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在大肠杆菌中表达了一种抗肿瘤转移多肽——人纤连蛋白(FN) 的CellI-Hep Ⅱ-CellⅡ三结构域重组多肽(CH82), 表达效率达21% 。在低温 (22 ℃) 培养表达时, CH82大部分为可溶性产物, 经DEAE-52 层析及Heparin-agarose亲和层析可得到纯品; 在高温(37 ℃) 培养表达时, CH82 主要以包涵体形式出现, 经尿素变性与复性处理后,可通过Heparin-agarose 亲和层析得到纯品。所得纯品均具有结合肝素和结合细胞的功能, 且结合细胞的能力比双结构域FN更强, 表明两个结合细胞的功能结构域均有活性 相似文献
63.
加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化 总被引:4,自引:2,他引:2
目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白T(CTnT)。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取CTnT,以DEAE52柱层析纯化。结果经SDS-PAGE凝胶电泳初步鉴定,每100g左心室肌经此法可得11.79mgCTnT纯品,纯化后的cTnT为单一条带,分子量为37KD。结论本法提取CTnT步骤简单,纯度尚可,可做抗原使用。 相似文献
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目的构建PAI-2ΔCD突变体基因,实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人PAI-2ΔCD的分离纯化方法。方法用PCR扩增PAI-2ΔCD基因,经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后,突变体基因与原核表达载体pLY-4重组并转化蛋白酶缺陷型菌株JF1125。经温度诱导表达,表达产物用SDS-PAGE,Western印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后,经高压匀浆破菌,用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达,SDS-PAGE证实在相应相对分子质量处出现表达条带,约占全菌总蛋白的15%。Western印迹法证实表达产物具有PAI-2免疫原性,溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。5L发酵菌液可得湿菌约100g,经多步纯化后,每升发酵菌液可得纯度达97%的PAI-2ΔCD约36mg,比活性为28640AIU/mg。结论成功构建了PAI-2ΔCD突变体,实现了在大肠杆菌中的表达,并成功地分离纯化了重组人PAI-2ΔCD蛋白。 相似文献
65.
The carboxy-terminal domain of polymerase gene of Rous sarcoma virus was cloned into an expression vector under the control oflac regulatory elements, resulting in the plasmid pMF1413. Upon isopropyl--D-thiogalactopyranoside induction, viral integration (IN) protein was expressed in large quantity inEscherichia coli. The expressed recombinant protein was prepurified by successive washing of the bacterial pellet with 0.1 M NaCl and detergents. Further purification was performed in high yield by standard chromatography methods. The purified enzyme revealed selective DNA cleaving activity on supercoiled plasmid with the LTR-LTR junction fragment. The reaction was metal ion dependent, with a preference for Mn2+ over Mg2+, and showed substrate specificity at 1 mM MnCl2. 相似文献
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一种在多糖分离纯化过程中新的脱蛋白方法 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 寻找一种在多糖 (香菇多糖 )分离纯化过程中适宜的脱蛋白方法。方法 以正交试验法为主。结果 通过正交试验法找到了一种在多糖 (香菇多糖 )分离纯化过程中新的脱蛋白方法。 5因素 3水平正交试验的结果表明 ,影响脱蛋白率 ( DPR)的主要因素是 B(正丁醇 )、次主要因素是 D(乙醇 ) ,而因素 C(甲醇 )和 E(氯化钠 )的影响则较小 ;影响 DPR的主次顺序为 B>D>A(氯仿 ) >E>C。 DPR随着正丁醇浓度的增加而变化很大 ,开始缓慢上升 ,然后迅速降低 ;随着乙醇浓度的增大 ,DPR逐渐降低 ;而当氯仿浓度增大时 ,DPR则开始上升 ,然后下降 ;当甲醇浓度增大时 ,DPR则变化很小。脱蛋白的最佳条件是 A2 B2 C1 D1 E2 ,即在氯仿 4 0 %、正丁醇 10 %、甲醇 2 %、乙醇4 0 %、氯化钠 0 .0 1%的条件下 ,杂蛋白的去除率最高。验证性试验结果表明 ,在此条件下 ,杂蛋白的去除率达99.98 %。通过反复试验 ,还找到了适用于工业化生产的包括香菇原料的蒸煮、煮沸样品的浓缩、粗多糖的沉淀和脱色、粗多糖的干燥等在内的原料预处理的最佳工艺。结论 这种新的脱蛋白方法具有工艺简单、无需贵重设备、加工成本低、容易放大等特点 ,特别适合于多糖类产品的精制或其他需要去除杂蛋白的单元操作 相似文献
67.
蚯蚓纤溶酶的纯化及pH值、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响 总被引:6,自引:4,他引:6
目的纯化并鉴定蚯蚓纤溶酶 ,研究pH、温度和胰蛋白酶对其纤溶活性的影响。方法以赤子爱胜蚓为材料 ,采用硫酸铵盐析、DEAESepharoseCL 6B离子交换色谱、SephadexG 75凝胶过滤和制备电泳等分离技术纯化蚯蚓纤溶酶 ;利用纤维平板和聚丙烯酰胺凝胶电泳研究pH、温度和胰蛋白酶对蚯蚓纤溶酶纤溶活性的影响。结果分离得到纤溶酶 4种单一组分 :EFE 1、EFE 2、EFE 3、EFE 4 ;分子量分别为 2 70 0 0、2 80 0 0、2 30 0 0、330 0 0 ;4种组分对温度的适应范围较广 ;pH值对其纤溶活性的影响不尽相同 ,但都在pH低于 1.5时纤溶活性完全丧失 ;胰蛋白酶对纤溶酶 4种组分均无降解作用 ,对其纤溶活性无影响。结论纤溶酶口服药制剂宜制成肠溶型 相似文献
68.
研究用酸性盐净化湿法磷酸生产用磷矿的技术 ,考察了脱镁率最高、P2 O5损失最低的工艺条件 (p H 2~ 3,反应温度 5 0± 2℃ ,反应时间 6 0 m in,液固质量比为 2 ,脱镁剂添加量为理论量 95 % ) ,优化了工艺路线。 相似文献
69.
生化过程工程与中药现代化 总被引:6,自引:0,他引:6
在生化工程20余年的研究工作基础上。结合中药现代化开展了一些技术、材料与设备的研究开发工作。研究植物细胞、组织、器官大规模培养增殖技术,应用于细胞代谢产物、生物转化和人工育种及发根,实现了工厂化生产,并成功研制多种类型的生物反应器;在原有化学工程提取分离技术的基础上,发展了反应分离耦合、微波辅助提取等新技术,实现了高效浸出,并且节能、节水;此外,又发展了包括反胶团萃取、一步三相萃取青霉素、泡沫分级分离、膜分离、高速逆流色谱分离纯化等新技术。高速逆流色谱技术是一种没有固相载体的液一液多级逆流萃取技术,避免了不可逆吸附,已成功用于多种天然产物的分析和分离,作为研究中药指纹图谱的新方法具有很好的精密度和重现性。高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳、质谱等技术在指纹图谱研究中发挥了重要作用。与此同时,还研制了多种分离介质,并在药物的修饰与包埋方面做了大量工作。另外,在海洋药物研究领域,创造了连续培养连续采收的新流程、新技术.进行了转基因藻的培养。用于生产基因工程产品。 相似文献
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