葛花解酲方对乙醇性HBV转基因小鼠肝癌癌前病变细胞周期调控因子表达的影响

目的观察葛花解酲方对乙醇性HBV转基因小鼠肝癌癌前病变细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）及p27细胞周期调控因子蛋白表达的影响,探讨葛花解酲方阻断肝癌癌前病变的作用机制。方法将24只HBV转基因小鼠适应性饲养1周后,随机分为对照组、模型组、治疗组,每组8只。各组小鼠于22周末进行取材光镜观察肝组织病理学改变并用免疫组织化学法检测CyclinD1、CDK4及p27KIP1蛋白的表达。结果与模型组比较,给药组肝组织病理形态学得到明显改善;与对照组比较,模型组CyclinD1和CDK4阳性表达率显著升高（P<0.05）;与模型组比较,治疗组CyclinD1和CDK4阳性表达率显著下降（P<0.05）;与对照组比较,模型组p27KIP1阳性表达率显著降低（P<0.05）,与模型组比较,治疗组p27KIP1阳性表达率显著升高（P<0.05）。结论葛花解酲方可以通过下调癌基因CyclinD1和CDK4的表达,上调抑癌基因p27KIP1的表达,从而达到保护肝脏损害、逆转肝癌癌前病变的作用。     

松果菊苷对乙肝病毒复制和抗原表达的影响

以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞为体外模型,研究松果菊苷对乙肝病毒(HBV)复制和抗原表达的影响,采用ELISA法测定细胞上清乙肝表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)水平;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平。以HBV转基因小鼠为体内模型,研究松果菊苷对HBV复制的影响,首先采用荧光定量PCR法检测转基因小鼠肝组织HBV DNA水平,采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;同时检测血清转氨酶水平和肝组织病理变化;然后将HBV表达阳性的转基因小鼠随机分为5组:对照组、拉米夫定(50 mg·kg^-1)组和松果菊苷高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg^-1)组。每天灌胃给药1次,连续给药30 d。第31天分离小鼠血清检测HBV DNA,HBsAg和HBeAg水平;提取肝组织DNA测定其HBV DNA水平,同时作肝组织病理检查。结果表明:松果菊苷在50,100 mg·L^-1作用HepG2.2.15细胞6 d后能显著抑制HBsAg和HBeAg表达,其最高抑制率分别为42.68%,46.29%;同时在100 mg·L^-1对HBV DNA具有抑制作用。此外,松果菊苷在50 mg·kg^-1剂量时能显著抑制HBV转基因小鼠HBsAg与HBeAg表达,其抑制率分别为42.82%,29.12%,同时对转基因小鼠血清HBV DNA水平有显著抑制作用。提示松果菊苷对HBV复制和抗原表达具有较强抑制作用。     

阳春砂DXR超表达提高转基因烟草DXR活性及光合色素含量

[目的]筛选阳春砂1-去氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶(DXR)(AvDXR)转基因烟草T1代植株,鉴定AvDXR基因在模式植物烟草中的功能.[方法]采用抗生素、聚合酶链反应(PCR)法筛选转基因烟草T1代植株;采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法分析目的基因在T1代转基因烟草中的表达情况,采用分光光度法测定酶活性和光合色素含量.[结果]经过抗生素筛选和PCR检测获得AvDXR基因稳定遗传的转基因烟草T1代;AvDXR在部分T1代植株中得到超表达;经测定超表达植株中的DXR活性和光合色素含量均有提高.[结论] AvDXR超表达提高了转基因烟草DXR活性和光合色素含量,获得的AvDXR超表达植株可作为进一步分析萜类成分的材料.     

APP/PS1双转基因老年性痴呆小鼠早期病理和认知行为变化

[目的]探讨APP/PS1双转基因老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠早期病理和行为学变化.[方法]选取5、7月龄的APP/PS1双转基因小鼠和非转基因小鼠,采用刚果红染色法和定量方法,并结合Morris水迷宫行为学测试,对其脑内淀粉样斑块积聚与学习记忆能力的月龄变化关系进行研究.[结果](1)7月龄的双转基因组小鼠的空间辨别学习记忆能力与非转基因组小鼠比较差异有统计学意义(P＜0.05);(2) APP/PS1双转基因组小鼠在5、7月龄时海马与脑皮质均观察到明显的橘红色斑块沉积,但非转基因组小鼠海马及脑皮质均未观察到淀粉样斑块沉积.[结论]7月龄APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力下降,APP/PS1双转基因小鼠大脑皮层和海马部位淀粉样斑块的早期出现随年龄依赖性增加.     

hTIM4-EGFP小鼠血液生理生化指标测定

目的 测定自主建立的转基因小鼠hTIM4-EGFP的血液生理生化指标.方法 分别测定12周龄各8只雌性和10只雄性的同窝阴性小鼠与转基因hTIM4-EGFP小鼠的22项血液生理指标和12项血液生化指标,利用统计学方法分析组间差异.结果 转基因组与野生组在10项生理指标(WBC、RBC、HGB、HCT、MCH、RDW、P...     

