重组慢病毒载体转染羊骨髓间充质干细胞及成骨基因表达量的变化

背景：碱性成纤维细胞生长因子具有促进骨髓基质细胞分裂增殖作用,而骨形态发生蛋白2在诱导新骨形成方面有重要的研究意义。目的：分析骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子基因单独和联合转染对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化的影响,比较Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因于转染前后骨髓间充质干细胞相对表达量的差别,为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。方法：构建碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2慢病毒载体,分别转染羊骨髓间充质干细胞,得到碱性成纤维细胞生长因子组、骨形态发生蛋白2组、联合组、对照组细胞,提取RNA后采用实时定量PCR的方法检测Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因的mRNA水平相对表达量的变化。结果与结论：对照组、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2及联合组4组间非特异性成骨基因表达量存在明显差异(P < 0.05),且碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白2具有交互作用(P < 0.05),碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2联合组的Ⅰ型胶原蛋白和骨钙蛋白基因表达量明显高于其他3组,且差异有显著性意义(P < 0.05);但是骨桥蛋白基因中差异无显著性意义(P > 0.05)。体外实验结果显示联合转染组中的Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因mRNA水平相对表达量较多,该组细胞的成骨功能最强,适合作为组织工程骨的种子细胞。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

阿伐他汀激活wnt/β-catenin信号通路促进骨质疏松模型大鼠移植物的骨整合

BACKGROUND: Atorvastatin has been shown to reduce bone loss and fracture, but its effects on implant osseointegration remain unknown. OBJECTIVE: To investigate the effects of atorvastatin on implant osseointegration in osteoporotic rats and the underlying mechanisms. METHODS: Forty-eight Sprague-Dawley rats were randomized into sham-surgery, ovariectomy, and atorvastatin (10 and 20 mg/kg per day) treatment groups, respectively. All rats received ovariectomy and implant surgery except those in the sham-surgery group. Bone mineral density of the lumbar vertebra, osseointegration ratio and pull-out strength of implants were measured after 12-week treatment. Levels of bone formation and resorption markers in osteoblasts treated with atorvastatin were determined by ELISA. Wnt pathway-related gene expression was detected by RT-PCR. RESULTS AND CONCLUSION: Bone mineral density, osseointegration ratio and pull-out strength of implants were significantly increased in 20 mg/kg per day of atorvastatin treatment group compared with ovariectomy group (P < 0.05). Levels of alkaline phosphatase, osteocalcin and osteoprotegerin were significantly increased in osteoblasts treated with atorvastatin in vitro (P < 0 .05), and the level of osteoclast differentiation factor RANKL was significantly inhibited (P < 0.05). Meanwhile, atorvastatin significantly promoted the mRNA expression of low-density lipoprotein associated protein 5 and β-catenin, and inhibited the mRNA expression of dickkopf Wnt signal pathway inhibitor 1 and sclerostin. Our results suggest that atorvastatin promotes implant osseointegration in osteoporotic rats by activating Wnt/β-catenin signal pathway. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因敲除促进小鼠动脉血管钙化的机制研究

目的 研究人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)在小鼠动脉血管钙化形成过程中的作用.方法 ①构建血管特异性PTEN敲除小鼠(PTEN△/△),对照组小鼠为PTENf/f;②免疫组化检测ApoE全敲除小鼠钙化血管中PTEN的表达水平;③体外通过钙化培养基诱导血管钙化;④Alizarin Red染色和Von Kossa染色评估PTEN敲除后小鼠血管钙化程度;⑤实时荧光定量PCR检测血管钙化标志物Runx2、骨钙蛋白和BMP2的表达水平.结果 ①与普通饮食组相比,高脂饮食诱导的ApoE基因敲除小鼠血管钙化明显,而钙化后的血管中PTEN的表达水平显著下降(P＜0.01);②经体外诱导后,PTEN△/△小鼠血管明显钙化,而PTENf/f小鼠血管几乎无钙化;③与PTENf/f组相比,PTENⅣ△小鼠血管钙化标志物Runx2、骨钙蛋白和BMP2的表达均明显升高(P＜0.05).结论 血管特异性PTEN基因敲除促进小鼠血管钙化的形成.     

