miR-149与肿瘤关系的研究进展

miRNAs是一类长度约为20~25个核苷酸,参与基因调控表达的内源性非编码RNA。miR-149作为miRNAs的重要成员,在多种肿瘤中表达异常,其表达水平与肿瘤细胞增殖、转移、凋亡、耐药、患者的早期诊断及预后密切相关。因此,miR-149有望成为新一类抗肿瘤治疗的靶点。     

PRL-3调节PI3K信号通路在促进结肠癌细胞增殖侵袭中的作用

【目的】 研究肝再生磷酸酶-3 (PRL-3)的过表达与PI3K信号通路的调节及其与结肠癌细胞增殖侵袭的关系?【方法】 构建稳定转染PRL-3基因和空白对照质粒的结肠癌细胞株LoVo- PRL-3和LoVo-VC,用qRT-PCR和Western blot的方法对miR-21及其靶蛋白PTEN的表达进行检测,在稳转细胞株中转染miR-21或对其进行敲除,用CCK-8?Tanswell实验对细胞的增殖侵袭能力的变化进行研究?【结果】 LoVo- PRL-3细胞的增殖侵袭能力要强于对照组LoVo-VC细胞?在结肠癌细胞株LoVo-PRL-3中miR-21的表达上调而PTEN的表达被下调,在LoVo-VC细胞中过表达miR-21促进了细胞的增殖侵袭并降低PTEN的表达,而在LoVo- PRL-3细胞中敲除miR-21抑制了细胞的增殖侵袭并能部分恢复PTEN的表达?【结论】 PRL-3通过上调miR-21抑制PTEN的表达,调节了PI3K信号通路,从而促进了结肠癌细胞的增殖侵袭?     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

miR-143和miR-520d-5p在胃癌组织中的异常表达

目的 应用MicroRNAs （miRNAs）芯片技术筛选胃癌组织中差异表达的miRNAs,研究与胃癌相关的miRNAs.方法 从3对手术切除的胃和相配对的正常胃组织中提取总RNA,miRNA芯片检测miRNA表达情况,然后在47例配对的胃癌和正常胃组织中,用Real-time RT-PCR（Taqman）对部分差异表达miRNA进行验证.结果 芯片结果显示：与配对的正常胃组织相比,有62个miRNAs在胃癌中异常表达,其中42个miRNA高表达,20个miRNA低表达.用Real-time RT-PCR（Taqman）验证显示：miR-143在胃癌组织中表达显著降低（JP=0.002 9）;miR-520d-5p在胃癌组织中表达显著提高（P =0.032）.结论 miR-143和miR-520d-5p可能参与了胃癌的发生过程.     

重型β地贫患儿外周血miR-144基因的检测及意义

目的检测重型β地贫患儿外周血miR-144基因表达水平,并分析miR-144与珠蛋白比率变化的关系。方法运用RT-PCR分别检测各20例重型β地贫患儿与健康对照组外周血miR-144基因表达水平及α/β珠蛋白的比率变化。结果与健康对照组比较,重型β地贫患儿外周血miR-144表达水平下降,差别有统计学意义,并且与α/β珠蛋白基因比率变化呈负相关性。结论微小RNAmiR-144可能调控重型β地贫患儿α/β珠蛋白基因比率的变化,将为重型β地贫的基因调节治疗提供新的实验依据。     

miR-26a抑制胃癌AGS细胞生长的分子机制

目的 检测miR-26a在胃癌组织的表达改变,明确miR-26a调控胃癌细胞生长的分子机制。方法 运用qRT-PCR检测71例胃癌及相应癌旁正常组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a模拟物转染胃癌细胞AGS,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对AGS细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在71例胃癌组织中表达下调0.44倍;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,转染MTDH siRNA和miR-26a模拟物组AGS细胞从48 h起OD值分别为（0.158±0.006）、（0.201±0.006）,与对照组细胞相比（0.515±0.032）、（0.479±0.028）,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 miR-26a通过靶向调控MTDH的表达而抑制胃癌细胞的生长。     

胃癌组织中血管生成素样蛋白2和miR-211表达水平与其预后的关系

目的 探讨胃癌组织中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和miR-211表达水平与其预后的关系.方法 采用免疫组化法检测胃癌根治术治疗的62例患者胃癌组织及其相应癌旁组织中ANGPTL2和miR-211的表达水平,并分析其对胃癌患者预后的影响.结果 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率分别为88.71%和83.87%,均显著高于其癌旁正常组织的3.23%和8.06%(P<0.05).62例患者随访3年的复发率、无病生存期(DFS)和3年生存率分别为45.16%、(16.62±4.78)个月和62.90%,且ANGPTL2和miR-211阳性表达患者的复发率高于阴性表达患者,DFS短于阴性表达患者,3年生存率则低于阴性表达患者(P<0.05).logistic线性回归分析结果显示,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率均可明显影响其预后情况(P<0.05).结论 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率较高且可影响其复发率、DFS和3年生存率等预后情况,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达可能作为其不良预后评估的参考指标.     

靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达

目的 构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响.结果 重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%.结论 成功构建了靶向miR-221的siRNA 表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长.     

miR-19b转基因小鼠的构建及表型分析

目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析?方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZ○Ｒ PCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重组酶连接到带有alpha-MHC 启动子的载体上?将所得载体线性化后,采用显微注射方法注射到小鼠胚胎干细胞内?再将所得的重组胚胎干细胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宫内,在所得的子代,即Founder小鼠中采用特异的引物鉴定出转基因小鼠,并选出相应的品系,进行表型分析?结果:成功构建miR-19b转基因小鼠,且miR-19b转基因小鼠舒张期室间隔厚度?舒张期左室游离壁厚度以及射血分数均有升高?结论:心肌特异性过表达miR-19b可以导致心脏肥大?     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.