大孔吸附树脂分离纯化单叶铁线莲总皂苷的研究

目的研究大孔吸附树脂分离纯化单叶铁线莲总皂苷的工艺条件,为单叶铁线莲总皂苷的工业化生产提供实验依据。方法采用比色法测定总皂苷;比较了5种大孔吸附树脂的静态饱和吸附量、静态解吸率,筛选出适宜的树脂;对最佳树脂进行动态吸附、解吸试验,确定最佳的吸附洗脱工艺。结果 D-101大孔树脂对单叶铁线莲总皂苷有较好的吸附分离性能。最佳工艺条件为:上样液质量浓度为生药0.2 g/mL,pH值为5,上样体积流量为1 BV/h;4 BV蒸馏水洗脱杂质;4 BV 70%乙醇洗脱总皂苷,洗脱体积流量2 BV/h。按此工艺条件生产的总皂苷质量分数达到71.53%,收率86.02%,精制度达238.81%。结论 D-101大孔吸附树脂适合富集纯化单叶铁线莲中总皂苷。     

人脐血间充质干细胞的分离培养与向神经元样细胞诱导分化的实验研究

目的 探讨来源于人脐血的间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)分化成神经元样细胞的可行性，以及在体外分离、纯化和扩增的条件。方法 无菌条件下收集正常足月剖腹产胎儿的脐带血，经肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞，以偏酸性的Mesencult^TM作为培养基进行培养和纯化，获得贴壁细胞，取扩增第三代后的MSCs向神经元样细胞诱导分化。用免疫荧光标记方法检测神经元特异性标记物。结果 来源于脐血的单个核细胞种植于特定的培养基中后，可产生贴壁细胞，主要表现为破骨样和间充质样细胞；传3代后，这些细胞可得到纯化、扩增；免疫组化标记显示经诱导后的MSCs表达神经丝蛋白(NF)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)。结论 源于脐血的MSCs在体外可以培养、扩增，并向神经元样细胞分化，可作为神经干细胞的来源而用于实验研究和临床。     

人巨细胞病毒UL32和UL44融合基因的表达及其抗原性分析

目的用聚合酶链式反应(PCR)扩增人巨细胞病毒UL32、UL44截短基因,构建pET-32a-UL32-UL44表达载体,转化宿菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,对目的蛋白进行纯化、标记HRP,用于检测IgM抗体。方法根据Gene-bank中HCMV的pp150、pp52蛋白序列,利用Protean计算机软件分析其亲疏水性和抗原性,选取适合的区段,根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物,PCR扩增目的基因序列,经测序证明无误之后,克隆pET-32a-UL32-UL44重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达,纯化目的蛋白,标记HRP,用ELISA捕获法对目的蛋白-HRP标记物的灵敏性和特异性等指标进行评价。结果成功构建pET-32a-UL32-UL44重组质粒,导入在BL21(DE3)菌株中,经诱导后目的蛋白表达于上清中,经纯化、标记HRP,标记物用于ELISA捕获法能够准确、特异地检测HCMV血清标本,80份血清检测结果显示其灵敏度可达92.5%,特异性达97.5%。结论 HCMV基因工程重组蛋白具有较好的免疫活性,为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了基础。     

高压液相色谱法纯化抗人大肠癌单克隆抗体

采用Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司的ＭＡＰＳ１００单克隆抗体纯化系统，利用羟基磷灰石层析柱对鼠腹水中抗人大肠癌单克隆抗体进行分离纯化。结果：还原性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示所获抗体为单一组分，ＥＬＩＳＡ证实抗体活性满意，所获抗体收率为２３％～５２％，重复进样收率稳定（３８．６３±２．２６）％，ｎ＝３。     

人胎盘叶酸受体蛋白的提取、纯化及鉴定

目的 建立人胎盘叶酸受体蛋白的提取及纯化方法,并对其进行定性定量检测. 方法 采集医院分娩的正常人的胎盘样品.将胎盘剪碎,组织匀浆,酸化及中和,过柱提纯,组分鉴定,除杂并用分子筛进一步纯化.利用Bradford检测蛋白浓度,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法进行蛋白分子量检测,用Western Blot对提取蛋白进行定性鉴定. 结果 用于本实验的胎盘湿重370 g.在经过亲和层析柱抽提后的8个留样组分中,组分2～5含有目的蛋白的粗提物.经过分子筛等方法除杂后,Bradford蛋白检测显示本次共提取蛋白总量345 μg.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染方法结果证实此蛋白分子量大约为35 ～40 KDa.Western Blot方法显示此蛋白与叶酸受体抗体特异结合. 结论 使用本研究方法能够从人胎盘中成功提取并纯化人源的叶酸受体蛋白,每100 g胎盘可提取叶酸受体蛋白93 μg.本研究为以后的叶酸受体抗体检测奠定了基础.     

