长链非编码RNA TUSC8调控miR-137对宫颈癌迁移和侵袭的影响

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA TUSC8调控miR 137对宫颈癌迁移和侵袭的影响及其机制。方法 qPCR检测TUSC8和miR 137在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的表达情况及差异,分析TUSC8与宫颈癌患者临床病理学参数之间的相关关系,双荧光素酶报告基因检测TUSC8与miR 137之间的相互作用;Transwell侵袭实验检测抑制TUSC8后宫颈癌细胞侵袭行为的变化情况;划痕愈合实验检测抑制TUSC8后宫颈癌细胞迁移行为的变化情况;裸鼠体内成瘤实验抑制TUSC8后宫颈癌细胞的成瘤能力的变化。结果 与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中TUSC8和miR 137的表达水平均相对上调,差异有统计学意义（P＜005）;TUSC8的表达与宫颈癌的病理分期相关以及淋巴结转移情况有关,分期越高,TUSC8在宫颈癌组织中表达越高,淋巴结转移的患者中TUSC8的表达也相对较高;双荧光素酶实验证实TUSC8能与miR 137的3’ UTR特异性结合,可以调控miR 137的表达与活性;抑制TUSC8的表达后可以抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制TUSC8后宫颈癌细胞的成瘤能力受到相应的抑制。结论 TUSC8可以调控miR 137的表达影响宫颈癌细胞的迁移和侵袭行为。     

Microrna-34a在鼠膝骨关节炎中的作用

目的:研究miR-34a在小鼠膝骨关节炎模型中的作用。方法:建立小鼠膝骨关节炎模型,行HE染色,对膝关节软骨损伤进行Mankin评分,然后取小鼠膝关节软骨细胞进行培养,RT-PCR检测miR-34a的表达,western-blot检测凋亡相关因子bcl-2、MMP-13的蛋白表达。结果:小鼠膝骨关节炎模型中,Mankin评分升高,miR-34a的表达升高,MMP-13亦升高,而bcl-2的表达降低。结论:在小鼠膝骨关节炎模型中,过表达的miR-34a,导致MMP-13的表达升高以及bcl-2的表达降低,加速骨关节炎进程。这说明沉默miR-34a可能成为防止骨关节炎进程的新方法。     

URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与miR-155表达的关系

目的:探究URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与miR-155表达的关系.方法:选择2014年1月~2015年1月来我院妇产科行清宫术后的孕妇的标本64例,其中URSA患者38例,剩余26例,将64例患者按照是否为URSA患者分为两组,即URSA组、对照组.对miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl及血管新生分子VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表达量记录,并与miR-155的表达量进行对比.结果:miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量呈正相关,与血管新生分子VEGF、HIF-1α的表达量呈正相关,与sFlt-1的表达量呈负相关,且两组患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表达量不同,URSA组显著低于对照组,且URSA组miR-155、VEGF、HIF-1α的表达量显著低于对照组,sFlt-1的表达量则显著高于对照组.结论:URSA绒毛组织中细胞的凋亡及血管新生与miR-155存在关系,且miR-155的表达量下降则会导致绒毛组织中的细胞过度凋亡.     

miR-149-5P调控β-catenin/MMP2/E-cadherin介导胃癌BGC-823和MKN28的细胞迁移

目的 观察miR-149-5P对胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移的影响。方法 采用qRT-PCR方法检测miR-149-5P在胃粘膜上皮细胞(GES-1)与BGC-823和MKN28细胞中的表达。分别转染miR-149-5P mimics、NC、inhibitor和inhibitor-NC,采用qRT-PCR方法验证转染效率,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达或抑制miR-149-5P后胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移能力。采用Western Blot检测转染miR-149-5P mimics或inhibitor后BGC-823和MKN28细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白表达水平。结果 qRT-PCR实验结果显示:与GES-1相比,miR-149-5P在BGC-823和MKN28细胞中表达显著降低;转染mimics后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平显著升高,而转染inhibitor后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平下降。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示:转染mimics后可以抑制BGC-823和MKN28细胞迁移,而转染inhibitor后,可以促进BGC-823细胞迁移,MKN28细胞并无明显变化。Western Blot实验结果显示:在BGC-823和MKN28细胞中过表达miR-149-5P可上调E-cadherin的蛋白表达,抑制β-catenin和MMP2蛋白表达,而抑制miR-149-5P的表达可下调E-cadherin的蛋白表达,促进BGC-823细胞中β-catenin和MMP2蛋白表达,但转染inhibitor后MKN28细胞中E-cadherin、β-catenin和MMP2蛋白表达水平并无明显变化。结论 miR-149-5P可以抑制胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移。     

miR-223靶向NLRP3影响高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT发生的机制

目的:探讨miR-223对高糖诱导的肾小管上皮(renal tubule epithelia,NRK-52E)细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为对照组(5 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖+模拟物对照组(转染miR-223模拟物对照后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理)和高糖+模拟物组(转染miR-223模拟物后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-223、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA的表达,Western blot检测NLRP3蛋白和EMT相关蛋白α-SMA、E-cadherin的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-223和NLRP3的靶向关系。另外,构建NLRP3过表达的NRK-52E细胞株,观察NLRP3过表达对miR-223过表达的NRK-52E细胞EMT进展的影响。结果:与对照组比较,高糖刺激后可引起miR-223和E-cadherin蛋白的表达降低,而NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白表达升高(P<0.05)。与高糖组比较,转染miR-223模拟物后高糖环境下NRK-52E细胞中miR-223和E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);但转染miR-223模拟物阴性对照后对高糖环境下的NRK-52E细胞无显著影响(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实NLRP3是miR-223的靶基因。转染pcDNA3.1-NLRP3过表达质粒成功上调NLRP3表达后,miR-223过表达对EMT进程抑制作用得以部分逆转。结论:miR-223可通过靶向NLRP3抑制高糖诱导的NRK-52E细胞EMT的发生。     