染料木黄酮对成骨细胞C-fos、ALP及骨钙蛋白基因表达的影响

目的研究不同浓度的染料木黄酮（genistein，GEN）对体外培养大鼠成骨细胞C-fos、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）及骨钙蛋白（osteocalcin）基因表达的影响。方法采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞，加入不同浓度的染料木黄酮（10^-8mol·L^-1、10^-7mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-5mol·L^-1），以妊马雌酮（商品名：倍美力）（10^-8mol·L^-1、10^-7mol·L^-1、10^-6mol·L^-1、10^-5mol·L^-1）作为阳性对照组，提取总RNA，RT-PCR半定量分析其表达。结果染料木黄酮对成骨细胞C-fos、ALP及骨钙蛋白基因水平的影响呈正相关性，并与其剂量成正相关性，但这些作用均低于雌激素水平（P〈0．05）。结论染料木黄酮能诱导成骨细胞C-fos、ALP及骨钙蛋白基因的表达，并与其浓度有关，作用与雌激素相似。     

牵张成骨术整复猕猴腭裂骨桥蛋白与骨钙蛋白表达研究

Objective To study the mechanism of new bone formation and remodeling of distraction osteogenesis(DO) by analysis of the expression of osteopotin(OPN)and osteecalcin(OC). Methods Rhesus were operated to reconstruct the animal model of cleft palate(CP). The CP was closed by DO in experimental group(n=21). After consolidation of 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24 weeks, every 3 animals were killed to collect the specimens, respectively. The OPN and OC and their mRNA were detected quantitatively by Real-time RT-PCR and ELISA, respectively. The animals in control group(n=2) and sham group(n=2) were used as control. Results The mRNA expression of OPN increased since 2nd week of consolidation and reached the peak at 4th week(7.59±0.37). The mRNA expression of OC was up-regulaed since 4th week, and reach the peak at 6th week(7.94±0.31). Then they decreased to about the level in sham group at 24th week(P > 0.05). The OPN and OC were highly expressed during 4 to 6 weeks of consolidation. During 8 to 12 weeks, they decreased like their mRNA expression. Conclusion The intramembraneons new bone formation after DO can reconstruct the bone defect of CP. The new formed bone can be remodeled to be quite normal bone tissue.     

糖皮质激素对肾病综合征患儿骨代谢的影响

目的 探讨糖皮质激素（GC）治疗对肾病综合征（NS）患儿骨代谢的影响。方法选择初发特发性肾病综合征（INS）患儿48例，予以GC治疗，并辅以钙尔奇D片，分别在GC治疗前（活动期）、激素治疗尿蛋白转阴后（缓解期）及肾病持续缓解5个月时（恢复期）检测血清骨钙蛋白（BGP）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、甲状旁腺素（PTH）和钙水平。以同期儿保科体检的30例健康儿童为对照。结果INS患儿活动期血清BGP、钙水平较对照组明显降低（P〈0．01），血清BALP、FPTH较对照组明显升高（P〈0．01）。缓解期血清BGP最著低于活动期（P〈0．01）；血清BALP较活动期明显下降（P〈0．01），但与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）；血清VFH高于活动期（P〈0．05）；血清钙高于对照组（P〈0．01），与活动期无显著性差异（P〉0．05）。NS患儿恢复期血清BGP、BALP、PTH、钙与对照组比较均无显著性差异（P〉0．05）。结论NS本身和GC治疗均可引起患儿骨代谢异常，但只要合理应用激素并及时补充VitD和钙制剂，骨代谢异常可以逆转。     

