基于网络药理学方法赤芍-牡丹皮药对治疗中风作用机制探讨

目的:采用网络药理学的分析方法研究赤芍-牡丹皮经典药对治疗中风的分子作用机制。方法:基于中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)、药物与疾病数据库(Drug Bank)、赤芍-牡丹皮的疾病与化学成分靶点网络则分别由治疗靶标数据库(TTD)建立,而它的药效成分与靶点网络主要运用Cytoscape 3.7.0软件构建而成,并同时进行了网络拓补分析; 至于核心靶点对基因本体(GO)的功能富集则主要运用DAVID数据库完成,同时也对百科全书KEGG(基因组)通路的功能富集进行了研究。结果:网络拓补分析结果表明,最核心的药效成分可能为槲皮素、山奈酚、鞣花酸、黄芩苷,最核心的GO功能有活性氧代谢过程、脂多糖、核受体活性、细胞因子受体结合、细胞膜微区、囊腔作用等; 最核心的作用通路有VERF通路、Toll样受体通路、肿瘤坏死因子(TNF)通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶b(P13K-Akt)通路等。结论:本文基于网络药理学方法对赤芍-牡丹皮药对干预中风的作用机制进行了分析发现,赤芍-牡丹皮药对可能是通过VERF通路、Toll样受体通路、TNF通路、IL-17信号通路、P13K-Akt等通路协同作用发挥治疗缓解中风功效,上述预测结果可为赤芍-牡丹皮药对在中风治疗的药理作用研究及临床应用提供一定的理论依据。     

基于p38 MAPK信号通路分析槲皮素保护骨性关节炎关节软骨的机制

目的:探讨槲皮素通过靶向干预p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路保护膝关节骨性关节炎关节软骨的作用机制。方法:笔者通过网络药理学技术,科学的对槲皮素保护骨性关节炎患者关节软骨的靶点因子、信号通路进行预测,并对其进行分析。选择一条与骨性关节炎相关密切的预测通路对其采用体外细胞实验进行验证,通过细胞计数试剂-8(CCK-8)方法筛选出药物最佳干预浓度,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)对骨性关节炎及密切相关炎性因子白细胞介素(IL)-1β,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行检测,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测槲皮素干预后p38 MAPK信号通路下的相关mRNA,蛋白的表达。结果:通过网络药理学预测MAPK信号通路与骨性关节炎患者(OA)存在十分密切的相关性,并选取该通路中最为密切的p38 MAPK信号通路进行研究,通过药物浓度筛查发现在100μmol·L^-1的槲皮素干预后相关炎性因子降低最为明显,并且,在该浓度的槲皮素干预下抑制p38 MAPK信号通路中p38,磷酸化(p)-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)等关键相关因子表达,促进Ⅱ型骨胶原蛋白(CollagenⅡ)的表达。结论:槲皮素在骨性关节炎疾病防治中具有降低软骨炎性因子表达的作用,可通过抑制p38MAPK通路相关因子表达而向好发展,所有结果显示,槲皮素具有降低OA炎性因子表达,保护OA患者关节软骨的作用。     