miR-93-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的 微小miRNA-93-3p（miR-93-3p）对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为NC组、HG组、anti miR NC组、anti miR-93-3p组、HG+ miR NC组、HG+miR-93-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR 93 3p的表达;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（C caspase-3）、磷酸化 磷脂酰肌醇激酶（p-PI3K）、磷酸化 蛋白激酶 B（p-AKT）表达量。结果 与NC组相比,HG组miR 93 3p的表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与anti miR NC组相比,anti miR-93-3p组细胞存活率显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,C caspase 3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著升高（P＜0.05）;与HG+ miR NC组相比,HG+miR 93 3p组细胞存活率显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,C caspase 3、p PI3K、p AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,TNF α、IL 6水平显著降低（P＜0.05）。结论 miR 93 3p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌。     

miR-27在乳腺癌中的表达及意义

目的 检测乳腺癌组织中miR-27的表达,并探讨其表达水平与乳腺癌临床病理特征的相关性。方法 采用原位杂交技术检测67例乳腺癌组织中miR-27的表达,分析其表达水平在复发转移组并与无复发转移组的差异与肿瘤大小、淋巴结转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER-2及月经状况等临床病理特征之间的关系。结果 miR-27在转移组乳腺癌组织中的表达明显高于非转移组（P ＜0.01 );miR-27的表达与肿瘤的大小有关（P ＜0.05）,与淋巴结转移有关（P ＜0.01 );与雌孕激素受体、Her2及月经状况未见明显的统计学差异（P ＞0.05）。结论 miR-27在乳腺癌组织中高表达可能与乳腺癌的恶性程度及预后有关,有可能成为乳腺癌新的预后指标及治疗靶点。     

MicroRNA expression patterns of tumors in early-onset colorectal cancer patients

Background

The expression of microRNAs (miRNAs) may differ in tumors from patients with different ethnic origins and ages. The aims of the present study were to clarify the appropriate alterations of miRNA expression associated with the early stages of carcinogenesis in early-onset Turkish colorectal cancer (CRC) patients and to define specific biomarkers that could be used as new diagnostic and prognostic markers for this population.

Materials and methods

The expression profiles of 38 different miRNAs associated with CRC were evaluated using miRNA polymerase chain reaction arrays in tumors and surgical margin tissue samples from 40 sporadic early-onset Turkish CRC patients. The relationships between the miRNA expression profiles and the characteristics of the tumors and patients were evaluated.

Results

The expression of miR-106a was found to be upregulated, and miR-143 and miR-125b levels were found to be downregulated in tumor tissues compared with the normal tissues. The high expression level of miR-106a (2.93-fold; P = 0.031) and low expression level of miR-125b (2.42-fold; P = 0.063) were observed in tumors with lymph node metastases compared with the normal colorectal mucosa samples. However, the deregulation of these miRNAs was not significantly associated with survival (log-rank P > 0.05).

Conclusions

The present results implied that miR-106a and the miR-125b were associated with the formation and invasion of colorectal tumors. Thus, these miRNAs might be used as significant prognostic factors and indicators of early-stage CRC. Further studies and validations are required; these miRNAs may provide novel molecular targets for CRC treatment.     

microRNA-139-5p及其靶基因Notch1在结直肠癌中的作用

目的：探讨microRNA-139-5p（miR-139-5p）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞转移和侵袭的影响。 方法：用荧光定量PCR方法检测miR-139-5p在结直肠癌组织与不同结直肠癌细胞株中的表达变化;用Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miR-139-5p转染及miR-139-5p抑制对结直肠癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miR-139-5p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证,Western blot方法检测miR-139-5p转染对靶基因表达的影响。 结果：与各自的正常对照组比较,结直肠癌组织与结直肠癌细胞系中miR-139-5p表达均明显降低（P<0.05）。结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞转染miR-139-5p后,转移与侵袭能力均明显降低（均P<0.05）,而miR-139-5p抑制剂处理后,两种细胞的的侵袭能力均明显增强（均P<0.05）。生物信息学预测显示,Notch1是miR-139-5p的靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示,转染miR-139-5p后,结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞中Notch1蛋白表达均明显下调（均P<0.05）。 结论：miR-139-5p可能通过调节Notch1的表达而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭,而下调的miR-139-5p可能在结直肠癌的发生发展中起了重要作用。     

胃癌组织中miR-497表达及其生物学意义

目的检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异,寻找其下游作用靶点。方法选取2010-2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织。用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达;在线软件预测miR-497靶基因,用阴性对照及miR-497-mimics转染SGC-7901细胞系,RT-PCR及Western检测胃癌细胞miR-497过表达后靶点基因mRNA及蛋白水平的改变;MTT法检测miR-497-mimics组（miR-497过表达）细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗的敏感性。结果①miR-497表达量在胃癌组织中明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．01）。②BCL2L2被预测为miR-497的靶基因,miR-497在胃癌SGC-7901细胞中过表达后BCL2L2蛋白表达在miR-497-mimics组细胞中明显弱于阴性对照组细胞,BCL2L2mRNA在2组细胞中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。miR-497-mimics组细胞对5-FU的Ic50值明显低于阴性对照组细胞（P=0．0046）。结论miR-497在胃癌组织中低表达,BCL2L2为miR-497的靶基因,miR-497过表达可提高胃癌细胞对5-Fu的敏感性,这为进一步研究miR-497与BCL2L2在胃癌中的作用及治疗提供了新的方向。