血液净化对重度脓毒血症患者血清炎性细胞因子及预后的影响

目的 探讨血液净化对重度脓毒血症患者血清炎性细胞因子、预后的影响.方法 选取0018年7月至0019年11月我院收治的重度脓毒血症患者50例,随机分为基础组(基础治疗,05例)和干预组(基础治疗联合血液净化治疗,05例).比较两组患者治疗前后的血清炎性细胞因子水平以及预后.结果 治疗3 d后,两组的CRP、PCT、TN...     

一株产α-淀粉酶的枯草芽胞杆菌分解淀粉的能力

目的 探讨一株产α-淀粉酶菌株(B.subtilis HY-02)分解淀粉的能力。方法 将枯草芽胞杆菌(HY-02)分别接种于0．5％,1．0％,1．75％淀粉溶液,连续培养240h,检测α-淀粉酶活力、细菌计数及淀粉浓度。结果 1．75％淀粉组诱导菌株产α-淀粉酶、细菌数及发酵生物量干重均较0．5％、1％淀粉组明显增加。结论 枯草芽胞杆菌(B.subtilis HY-02)与出发菌株相比有较强的分解淀粉能力。     

血液净化室常见的护理风险分析与干预策略

目的探讨血液净化室常见的护理风险分析并分析干预策略。方法选取固定在我科进行血液透析患者共220例,将患者随机分为两个小组,每组各110例。对照组护理上依照常规血液净化程序进行,不采用护理风险分析与干预。观察组则在对照组的基础上加入护理风险分析与干预。观察两组患者护理风险发生率的变化。结果观察组护理风险发生率为3．64％,低于对照组的16．36％,两组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论通过对血液净化室常见的护理风险进行分析,提出合理的干预策略,可以有效减少临床护理风险的发生,值得各级医院进一步研究与推广。     

连续性高容量血液滤过治疗烧伤后多器官功能障碍综合征的临床观察

目的：探讨连续高容量血液滤过（CHVHF）治疗烧伤后多器官功能障碍综合征（MODS）患者的治疗效果。方法：回顾性分析16例接受CHVHF治疗的烧伤后MODS患者的临床资料。CHVHF治疗使用PRIS- MA机器及M100高通量血滤器,血管通路采用双腔中心静脉导管,抗凝使用低分子肝素或无肝素。置换液为前置换,流量4～4.5 L/h。测定治疗前后心率、体温、平均动脉压、氧饱和度、pH、氧合指数、肺泡动脉氧分压差、碳酸氢根、血肌酐、尿素氮,血钾、钠,氯,血乳酸等。结果：16例患者中存活7例。经CHVHF治疗后,患者血氧改善,血尿素氮、肌酐水平较治疗前明显降低。CHVHF治疗后体温、心率降低,血压升高。10例合并高钠血症和7例合并高乳酸血症的患者,血钠和血乳酸治疗前后比较差异显著（P〈0.01）。结论：CHVHF用于救治烧伤后MODS患者疗效确切,在清除毒素的同时,可提高肺换气功能,稳定水、电解质及酸碱平衡。     

小剂量阿加曲班在连续性血液净化治疗中的应用

目的 探讨小剂量阿加曲班在连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)中的抗凝效果和出血事件.方法 给予67例CRRT患者小剂量阿加曲班,首剂0.1 μg/kg,微量泵持续追加0.05 μg/(kg*min),测定实施治疗前、治疗结束后1 h、结束后2 h及治疗中每2 h凝血功能,采用评分方法 评价血滤器凝血和穿刺(置管)处出血及血肿情况.结果 血滤器凝血情况治疗前后无明显差异,穿刺(置管)处未见明显出血及血肿,活化部分凝血酶时间(APTT)和血浆凝血酶原时间(PT)治疗后1 h与治疗前有显著差异(P＜0.05);治疗后2 h与治疗前无差异.治疗1 h时同时检测动脉端和静脉端PT和APTT值,两者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 达到治疗抗凝效果时,所需阿加曲班剂量较小,且未发生出血事件,故小剂量阿加曲班用于连续性肾脏替代治疗抗凝效果安全可靠.