ACE/ACE2在AGT-REN双转基因高血压小鼠肾组织的表达变化及意义

目的:观察血管紧张素原(AGT)-肾素(REN)双转基因高血压小鼠肾脏组织病理改变及血管紧张素转化酶(ACE)/血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化,探讨ACE和ACE2在高血压肾损伤中的作用。方法:实验分为4组,随机选择10月龄野生型、AGT转基因、REN转基因以及AGT-REN双转基因雄性C57小鼠各6只。每组动物颈动脉插管检测平均动脉压(MAP),1h后处死小鼠;左侧肾脏置于10%中性甲醛固定,常规HE染色方法观察肾脏组织病理改变,免疫组化法观察肾脏ACE及ACE2的表达变化;右侧肾脏取出后放入蛋白裂解液中,提取蛋白,进行Westernblotting实验,观察肾组织中ACE和ACE2蛋白表达。结果:与野生型小鼠相比,AGT转基因小鼠MAP无明显变化(P>0.05),REN转基因小鼠MAP降低约15mmHg(P0.05),AGT-REN双转基因鼠肾组织ACE表达明显增高(P<0.05),而ACE2表达明显降低(P<0.05)。Westernblotting结果显示:与野生型小鼠相比,AGT转基因鼠肾组织ACE和ACE2表达无明显变化;REN转基因鼠肾组织ACE表达无明显变化,ACE2表达稍降低(P<0.05);双转基因鼠肾组织ACE蛋白表达明显增强,ACE2蛋白表达水平显著降低,ACE/ACE2表达显著失衡。结论:AGT-REN双转基因可致小鼠恶性高血压,导致肾脏严重损伤;ACE/ACE2的表达失衡与血压改变密切相关,降低ACE或提高ACE2的表达可能对防治高血压具有重要意义。     

中药虎杖雌激素活性组分的分离及活性测试

药材虎杖用70%乙醇冷浸法进行提取。对虎杖中蒽醌类化合物集中分布的乙酸乙酯分配组分首先进行硅胶柱分离,得到6个组分,利用转基因酵母法测定其雌激素活性,结果表明前三个组分具有较高的雌激素活性。进一步对其中的第三个活性组分利用制备高效液相色谱进行了精制,对流出物按2分钟间隔收集,共得到20个馏分。转基因酵母法测定其雌激素活性的结果显示,在这20个馏分当中,有5个馏分具有较强的雌激素活性。分别将其雌激素活性与化学组成进行关联,发现其中的sub-fraction-13中可能存在非大黄素的雌激素活性成分。     

几丁质酶研究现状及展望

几丁质酶（EC3.2.1.14)催化几丁质水解为几丁寡糖和N-乙酰氨基葡萄糖,随研究深入,显示出越来越突出的生物学功能。本文介绍了几丁质酶的底物专一性,生理功能,抑制真菌功能及转基因研究现状。     

转FasL基因卵巢癌HO-8910细胞系的建立

目的建立表达转FasL基因卵巢癌细胞系,为以FasL为靶点治疗卵巢癌提供理想细胞模型。方法应用分子克隆技术,将人FasL cDNA片段正向插入逆转录病毒载体pLXSN构建重组质粒pL(hFasL)SN,转染包装细胞PA317收获假病毒上清,磷酸钙法转染卵巢癌HO-8910细胞筛选建系,酶切PCR鉴定、流式细胞仪(FCM)法检测。结果酶切鉴定证实重组质粒pL(hFasL)SN中存在FasL,PCR方法从转染细胞HO-8910-FasL基因组中扩增出0．86kb片段,FCM检测显示FasL表达增加40．32％,HL-60细胞与HO-8910-FasL细胞共培养HL-60细胞凋亡增加25．65％。结论应用逆转录病毒法建立了稳定高表达FasL并具功能的HO-8910-FasL细胞系。     

基因修饰小鼠肿瘤模型研究进展

动物模型在肿瘤病因的揭示、发病机理的探索以及治疗措施的评估中有着不可替代的重要作用。继常规转基因之后,可诱导表达转基因、基因打靶和条件性基因打靶等技术革新及其在肿瘤模型建立中的应用为我们提供了大量能较好模拟人体相应肿瘤的动物模型。而对它们的分析极大地深化了我们对肿瘤生物学行为的认识,并有助于人们找到攻克肿瘤的办法而造福人类。