槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞生长周期及PI3K-Akt-mTOR通路表达的影响

目的 探讨槲皮素对骨肉瘤MG-63细胞生长周期及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关蛋白表达的影响。方法 取人骨肉瘤MG-63细胞分为对照组和实验组,分别给予0.1%二甲基亚砜、200μg/mL槲皮素处理24 h、48 h、72 h。使用流式细胞仪检测各组细胞的生长周期,运用免疫蛋白印迹法检测各组细胞中Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达水平。结果 干预后48 h,与对照组比较,实验组的G₁期细胞比例增加,而S期细胞比例减少,且p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达水平降低（均P<0.05）。结论 槲皮素可能通过阻断PI3K-Akt-mTOR通路阻滞骨肉瘤MG-63细胞生长,从而发挥抗骨肉瘤效应。     

高效液相色谱法测定地稔中芦丁和槲皮素的含量

目的〓建立地稔药材中芦丁和槲皮素的含量测定方法。方法〓采用高效液相色谱法测定,色谱柱为SERVO PT-C18（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为甲醇（A）-0.2%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱0～28min,31% A;28～28.1min,31%A～44% A;28.1～45min,44% A;检测波长255nm,流速1.0mL·min-1,柱温35℃,进样量10μL。结果〓芦丁在10.35～82.80μg·mL-1（r＝0.9998）,槲皮素在4.05～32.40μg·mL-1（r＝0.9997）呈良好的线性关系。芦丁的平均加样回收率为91.09%（RSD＝0.87%）,槲皮素的平均加样回收率为93.97%（RSD＝1.00%）,3批样品芦丁和槲皮素的含量分别为0.857～0.933mg·g-1,0.306～0.333mg·g-1。结论〓该方法简便、准确、重现性好,可用于地稔药材中芦丁和槲皮素的含量测定。     

中药有效成分治疗慢性前列腺炎的免疫机制

慢性前列腺炎是男性多发病和常见病,然而慢性前列腺炎的病因机制还未明确,目前大多数学者认为氧化应激和免疫调节失衡是慢性前列腺炎发生的关键机制。目前免疫疗法在慢性前列腺炎治疗中仍然属于探索阶段,本文就5种中草药有效成分在慢性前列腺炎的实验和临床研究中其可能机制进行阐述,主要体现在:1抑制免疫反应,抑制T细胞活性与增殖,调节Th1/Th2细胞的比例。2上调Treg细胞的表达,从而增强患者耐受能力。3抑制NK-κB因子并进一步抑制i NOS,减少NO、IL-2等炎症因子的释放,起到抑制免疫反应作用。4抑制趋化因子的产生如MCP-1、MIP-1α,以此来减轻诱导炎症反应。研究中草药治疗慢性前列腺炎的免疫机制对开发新药、发扬传统医学有一定的临床价值。     

槲皮素通过影响吲哚胺-2,3-双加氧酶活性抑制HeLa细胞增殖的研究

目的研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD₄₈₀值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋白并进行体外酶活性反应,用高效液相色谱法检测色氨酸和犬尿氨酸的含量变化。结果槲皮素抑制HeLa细胞的增殖,引起G0/G1细胞周期阻滞;槲皮素抑制色氨酸的代谢;槲皮素能够明显抑制IDO1的体外酶催化活性,但不影响IDO1的表达;外源性添加色氨酸的代谢产物犬尿氨酸可以逆转槲皮素引起的细胞增殖抑制。结论槲皮素可能通过抑制IDO1的酶催化活性,影响细胞色氨酸的代谢,这可能是槲皮素发挥其抗宫颈癌HeLa细胞增殖作用的机制之一。     

结直肠癌中葡萄糖转运蛋白-12作为化疗联合用药靶点的研究

目的 研究葡萄糖转运蛋白-12（GLUT12）在结直肠癌（CRC）细胞和组织中的表达与功能,探讨其作为联合用药治疗靶点的可能性。方法 分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测CRC及正常结肠中GLUT12基因和蛋白水平。通过荧光免疫及蛋白印迹法观察槲皮素（QC）对肿瘤细胞中GLUT12定位的调节作用。四氮唑（MTT）比色法和克隆形成实验（CFA）观察QC和奥沙利铂（OXA）联合使用对CRC细胞增殖的影响。结果 GLUT12基因在肿瘤组织中的相对表达水平高于正常组织[（3.2±0.3）vs（0.5±0.6）,P<0.05]。高糖培养液能改变GLUT12在细胞中的定位及表达水平,QC能抑制高糖对GLUT12蛋白的调节作用。MTT和CFA试验显示,OXA和QC联用能使CRC细胞的活力降低[OXA+OC：（63.3±7.1）%vs OC：（88.7±4.2）%,P< 0.05]。QC和OXA联用能抑制结肠癌细胞群落的增殖能力。结论 QC能有效抑制CRC细胞GLUT12蛋白的功能,能增加OXA杀伤CRC的作用。     

金钱草标准汤剂特征图谱的建立及与混淆品的差异研究

目的 建立金钱草标准汤剂的UPLC特征图谱,并与混淆品进行对比研究.方法 采用CORTECS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.6μm),乙腈-0.2％磷酸溶液进行梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长为364 nm,采用中药色谱特征图谱相似度评价系统软件(2012版)进行特征图谱分析;基于特征图谱与混淆品进行差异比较.结果 建立了金钱草标准汤剂特征图谱,标定7个共有特征峰,并指认了山柰酚-3-(2,6-二吡喃鼠李糖基吡喃葡萄糖苷)、山柰酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰素4个化合物.该特征图谱可区分金钱草与混淆品小叶金钱草和广金钱草.结论 该方法简便、准确,为金钱草及其标准汤剂质量控制提供依据.     

