OX40-OX40L轴对动脉粥样硬化小鼠淋巴细胞活性氧和亲环素A表达的调控作用

目的　探讨OX40-OX40L相互作用对C57BL/6J小鼠活性氧（ROS）水平及亲环素A（CyPA）表达的影响。　方法　采用C57BL/6J小鼠颈动脉硅胶圈置入法快速建立动脉粥样硬化斑块模型,免疫组织化学法检测颈动脉粥样硬化（As）斑块内CyPA的表达;小鼠淋巴细胞表达CyPA采用Western　Blot检测;采用流式细胞术检测CD4、OX40及细胞内ROS水平。　结果　C57BL/6J小鼠形成As斑块后,淋巴细胞表达OX40较非As小鼠明显增加,同时发现As小鼠淋巴细胞内ROS水平和CyPA表达水平显著增加;体外应用anti-OX40特异性刺激OX40-OX40L轴后,淋巴细胞表达OX40及ROS水平显著上调,anti-OX40L特异性阻断OX40-OX40L后,淋巴细胞OX40表达减少,细胞分泌ROS水平较刺激组降低（P<0.05）;体外培养淋巴细胞6　h,刺激组分泌的CyPA水平明显高于抑制组（P<0.001）。　结论　OX40-OX40L相互作用能调控动脉粥样硬化小鼠活性氧水平及亲环素A表达。     

铁死亡的调控机制及其在肝疾病中的作用研究进展

铁死亡是近年来新发现的一种细胞死亡方式,是由于细胞内铁离子水平异常升高,导致氧化还原失衡,细胞膜发生脂质过氧化,最终细胞膜破裂导致细胞死亡。目前认为铁死亡的中心环节是铁代谢和活性氧代谢。铁死亡涉及多种生理和病理过程,包括癌细胞死亡、神经毒性、缺血再灌注损伤和T细胞免疫等。越来越多的研究表明,在多种肝病的发生发展过程中,均出现不同程度的铁过载以及脂质活性氧堆积等铁死亡特征,而铁死亡可以通过调节细胞内铁离子水平及脂质过氧化程度,影响肝疾病的进程。因此,调控铁死亡可能是一种新的治疗肝疾病的策略。本文综述了铁死亡及其在肝疾病中的研究进展,为探索肝疾病的治疗方法提供理论基础。     

金水宝胶囊联合依帕司他治疗糖尿病肾病的临床研究

目的探讨金水宝胶囊联合依帕司他片治疗糖尿病肾病的临床疗效。方法选取2014年9月—2017年4月商丘市第一人民医院收治的糖尿病肾病患者172例,随机分为对照组和治疗组,每组各86例。对照组口服依帕司他片,50 mg/次,1次/d。治疗组在对照组治疗的基础上口服金水宝胶囊,3粒/次,3次/d。两组患者均连续治疗8周。观察两组的临床疗效,比较两组的血糖、肾功能指标、24 h尿微量蛋白定量、血清氧化指标和血清抗氧化指标。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为75.6%、93.0%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组空腹血糖、糖化血红蛋白水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组血糖指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys-C)、血清β2微球蛋白(β2-MG)、24 h尿微量蛋白定量、尿蛋白排泄率(UAER)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组这些观察指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组活性氧(ROS)、脂质过氧化氢(LHP)和晚期蛋白氧化产物(AOPPS)水平均显著下降,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组血清氧化指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组超氧化物歧化酶(SOD)、维生素E(VitE)、维生素C(VitC)和总抗氧化能力(T-AOC)水平均显著升高,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P0.05);且治疗组血清抗氧化指标明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论金水宝胶囊联合依帕司他片治疗糖尿病肾病具有较好的临床疗效,可改善肾功能,增强抗氧化能力,降低氧化反应,具有一定临床推广应用价值。     

AKR1B10基因沉默对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探索肝细胞癌(HCC)中醛酮还原酶家族1成员B10(AKR1B10)的生物学功能和相关的病理机制。方法通过CCLE数据库分析正常肝细胞与HCC细胞系中AKR1B10 mRNA的表达,UALCAN以及Oncomine数据库分析癌旁组织与HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达,Western Blot法验证HCC患者癌组织与癌旁组织中AKR1B10蛋白表达差异。使用慢病毒分别敲减HepG2及Huh7细胞中的AKR1B10,分为对照组和AKR1B10敲减组(shAKR1B101#、shAKR1B102#)。采用AnnexinV-APC/PI双染法、细胞克隆实验、皮下移植肿瘤的方法检测敲减AKR1B10后HCC细胞凋亡、克隆形成、皮下成瘤体积的变化。过氧化物敏感性荧光探针DCFH-DA以及Western Blot检测敲减AKR1B10后HCC细胞内活性氧(ROS)以及p-ATMser1981、γ-H2AX、c-Caspase-3和c-RARP等蛋白的变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果CCLE数据库提示AKR1B10 mRNA在HCC细胞中的表达明显高于正常肝细胞;Oncomine数据库显示,与癌旁组织相比,HCC组织中AKR1B10 mRNA的表达增加了10倍以上;UALCAN数据库提示AKR1B10基因在HCC组织中高表达;本研究的6例HCC患者中AKR1B10在HCC组织中的表达高于癌旁组织。与对照组相比,AKR1B10敲减组中HCC细胞的克隆形成能力明显下降(P值均<0.001),细胞凋亡率明显增加(P值均<0.001)。与对照组相比,AKR1B10敲减组ROS的水平升高,DNA损伤指标p-ATMser1981、γ-H2AX蛋白,细胞凋亡指标c-Caspase-3和c-RARP蛋白增加。此外,在BALB-c/Nude小鼠模型中,从异体移植后第13天开始,与对照组相比,AKR1B10敲减组肿瘤体积明显缩小(P值均<0.05)。结论AKR1B10可能是治疗HCC的有效治疗靶标。     

