应用组化、免疫组化及电镜技术诊断腹水中恶性黑色素瘤细胞

利用腹水涂片诊断色素性恶性黑色素瘤细胞 (恶黑 )不难 ,而对无色素性恶性黑色素瘤细胞则比较困难。笔者采用组织化学Ｆｏｎｔａｎａ染色显示有无黑色素 ,应用柏林蓝铁反应染色鉴别是黑色素还是含铁血黄素 ,另应用ＨＭＢ4 5、Ｓ 10 0蛋白作Ｓ Ｐ免疫组化染色与上皮性癌细胞鉴别诊断 ,应用电镜微观瘤细胞内有无不同发育阶段的黑色素小体。通过以上各种检测以达到诊断和鉴别诊断的目的。1　材料与方法1.1　材料　收集 1例疑诊为恶性黑色素瘤患者的腹水 ,常规离心 ,2 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,取白细胞层涂片 ,95 %乙醇固定 ,分别作ＨＥ、组化及免疫组…     

抗骨肉瘤单克隆抗体2G10与骨源性肿瘤组织的免疫组化反…

用本室建立的１株抗人骨肉瘤组织的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体２Ｇ１０进行ＡＢＣ法染色，对骨肉瘤和２０种其它肿瘤组织，以及２０作种正常人体组织进行了免疫组织化学定位研究，发现除了对部分骨源性肿瘤，尤其骨肉瘤有阳性反应外，对其它肿瘤均显示阴性反应，与正常成人以及胎儿的相应组织无交叉反应。     

加温对冷冻切片染色的作用

冷冻切片病理诊断已成为手术过程中确定肿瘤性质、指导临床医师决定手术方案的一种可靠手段。但是，冷冻切片HE染色细胞着色不佳，不清晰，严重影响了诊断准确性。许多病理工作者都在研究解决该问题的办法，如改良固定液、用二甲苯脱脂等，但效果仍不很理想。我们反复试验，在冷冻切片后多步骤用加温的方法做HE染色，并与不     

Ziehl-Neelsen改良染色法在痰涂片中的应用

针对结核杆菌菌体含有蜡质的特点和传统Ziehl Neelsen抗酸染色法存在的不足 ,笔者在以前工作的基础上对染色液的配方进行改良〔1,2〕,并结合微波辐射技术建立了一种快速、敏感、简便的痰涂片抗酸染色法。1　材料与方法1.1　材料　 5 3例结核杆菌痰培养阳性的痰液 ,每例涂片 2张 ,95 %乙醇固定 15～ 30min ,分别用Ziehl Neelsen改良染色法和传统的抗酸染色法染色 ,同时设阳性对照、阴性对照。1.2　染液配制　 (1)改良的Ziehl Neelsen染色液 :碱性复红无水乙醇饱和液 (相当 6 %浓度 ) 10ml,活性剂 5ml,蒸馏水85ml,先将碱性复红溶于无水乙醇…     

分化抗原gp42在人免疫细胞的表达

目的　明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法　用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果　制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论　gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。     

Warthin-Starry特殊染色、免疫组织化学和透射电镜在猫抓病病理诊断中的作用

目的 探讨Warthin-Starry银染色法、抗汉赛巴尔通体单克隆抗体和电镜在检测人巴尔通体感染、确诊猫抓病中的实用价值.方法 收集1998年1月至2008年12月诊断的77例符合猫抓病形态学改变的石蜡包埋淋巴结组织,分别使用Warthin-Starry银染色法和抗汉赛巴尔通体单克隆抗体的EnVision法进行病原体的检测.选择二者均检出丰富细菌的5例进行透射电镜观察.结果 (1)透射电镜查见汉赛巴尔通体呈多形性,圆形、椭圆形、短棒状、杆状,长0.489～1.110μm,宽0.333～0.534 tun,集群性生长.(2)61.0%(47/77)的病例Warthin-Starry银染色法查见排列成线、成簇、局灶性聚集的黑色、短小、棒状杆菌,细菌绝大多数分布在靠近被膜下的坏死灶内,以存在于细胞外为主.(3)72.7%(56/77)的病例抗汉赛巴尔通体单克隆抗体阳性表达,阳性信号主要呈点状、颗粒状,少数呈线样勾勒出细菌形状,信号定位与Warthin-Starry银染色法一致.(4)59.7%(46/77)的病例Warthin-Starry银染色和抗汉赛巴尔通体单克隆抗体染色均阳性.两种方法联用,病原体总体检出率为74.0%(57/77).二种方法检出率的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 应用Warthin-Starry银染色法、免疫组织化学和电镜技术检测猫抓病病原体能达到确诊猫抓病的目的 ,抗汉赛巴尔通体单克隆抗体染色是较Warthin-Starry银染色更理想的检测方法.     