槲皮素对低钙高镁饮食大鼠血清矿量和骨代谢的改善作用

目的观察槲皮素对低钙高镁饮食大鼠血清矿量和骨代谢水平的改善作用,为骨质疏松临床预防提供参考。方法将60只清洁雄性SD成年黑色大鼠随机等分为空白对照组、模型对照组和槲皮素喂养组,每组20只。空白对照组实验过程中均正常喂养,模型对照组和槲皮素喂养组均适应性喂养2周后,进行低钙高镁(钙5 mg/L,镁60 g/L,蒸馏水溶液作为饮用水)喂养3个月,槲皮素喂养组给予低钙高镁喂养期间同时给予槲皮素(2.64 kg/d)。观察各组大鼠的日常饮食量、饮水量、体重、毛发、毛发色泽、活动等一般情况,分别于低钙高镁喂养前(实验前)和给药喂养3个月时(实验后)两个时刻点进行血清矿量(血钙、血镁、血磷)及骨代谢指标(BALP、CTX-1、BGP、t PINP)测定。结果实验期间,空白对照组、模型对照组和槲皮素喂养组大鼠的日常饮食量、饮水量、体重比较无显著差异(P0.05),但空白对照组、槲皮素喂养组实验大鼠更具活力,毛发更光润。模型对照组大鼠实验后的血钙量、血磷量、BALP均下降,血镁量、BGP、CTX1、t PINP均提升,与实验前比较差异有统计学意义(P0.05)。槲皮素喂养组大鼠实验后的血钙量、血磷量、BALP均显著高于模型对照组大鼠实验后(P0.05),槲皮素喂养组大鼠实验后的血镁量、BGP、CTX1、t PINP均显著低于模型对照组大鼠实验后(P0.05)。结论槲皮素可显著改善低钙高镁饮食大鼠血清矿量和骨代谢水平,可能在低钙高镁交互作用诱导骨质疏松症的预防中起到重要作用。     

基于Nrf2/Keap1/ARE通路研究槲皮素对小鼠年龄相关性黄斑变性的保护作用

目的：探讨槲皮素通过Nrf2/Keap1/ARE通路对小鼠年龄相关性黄斑变性的保护作用及机制研究。

方法：以昆明小鼠为研究对象,分为：对照组、模型组、槲皮素组; 眼底检查各组小鼠眼底是否出现黄白色似玻璃疣物质; OCT检查各组小鼠视网膜厚度; HE染色观察各组小鼠视网膜形态的改变; FFA观察各组小鼠眼底血管完整性; ELISA检测小鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和ROS、MDA含量变化; Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2/Keap1/ARE相关蛋白的表达情况。

结果：槲皮素能使小鼠眼底的黄白色似玻璃膜疣物质减少且视网膜厚度增加(P<0.05),视网膜血管渗漏点明显减少; 与模型组比较,槲皮素组小鼠的a波振幅、b波振幅较模型组均明显上升(P<0.01); 槲皮素能使小鼠视网膜结构比较清晰,部分外核层发生坏死脱落,且使小鼠血清中ROS、MDA含量降低(均P<0.05),SOD、GSH-Px、CAT活性提高(均P<0.05); 与模型组比较,槲皮素组小鼠视网膜细胞质中Nrf2蛋白表达上调(P<0.05),细胞核中Nrf2蛋白表达下调(P<0.05),小鼠视网膜中Keap1、HO-1、NQO-1、GCL蛋白表达下调(均P<0.05)。

结论：槲皮素可能通过Nrf2/Keap1/ARE通路,改善视网膜光损伤后的氧化应激状态,保护视网膜功能,对年龄相关性黄斑变性具有保护作用。     

槲皮素对高糖诱导的RPE细胞凋亡的保护作用及机制

目的研究槲皮素对高糖诱导的RPE细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法将A-RPE19细胞系的细胞分别培养于普通培养基和高糖培养基中,其中高糖培养基内分别加入0、50、100、150 mmol/L的槲皮素,培养24 h以后用TUNEL检测各组细胞的凋亡,并根据该结果选取槲皮素的最佳作用浓度,进行caspase3的免疫荧光染色,线粒体酶复合物的活性测定。结果高糖培养的RPE细胞的凋亡指数(TUNEL阳性细胞/总细胞数)明显高于对照组,槲皮素可以明显抑制高糖诱导的RPE细胞的凋亡,其中以100 mmol/L的浓度作用效果最强,与高糖培养组相比,其差异有明显的统计学意义(P<0.05)。高糖组的caspase3的免疫荧光染色明显强于对照组和高糖+100 mmol/L槲皮素组。线粒体复合酶Ⅱ的活性各组之间并无统计学差异。高糖组的线粒体复合酶Ⅰ和Ⅳ的活性均明显低于对照组和高糖+100 mmol/L槲皮素组(P<0.05)。结论槲皮素可以抑制由高糖诱导的RPE细胞的凋亡,其作用是通过抑制caspase3的激活和线粒体保护实现的。     

