二氮嗪对软骨细胞氧化损伤的影响

目的:探讨二氮嗪对双氧水诱导的软骨细胞氧化损伤的影响。方法:取SD乳鼠膝关节软骨细胞进行原代培养,将对数生长期的软骨细胞分成5组,分别为阴性对照组(A组),双氧水组(B组),H2O2+0.1μmol·L-1二氮嗪组(C组),H2O2+1.0μmol·L-1二氮嗪组(D组),H2O2+10μmol·L-1二氮嗪组(E组);A组细胞不做特殊处理,B组用0.3 mmol·L-1双氧水在37℃恒温箱内孵育4 h,C、D、E、F组预先分别用0.1μmol·L-1DZ,1.0μmol·L-1DZ,10μmol·L-1DZ,100μmol·L-1在37℃的恒温箱孵育30分钟,PBS洗涤细胞,再用0.3 mmol·L-1双氧水在37℃恒温箱内孵育4小时。分别检测ABCDE各组细胞的细胞活性,ROS的量,细胞凋亡情况。结果:①MTT法检测各组细胞活性,细胞活性率从大至小依次为D组C组E组F组B组;②用活性氧探针DCFH-DA检测各组细胞中的ROS的量,ROS产量从多至少依次为B组E组D组C组A组;③流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,各组细胞凋亡率由大至小依次为B组E组D组C组。④Western bolt检测各组软骨细胞中HIF-1α蛋白的表达,各组软骨细胞中HIF-1α蛋白表达量依次为C组D组E组A组B组。结论:二氮嗪可降低双氧水诱导的软骨细胞的凋亡率,同时也降低双氧水诱导的软骨细胞ROS的产生,并诱导软骨细胞产生HIF-1α蛋白,可能存在二氮嗪诱导HIF-1α的表达,引起下游相关基因的转录,总体提高软骨细胞对氧化损伤的耐受力,阻碍自由基诱导的软骨细胞的凋亡。     

PHⅡ-7通过升高ROS诱导K562和K562/A02凋亡

目的探讨靛玉红衍生物——PHⅡ-7对K562和K562/A02的体外杀伤作用及其机制。方法利用WST-8试剂盒、细胞凋亡检测以及活性氧(ROS)检测研究PHⅡ-7对K562和K562/A02发生杀伤作用的机制。共聚焦显微镜及Western blot分析观察药物处理前后细胞的变化。结果细胞毒实验证实PHⅡ-7对K562和K562/A02有相近的杀伤作用。给予上述两种细胞2μmol·L-1PHⅡ-7可见明显的ROS水平升高。PHⅡ-7对K562及K562/A02具有诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性。加入ROS的抑制剂NAC可抑制给药后细胞内ROS水平的提高,同时也抑制了PHⅡ-7处理后细胞的凋亡。共聚焦显微镜观察发现药物处理的K562和K562/A02细胞出现明显的凋亡形态改变,Western blot分析表明单用PHⅡ-7可以引起PARP-1及caspase-3,caspase-9的切割,当PHⅡ-7与NAC共同作用之后,上述改变均被抑制。结论 PHⅡ-7可以通过诱导K562/和K562/A02凋亡来实现对上述细胞的杀伤作用,该作用很有可能与其升高细胞内的ROS水平有关。     

黄芪熊竹素通过NOX4/ROS/NF-κB通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

摘要：目的:本研究旨在评价熊竹素（JAR）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制。方法:体外培养人主动脉平滑肌细胞株（HA-SMCs）,10-6?mol·L-1的AngⅡ诱导HA-SMCs增殖并使用梯度稀释的JAR进行干预,检测HA-SMCs活性、培养基中过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。使用2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针和流式细胞仪检测HA-SMCs中ROS水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测HA-SMCs中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX） 4、NOX2及核因子κB（NF-κB）的表达水平。结果:JAR对AngⅡ诱导的HA-SMCs活性增加具有显著抑制作用（P＜0.01）。AngⅡ诱导组HA-SMCs中荧光强度较对照组细胞显著增加（P＜0.05或P＜0.01）,说明细胞中ROS水平较对照组显著增加,而JAR干预能够显著地降低AngⅡ诱导的ROS生成（P＜0.05）。AngⅡ诱导组HA-SMCs培养基中CAT、SOD及GSH-Px活力较对照组显著降低（P＜0.01）,而JAR干预组上述酶活力显著增加（P＜0.05或P＜0.01）。RT-PCR检测结果显示,AngⅡ组NOX4和NOX2在HA-SMCs中的表达较对照组显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,而JAR干预能够显著抑制AngⅡ诱导的NOX4和NOX2在HA-SMCs中的表达（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,AngⅡ诱导HA-SMCs 48 h后,NOX4、NOX2及p-NF-κB在HA-SMCs中的表达水平显著增加（P＜0.01）,而JAR干预能够显著抑制上述蛋白的表达（P＜0.05）。结论:黄芪熊竹素通过NOX4/ROS/NF-κB通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

白藜芦醇对K562/ADM细胞促凋亡作用研究

目的:探讨白藜芦醇诱导K562/ADM细胞凋亡的效应与细胞活性氧水平的关系。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、光镜、电镜和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果:白藜芦醇显著抑制K562/ADM细胞增殖,形态学呈现典型的凋亡改变;FCM分析显示S期细胞数明显增多,出现S/G2期阻滞;ROS水平升高。结论:白藜芦醇诱导K562/ADM胞凋亡与细胞内活性氧水平升高有关。     