基于网络药理学及实验验证探究清热利胆汤治疗胆汁瘀积性肝损伤的作用机制

目的基于网络药理学及实验验证探究清热利胆汤治疗胆汁瘀积性肝损伤的作用机制。方法采用网络药理学方法筛选清热利胆汤和胆汁瘀积性肝损伤相关的核心靶点,构建基于活性成分与疾病共同靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用DAVID数据库对潜在作用靶点进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia ofgenesandgenomes,KEGG)通路富集分析,通过分子对接方法验证活性成分与关键靶点的结合作用。采用胆管结扎方法建立胆汁瘀积性肝损伤大鼠模型,给予思美泰及清热利胆汤进行干预,考察各组大鼠血清中天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)活性以及总胆红素(totalbilirubin,TBIL)、直接胆红素(direct bilirubin,DBIL)和总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平;考察各组大鼠肝组织病理变化;考察各组大鼠肝脏组织蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PRKCA)、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(protooncogene serine/threonine-protein kinase 1,RAF1)、双特异性丝裂原活化蛋白激酶1(dual specificity mitogen-activated protein kinase 1,MAP2K1)和丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)m RNA表达情况。结果网络药理学分析显示,清热利胆汤可能通过作用于PRKCA、RAF1、MAP2K1和MAPK1靶点,参与MAPK信号通路,从而治疗胆汁瘀积性肝损伤;原花青素B2与MAP2K1、槲皮素与MAPK1具有较好的结合能力。与模型组比较,清热利胆汤组大鼠血清中ALT活性和TBA水平显著降低(P0.05),肝组织病理损伤得到改善;肝脏组织中PRKCA、MAP2K1和MAPK1 mRNA表达水平显著降低(P0.05、0.01),RAF1 mRNA表达水平显著升高(P0.01)。结论清热利胆汤能够通过调控PRKCA、RAF1、MAP2K1和MAPK1,从而治疗胆汁瘀积性肝损伤。     

基于网络药理学和分子对接方法研究山花晶颗粒抗视疲劳的作用机制

目的基于网络药理学探讨山花晶颗粒抗视疲劳的作用机制。方法利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)和中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN)筛选山花晶颗粒的活性成分和潜在作用靶点,通过STRING数据库富集信号通路;采用Cytoscape软件分析蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络中的关键靶点,采用分子对接实验对主要活性成分和关键靶点的结合能力进行验证。结果山花晶颗粒筛选出槲皮素、熊果酸、大黄素等66个主要活性成分以及多巴胺受体 D2 (dopamine receptor D2,DRD2)、5-羟色胺受体 1A (5-hydroxytryptamine receptor 1A,HTR1A)、毒蕈碱型胆碱受体M2 (cholinergic receptor muscarinic 2,CHRM2)等34个潜在作用靶点,富集分析出神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、环单磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路等35条相关信号通路,分子对接结果表明主要活性成分与关键作用靶点的对接构象合理。结论山花晶颗粒能够通过"多成分-多靶点-多通路"抑制细胞凋亡和炎性因子的产生,从而减轻眼部细胞氧化和损伤,发挥抗视疲劳的作用。     

基于指纹图谱及化学模式识别研究盐制对五子衍宗丸化学成分的影响

目的建立不同炮制品组方五子衍宗丸(Wuzi Yanzong Pills,WYP)的HPLC指纹图谱,研究盐制对WYP化学成分的影响。方法采用HPLC法建立不同炮制品组方WYP的指纹图谱,并进行相似度评价,采用方差分析、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)与偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对结果进行评价。结果 WYP全生品组、药典组、盐制组指纹图谱相似度均大于0.9,标定了18个共有峰,利用对照品指认出绿原酸(5号峰)、鞣花酸(10号峰)、金丝桃苷(11号峰)、异槲皮苷(12号峰)、毛蕊花糖苷(13号峰)、紫云英苷(14号峰)、槲皮素(15号峰)、山柰酚(17号峰)、五味子醇甲(18号峰)9个成分,归属性分析表明峰2来源于枸杞子,峰3、5、7、9、11、12、14、15、17来源于菟丝子,峰6、8、10、16来源于覆盆子,峰13来源于车前子,峰18来源于五味子,峰1是覆盆子和五味子共有成分,峰4是枸杞子和覆盆子共有成分。药物炮制后组方WYP未出现色谱峰的增加,但峰面积发生变化。通过CA将WYP全生品组、药典组、盐制组聚为3类,PCA筛选出4个主成分,PLS-DA标记出峰1、13(毛蕊花糖苷)、10(鞣花酸)、7、4、11(金丝桃苷)、12(异槲皮苷)、3、5(绿原酸)共9个差异性成分;绿原酸、鞣花酸、金丝桃苷、异槲皮苷、山柰酚、五味子醇甲及峰1、3、4、7、8共11个成分可能是不同炮制品组方WYP的差异标志物。结论建立的指纹图谱测定方法稳定、可靠,炮制后组方WYP的化学成分发生变化,结果可为WYP中如何选用药物炮制品提供一定的依据。     

槲皮素及其衍生物防治肝损伤作用及机制的研究进展

槲皮素是一种多羟基黄酮类化合物,广泛存在于多种药用植物中,具有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗炎和抗肿瘤等多种药理作用。分析了近10年国内外有关槲皮素及衍生物防治肝损伤方面的文献,发现其对各种急、慢性肝损伤均具有良好的防治作用,其作用机制主要涉及抗氧化、抗炎、调节脂质代谢、抗凋亡及自噬、抗病毒等。主要对槲皮素及其衍生物防治不同类型肝损伤的作用及机制进行综述,以期为槲皮素保肝作用的深入研究提供较为全面的文献信息支持。