磁性阿霉素纳米微球的制备及在高频磁场中的发热研究

制备一种在高频磁场中能感应发热的用于治疗肿瘤的阿霉素纳米微球，研究其在磁场中的热效应。用超声搅拌冷冻干燥的方法制备药物微球，平均粒径200nm左右。电镜观察其形态为球囊状。将其置于不同介质中于高频磁场中测其温度变化值，实验表明该微球在交变磁场中使介质升温。升温速度与平稳时的温度和微球的量及磁场强度成正比，介质流动性好，升温快。     

骨髓粒—单系祖细胞集落染色体SCE的制备及正常值初探

介绍骨髓粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）集落姊妹染色单体互换（ＳＣＥ）的制备方法，应用时应注意集落细胞的收集，Ｂｒｄｕ及秋水仙胺浓度和作用时间等问题，为临床细胞遗传学的研究提供了新的手段。本文用本法删定２７例健康成人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ集落染色体ＳＣＥ频率为４．５９±０．６７次／集落细胞，该值可作为正常人分髓ＣＦＵ－ＧＭ集落ＳＣＥ的正常值供临床和实验参考。     

人单核细胞趋化因子受体5〔CCR5）N—端膜外第一襻特异抗体F〔ab′）2的制备及鉴定

目的：研究人β趋化因子受体5(huCCR5)NH2端膜外第一襻特异抗体F(ab′)2的制备及鉴定方法。方法：计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2端膜外第一襻，PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX-1N中，经测序鉴定正确后，在E．coli中表达，纯化后免疫新西兰白兔。经A蛋白-Sepharose CL-4B亲和层析纯化后，用胃蛋白酶消化IgG，经S—200凝胶过滤柱分离制备F(ab′)2。结果：经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2端的特异性抗体。结论：这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′)2的制备方法，对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料，同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。     

不同培养基对人杂交瘤细胞培养效应的影响

培养液是细胞培养的基本要素,选择适当的培养液是人杂交瘤技术成功的重要因素之一。我们分析比较了三种商品化培养液RPMI1640、DMEM、IMDM对分泌人单抗杂交瘤细胞的培养效应,包括对维持细胞的活力、增殖、克隆效率及抗体分泌等参数的观察比较,发现RPMI1640对人-(人×鼠)杂交瘤细胞“87-3”与人-鼠杂交瘤“87-3”培养效应最佳,为首选培养液。     

强光干扰下的眩光评价研究

眩光是影响视觉的一个重要因素，而眩光后人眼的恢复时间则是进行眩光评价的重要标准。目前的眩光研究都是停留在针对普通照度的眩光源的研究背景下。通过对能产生高照度的眩光源照射后的人眼视觉恢复情况的实验研究，得到在强光干扰条件下的眩光影响因素关系。根据实验数据进行人眼恢复时间计算公式的修正，提出一种在强光干扰下对眩光的客观评价方法。通过实验，基本验证了该公式在高照度情况下的有效性和客观性。     

宫颈细胞学ASCUS/LSIL的临床意义及处理

目的探讨宫颈不典型鳞状上皮，低度鳞状上皮内病变（ASCUS／LSIL）的临床意义及处理方法。方法对中国医学科学院肿瘤医院2004～2006年妇科门诊用TCT（宫颈液基细胞学）的方法检出的254例ASCUS／LSIL以病理结果为金标准进行回顾性分析，其中136例进行了阴道镜检查。结果在140例ASCUS中，宫颈上皮内瘤变（CIN）病变占51．5％，其中高度病变占22．9％，114例LSIL中CIN病变占59．6％，其中高度病变占30．7％，两组资料比较差异无统计学意义，P〉0．05。其中136例中阴道镜诊断炎症47例，低度宫颈上皮内病变53例，高度宫颈上皮内病变36例及病理检查结果炎症55例，低度宫颈上皮内病变41例，高度宫颈上皮内病变40例，阴道镜与病理对照进行了～致性检验，Kappa=0．314，U=0．064，P〈0．05，一致性好。病理证实人乳头状瘤病毒（HPV）阳性的妇女中CIN发生率79％（67／84），而HPV阴性者中CIN发生率43．5％％（74／170），结果显示两组资料比较差异有统计学意义，X^2=29．88，P〈0．05。本组资料中年龄在35～55岁的妇女占83．5％与HPV阳性的妇女年龄高峰一致。结论对ASCUS的患者应与LSIL同样重视，立即进行阴道镜检查以避免22．9％的高度病变的患者漏诊或失访，对35～55岁的HPV感染的妇女应更加重视。     

重组鸡Igλ轻链真核细胞分泌表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

目的: 构建重组载体pcDNA-λ并在COS7细胞分泌表达鸡Igλ轻链, 制备抗鸡Igλ轻链的单克隆抗体(mAb).方法: PCR扩增带有信号肽的鸡Igλ轻链基因, 限制性酶切消化后, 定向克隆于真核表达载体pcDNA3, 构建具有6×His标签、分泌表达的重组载体pcDNA-λ.重组载体转染COS7细胞后, SDS-PAGE分析真核表达载体pcDNA-λ在COS7细胞的分泌表达.用2×106个雏鸡B淋巴细胞免疫BALB/c小鼠, 取脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 分别采用细胞免疫荧光和间接ELISA筛选阳性杂交瘤克隆.结果: 成功构建分泌表达鸡Igλ轻链的重组载体, SDS-PAGE分析表明在COS7细胞上清有目的蛋白的分泌表达.杂交瘤细胞经筛选与鉴定, 获得2株分泌抗鸡Igλ轻链mAb的杂交瘤细胞株, Western blot检测到该mAb对重组鸡Igλ轻链的反应性.结论: 构建了重组表达载体pcDNA-λ并在COS7细胞上清分泌表达了重组鸡Igλ轻链.并用淋巴细胞杂交瘤技术成功筛选出抗鸡Igλ轻链mAb.为深入研究鸡Igλ轻链的结构与功能奠定了基础.     

人跨膜蛋白39A原核表达载体构建、条件优化及可溶性表达

目的构建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A_(600nm)值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性。结果重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A(登录号:BC021277.2)的核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为100%。重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A_(600nm)值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A_(600nm)值为0.6～0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。     

人MASP1 N端片段原核表达载体的构建及其表达

目的:在大肠杆菌中表达人甘露聚糖结合凝集素(MBL)相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)N端片段.方法:采用PCR技术从含人MASP1 cDNA的质粒pGEM-MASP1中扩增MASP1-N端基因片段,将其插入原核表达载体pGEX4T-1,转化BL21(DE3)感受态菌诱导表达MASP1-N端蛋白,通过GSTrap亲合层析柱纯化目的蛋白,以SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定,并以ELISA分析了目的蛋白与重组MBL-CLR、重组MBL的结合活性.结果:从pGEM-MASP1中扩增得到约860 bp的基因片段,构建成重组载体经酶切出现约4 900 bp和860 bp片段,测序结果与预期的完全一致.纯化蛋白经SDS-PAGE可见Mr60000蛋白带,该蛋白可与抗GST抗体反应并能与重组人MBL-CLR、重组人MBL蛋白结合.结论:获得了表达人MASP1 N端片段的大肠杆菌菌株和重组人MASP1 N端片段/GST融合蛋白,为MASP1分子的进一步研究提供了条件.