对比分析生理盐水法与革兰染色法诊断阴道分泌物

目的为了提高对妇科阴道分泌物的检出率的临床检验,提高妇科临床诊断治疗水平,本文分别对用生理盐水直接涂片法与革兰染色法进行了妇科阴道分泌物的检测来验证说明。方法对我院189例妇科门诊患者阴道分泌物同时采用生理盐水涂片法和革兰氏染色法进行检测。结果革兰染色法霉菌检出率为（14.8%）,,滴虫15例检出率为（7.9%）,肾型相对双球菌检出率为（2.6%）,纤毛菌检出率为（1.5%）,加德纳球杆菌检出率为（11.6%）,革兰阴性双球菌检出率为（2.1%）。生理盐水法霉菌检出率为（9.5%）,滴虫检出率为（4.7%）。结论革兰法检测妇科阴道分泌物,应用革兰法进行检测准确性高,特别是可疑标本。建议将革兰染色法作为妇科阴道分泌物常规检查项目,以提高临床诊断治疗水平。     

干燥综合症合并肺孢子菌肺炎一例并文献复习

目的 探讨干燥综合症合并肺孢子菌肺炎（PCP）的早期诊断方法。方法 对1例干燥综合症合并肺孢子菌肺炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果 患者因干燥综合症接受免疫抑制剂治疗两月后出现不明原因发热、干咳,活动憋气。依据患者临床表现、胸部X线和CT征像、痰肺孢子菌六胺银染色镜检和多聚酶链反应（PCR）监测结果而确诊PCP。予克林霉素（患者磺胺过敏）、卡泊芬静治疗6 d后痰液肺孢子菌DNA载量由104/ml减为102/ml,12 d后进一步降至101/ml,经卡泊芬静治疗21 d后痊愈出院。结论 痰液标本肺孢子菌六胺银染色镜检具有高度特异性,但敏感性较低。高敏感性的PCR方法不仅可以用于PCP筛查,还可用于疗效监测。     

进一步改良Sihler's肌肉神经染色法显示SD大鼠皮肤神经

目的　探讨进一步改良Sihler's肌内神经染色法在显示SD大鼠皮肤神经分布中的应用。 方法　选取成年SD大鼠6只处死后紧贴肌肉表面分别于背侧及腹侧切取皮肤,最终获得背侧皮肤6块,腹侧皮肤6块,经10%甲醛溶液固定1月,无水乙醇脱脂3 d,并于0.25%的胶原酶Ⅰ和Ⅲ溶液中消化3 d后,经进一步改良的Sihler's肌内神经染色法染色SD大鼠皮肤。 结果　12块SD大鼠皮肤经染色后,除2块皮肤染色效果不佳外,其余10块皮肤均获得了良好的效果。在除色素的过程中,表皮常常脱落,即使不脱落,平铺的皮肤上也不能分界表皮与真皮,无法看见表皮内神经分支,且在解剖过程中剔除皮下脂肪时,部分皮下脂肪难以剔除干净,故肉眼可见部分皮下脂肪内明显的神经分布。透过X线阅片灯肉眼即可见皮肤呈现淡紫色,而神经为黑色,各区域神经分布不均,直径、形态及颜色深浅也不相同。甚至可看见神经呈现扭曲、打结的现象。 结论　经进一步改良的Sihler's肌内神经染色法染色SD大鼠皮肤,能够清晰显示肉眼可见的皮肤神经分布,这些结果将对于SD大鼠皮肤内各区域神经纤维密度的测定及动物模型中皮瓣移植后神经再生情况的研究具有一定意义。     

IFNγ-LTα与LTα诱导L929细胞凋亡信号转导的初步研究

目的：研究融合蛋白IFNγ-LTα诱导L929细胞凋亡的信号转导机制，并与LTα相比较。方法：用结晶紫染色法观察细胞毒效应；用检测试剂盒检测caspase 8和3活性的变化；观察3种信号转导分子的抑制剂对IFNγ-LTα和LTα诱导的细胞毒效应的影响。结果：IFNγ-LTα能诱导L929细胞凋亡及胞内caspase 8和3的活变化，但两种caspase产生的时间和幅度有所不同。PKC的抑制剂可促进IFNγ-LTα和LTα对L929细胞的杀伤；而PLA2及Ca^2 通道的抑制剂对杀伤则有明显的阻断作用，但对LTα的阻断强于对IFNγ-LTα的阻断。结论：IFNγ-LTα融合蛋白的抗肿瘤活性强于LTα，其信号转导特征有别于LTα。信号分子caspase与PKC、PLA2、Ca^2 之间可能存在关联。