姜黄素对过氧化氢诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮及活性氧生成的影响

目的研究姜黄素(Cur)对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)生成的影响。方法健康6~8周龄昆明种小鼠腹腔提取巨噬细胞,培养成活后调整细胞水平为2×108L-1,H2O2组加入1 mmol.L-1H2O2刺激30 min,Cur干预组加入不同水平Cur,作用细胞2 h后加入1 mmol.L-1H2O2刺激30 min,对照组加入等量9 g.L-1盐水。免疫细胞化学法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,Griess法测定上清液NO的生成量,荧光探针DCFH-DA法测定巨噬细胞内ROS生成。结果对照组上清液NO2-水平(相当于NO累积生成量)很低,H2O2组显著高于对照组(P<0.01),不同水平Cur干预组NO2-水平降低,即NO表达减少,并且呈水平依赖性降低(P<0.05)。各组胞质内iNOS表达与上清液NO的生成量呈相应的变化趋势。H2O2组小鼠巨噬细胞内ROS显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。不同水平Cur预先干预2 h后,ROS生成量呈水平依赖性降低(P<0.01)。结论Cur抑制H2O2诱导的小鼠巨噬细胞内NO生成,可能是通过抑制iNOS...     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对小鼠巨噬细胞一氧化氮及活性氧生成的抑制作用

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)生成的影响。方法健康6～8周龄昆明种小鼠,腹腔提取巨噬细胞,培养成活后调细胞水平至2×108L-1,空白对照组加入等量的9g/L盐水,H2O2组加入H2O2,使其终质量浓度为1mmol/L刺激细胞30min,SPC干预组加入不同水平SPC干预细胞2h后加入终质量浓度为1mmol/LH2O2刺激30min。免疫细胞化学法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,Griess法测定上清液NO的生成量,荧光探针DCFH-DA法测定巨噬细胞内ROS生成。结果H2O2组上清液NO2-水平(相当于NO累积生成量)显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组NO2-水平降低,即NO表达减少,且呈质量浓度依赖性降低(P<0.05)。各组细胞质内iNOS表达同上清液NO的生成量呈现相应的变化趋势。H2O2组小鼠巨噬细胞内ROS显著升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),不同水平SPC预先干预2h后,ROS生成量呈质量浓度依赖性降低(P<0.01)。结论SPC可能是通过抑制iNOS表达来抑制H2O2诱导的小鼠巨噬细胞内NO的生成,另外SPC也可抑制小鼠巨噬细胞内ROS生成,从而减轻组织细胞的氧化损伤。     

亚硒酸钠诱导白内障的机理研究

在pH8.0-8.5条件下,谷胱甘肽、氧或过氧化氢过量时,微量的10~(-4)mol·L~(-1)亚硒酸钠能使鲁米诺产生稳定的化学发光。发光强度依赖于酸度、谷胱甘肽浓度、氧及过氧化氢的浓度。超氧化物歧化酶(SOD)对鲁米诺发光有明显的抑制作用。SeO_3~(2-)在眼内催化产生活性氧可能是产生白内障的原因。     

DJ-1与子痫前期关系的研究进展

DJ-1又名帕金森病蛋白7（ Parkinson disease protein 7,PARK7）属于ThiJ/PfpI/DJ-1超家族,DJ-1是一种抗氧化剂,抗氧化应激是其主要功能,近年研究发现DJ-1在子痫前期（preeclampsia,PE）患者胎盘组织中表达水平升高,推测 DJ-1通过氧化应激途径参与子痫前期的发生发展。子痫前期是妊娠期特有疾病,是导致孕产妇和新生儿发病率和死亡率增高的主要原因。但子痫前期的病因和发病机制尚在研究探讨,其中氧化应激损伤参与子痫前期的发生发展是其中研究的一个热点,就DJ-1在子痫前期中的作用机制进行综述。     

夹竹桃麻素对高肺血流肺动脉高压大鼠的治疗作用

目的 观察夹竹桃麻素(apocynin)对肺高血流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞活性氧(ROS)及NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白水平的影响,研究Apocynin对肺高血流肺动脉高压形成的拮抗作用.方法 将30只雄性SD大鼠随机均分为对照组、分流给药组、分流组,通过腹主动脉-下腔静脉分流法建立左向右分流肺高血流肺高压大鼠模型,测定大鼠平均肺动脉压、肺小动脉中膜厚度百分比(WT％)、肺小动脉管壁面积百分比(WA％);体外培养模型大鼠肺动脉内皮细胞,流式细胞仪检测2,7一二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH- DA)荧光探针标记的肺动脉内皮细胞活性氧水平,Western Blot法检测大鼠肺动脉内皮中NOX4蛋白的表达情况.结果 与分流组对比,分流给药组大鼠肺动脉压升高和肺血管重构情况明显改善,肺动脉内皮细胞中NOX4蛋白的表达较分流组虽无明显减少,但细胞内ROS的水平显著下降.结论 持续使用夹竹桃麻素干预,可使左向右分流肺动脉高压大鼠肺动脉内皮细胞中ROS水平明显下降,从而拮抗大鼠肺动脉高压的形成.     

活性氧与线粒体损伤研究概述

线粒体在细胞生长、增殖分化和死亡等生命活动中扮演着十分重要的调控者的角色,也是许多药物毒性作用的靶标。活性氧(ROS)是细胞代谢不可避免的产物,其能作用于线粒体,是引起线粒体损伤主要的途径之一。本文介绍了线粒体的结构与功能,重点从线粒体氧化磷酸化功能的破坏、线粒体膜通透性的改变和线粒体DNA的突变等方面阐述了ROS引起线粒体损伤的机制。