高效液相色谱法测定复方矮地茶止咳合剂中的槲皮素和山奈酚含量

目的建立高效液相色谱法测定复方矮地茶止咳合剂中槲皮素和山奈酚的含量。方法采用SUPELCO Discovery C18（4．6mm×250nm,5μm）色谱柱,流动相：甲醇-0．4％磷酸溶液（50：50）,流速：1．0mL·min^-1,检测波长：370nm,柱温：40℃,进样量：10μL。结果槲皮素和山奈酚分别在6．484-155．6μg·mL^-1、5．708～137．0μg·mL^-1与峰面积线性关系良好,低、中、高3个剂量组的平均回收率分别为93．6％、97．2％、98．2％与95．2％、94．9％、100．2％。结论所建立的方法准确可靠、灵敏度高、专属性强,可有效控制复方矮地茶止咳合剂的质量。     

HPLC同时测定芜菁子药材中槲皮素和山奈酚含量及其指纹图谱的研究

目的 建立芜菁子药材中槲皮素和山奈酚定量测定方法及芜菁子中黄酮类化合物的指纹图谱,为芜菁子质量控制提供依据。方法 采用HPLC测定芜菁子药材中槲皮素和山奈酚的含量及建立芜菁子指纹图谱,色谱条件为ODS C₁₈ (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.7 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温30 ℃。结果 样品中槲皮素和山奈酚的含量分别为0.013 1~0.035 6 mg·g^-1及0.022 0~0.048 0 mg·g^-1,平均回收率分别为102.8%和99.5%。芜菁子指纹图谱中有11个共有峰,对10批次芜菁子样品的指纹图谱进行相似度比较,相似度较高。结论 该方法重现性好,可行性强,可用于芜菁子的质量评价。     

HPLC法同时测定铁包金不同药用部位中芦丁和槲皮素的含量

目的:建立同时测定铁包金不同药用部位芦丁、槲皮素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.2%磷酸(梯度洗脱),流速为0.9 ml/min,柱温为30℃,检测波长为360 nm。结果:芦丁和槲皮素的进样量分别在0.01¹.88、0.011.88、0.01⁰.23μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系;精密度、稳定性、重复性的RSD<2%;芦丁、槲皮素的平均加样回收率分别为99.48%、102.34%,RSD分别为2.06%、2.37%(n=6)。结论:铁包金叶与藤茎部位中芦丁、槲皮素的含量均较高。该方法简单、稳定,结果准确、可靠,可用于铁包金的质量控制。     

黄酮类成分黄芩素、槲皮素、丹参素钠对吸烟致细胞毒性和DNA损伤的保护作用

目的评价吸烟致细胞毒性和DNA损伤以及黄酮类成分黄芩素、槲皮素、丹参素钠的保护作用。方法以自动吸烟机按照FTC协议吸烟产生的主流烟雾在线染毒B-16细胞和人颊黏膜细胞两种真核细胞,通过MTT比色法和单细胞凝胶电泳法检测吸烟所致的细胞毒性和DNA损伤,并考察黄芩素、槲皮素、丹参素钠的保护作用。结果吸烟可致体外培养的B-16细胞活力明显下降,两种细胞的DNA明显损伤。随着烟气作用时间的延长,表征细胞内DNA损伤程度的彗星尾矩、Olive尾矩都有增加;1 mmol/L槲皮素、黄芩素和丹参素均可明显缓解吸烟引起的细胞毒性和DNA损伤,对B-16细胞的活力提升50%左右,对人颊黏膜细胞的DNA保护效果超过60%。结论吸烟可致细胞毒性和细胞DNA损伤,但是黄酮类成分黄芩素、槲皮素、丹参素钠均对细胞和DNA具有保护作用。