活性氧与丝裂原激活蛋白激酶通路的相互作用介导高糖引起的心肌细胞损伤

目的探讨活性氧(ROS)与丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路的相互作用在高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用。方法应用细胞计数盒(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色检测凋亡细胞形态及数量的改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内ROS水平;Western blot测定蛋白质表达水平。结果高糖(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞24 h可引起明显的损伤,表现为细胞存活率下降,凋亡细胞数量及ROS水平明显升高。另方面,高糖可明显地上调磷酸化(p)p38MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及c-Jun N端激酶(JNK)(为MAPK家族的3个成员)的表达水平。N-乙酰半胱氨酸(NAC,为ROS清除剂)能抑制高糖引起的心肌细胞毒性和细胞凋亡,也能阻断高糖对p-p38MAPK、p-ERK1/2及p-JNK表达的上调作用。此外,p38MAPK、ERK1/2和JNK的选择性抑制剂均能抑制高糖引起的心肌损伤,并能抑制ROS生成增多。结论在高糖损伤H9c2心肌细胞中,存在ROS与MAPK通路的正相互作用,这种相互作用可能在高糖引起的心肌细胞损伤中起着重要的作用。     

青海省兴海县大骨节病病区儿童血清丙二醛和抗氧化酶水平观察

目的 观察青海省兴海县大骨节病(KBD)病区儿童血清中丙二醛(MDA)及抗氧化酶的变化,探讨体内氧自由基损伤与KBD的关系.方法 在青海省兴海县KBD病区唐乃亥乡小学、下鹿圈村小学以及曲什安乡小学选择7～ 12岁的KBD患儿64名作为KBD组,46名健康儿童作为内对照组,在非病区陕西省长安区南樊小学选择59名健康儿童作为外对照组.分别采集其枕部发样和清晨空腹外周血,采用单纯随机抽样方法在每组中各抽取20例发样及血样,应用2,3-二告氨基萘(DAN)荧光法测定发硒和血硒水平;通过生化方法检测样本血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力,总抗氧化能力(T-AOC)及MDA水平.结果 KBD组发硒[(67.64±17.28)μg/L]、血硒[(36.27±13.29)μg/L]和GSH-Px活力[ (59.53±25.23)kU/L]明显低于内对照组[(153.32±24.31)、(63.06±13.66) μg/L,(91.88±22.99)kU/L]和外对照组[ (242.35±38.56)、(98.93±17.18)μg/L,( 122.68±41.74)kU/L],且内对照组明显低于外对照组(P均＜ 0.05);KBD组和内对照组SOD活力[(55.80±8.14)、(57.45±6.96)kU/L]、CAT活力[(16.45±5.61)、( 15.63±9.18)kU/L]和T-AOC水平[(19.80±6.64)、(21.71±8.82)kU/L]均高于外对照组[(42.79±8.10)、(6.05±2.71)、(13.56±5.38)kU/L,P均＜0.05];KBD组MDA水平[(4.64±1.11 )μmol/L]高于内对照组[(3.31±1.22) μmol/L]和外对照组[(3.43±1.29) μmol/L,P均＜0.05].结论 KBD存在氧化应激损伤,抗氧化酶在KBD病区儿童血清中升高是一种代偿性反应,体内氧自由基损伤与KBD的发生发展可能有一定的关系.     

辛伐他汀对高糖损伤乳鼠心肌细胞NADPH氧化酶亚基基因表达的影响

取原代培养的SD雄性乳鼠心肌细胞在高糖刺激下加入10-7、10-6和10-5mol/L辛伐他汀作用72 h.结果显示,与对照组比较,高糖组心肌细胞活力明显降低(P＜0.01),乳酸脱氢酶(LDH)活性显著增加(P＜0.01),NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA表达和活性氧簇(ROS)水平明显增高(均P＜0.05);与高糖组比较,辛伐他汀各组心肌细胞活力明显增加(P＜0.05),LDH活性显著降低(P＜0.05),p22phox、p47phox mRNA表达和ROS水平明显降低,且辛伐他汀浓度对心肌细胞活力的影响呈剂量依赖效应.这些结果提示辛伐他汀能够抑制NADPH氧化酶亚基的基因表达,减轻高糖引起的心肌损伤.