泼尼松治疗肾病综合征患儿血清骨钙蛋白的动态变化

目的 通过测定泼尼松治疗肾病综合征患儿血清骨钙蛋白水平，了解患儿成骨细胞的功能变化。方法 实验分四组：激素治疗前组、激素足量治疗组、激素减量治疗组和对照组，测定4组血清骨钙蛋白含量。结果 在应用泼尼松治疗前血清骨钙蛋白水平已明显低于对照组(P＜0．01)，足量激素治疗后继续显著下降(P＜0．001)；而在激素减量治疗期间，血清骨钙蛋白水平渐升高，又与对照组相比无显著差异(P＞0．05)。结论 肾病综合征患儿血清骨钙蛋白随尿排出体外，应用激素治疗后患儿成骨细胞功能受到显著抑制，导致血清骨钙蛋白水平的降低；而采取隔日应用激素维持治疗阶段对患儿的成分细胞影响较小。     

骨皮质切开术辅助大鼠正畸牙移动中OPNmRNA、BSPmRNA、OCNmRNA表达的研究

目的:观察骨桥蛋白(OPN),骨涎蛋白(BSP),骨钙蛋白(OCN)在大鼠骨皮质切开术辅助正畸牙移动过程中的表达情况。方法:选取健康雄性Wistar大鼠65只,60只大鼠随机分成3组:组Ⅰ:选择性骨皮质切开术;组Ⅱ:传统的牙齿移动;组Ⅲ:混合组,剩余5只作为空白对照组(不作任何处理)。用镍钛螺旋拉簧施加约60 g力近中移动上颌实验侧第一磨牙,在第一磨牙颊腭侧行骨皮质打孔术式,分别在加载第7、14、21、28、42天颈椎脱臼处死取材,进行SYBR Green实时荧光定量PCR技术,对Ct值进行分析。结果:混合组中的成骨细胞相关细胞因子:OPN(骨桥蛋白),Bone sialoprotein(BSP骨涎蛋白),Osteocalcin(OCN骨钙蛋白)的表达早期增加暗示了同化合成反应的增加。结论:正畸牙齿移动初期骨皮质切开术加速了牙齿移动,改变了早期骨代谢状态,成骨活跃,支持区域性骨代谢加速学说。     

糖皮质激素对白血病患儿成骨细胞的影响

目的：探讨诱导治疗量的糖皮质激素对急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿骨合成分子标志物的影响。方法：以Ⅰ型前胶原羧基端前肽（PICP）、骨钙蛋白（BGP）及碱性磷酸酶（AKP）为参数，对初治ALL患儿使用诱导治疗量的泼尼松治疗前及治疗4周后骨合成状况进行比较。结果：泼尼松治疗后ALL患儿血清PICP、BGP、AKP与治疗前比较均有显著差异（Pa〈0．01）。结论：诱导治疗量的糖皮质激素可抑制ALL患儿的骨合成功能。     

牙周膜干细胞在钛表面不同应答的实验研究

目的：研究牙周膜干细胞在不同粗糙程度的钛板表面的增殖情况及成骨基因表达。方法：常规酶消化法培养牙周膜干细胞,按照接种面性质及钛盘表面不同的处理方法分为5组;将牙周膜干细胞按照相同的细胞浓度植于上述5组培养皿内,检测细胞的增值情况和成骨标志蛋白的表达情况。结果：SEM检测钛板表面处理情况：第1组常规机器处理组（G1）;第两组75μm Al2O3喷砂组（G2）;第3组125μm Al2O3喷砂组（G3）;第4组阳极电压处理组（G4）;第5组空白对照组（G5）。细胞增殖情况：第1天细胞增殖较慢,但是G2和G3细胞增殖明显高于其他组,统计学处理有显著性差异;第3天细胞增殖增快,G3和G4细胞增殖明显加快;第6天G2表现出最快的细胞增殖率,G5则表现出比其他各组明显缓慢的细胞增殖率。基因表达检测：培养后第1、3、6天GAPDH表达相对稳定,骨桥蛋白的表达在各组无显著性差异;骨钙蛋白的表达则有显著性,到第6天,骨钙蛋白在G5的表达明显降低,而在G2/3的表达明显增强。I型胶原的表达,在整个实验过程中在G5表达较高水平,而在G2,G3轻度降低,在G5明显降低。结论：牙周膜干细胞在粗糙面增殖优于光滑平面,与塑料表面相较,钛板表面能更利于牙周膜干细胞的骨向分化。