bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。     

反义寡核苷酸联合磁性载药微球靶向治疗耐药裸鼠人胰腺癌

目的 观察辐射及多药耐药基因逆转剂反义寡核苷酸( mdr1ASON)联合5-氟尿嘧啶磁性白蛋白微球(5-Fu-MAMS)靶向治疗耐药裸鼠人胰腺癌模型的效果.方法 构建人胰腺癌耐药细胞株(SW1990/Fu),建立裸鼠人胰腺癌耐药模型,选择适当的磁场,施加于肿瘤表面,瘤内注射mdr1ASON及5-Fu-MAMS,观察肿瘤生长,检测其对耐药裸鼠人胰腺癌的治疗效果.结果 在外加磁场的磁导向作用下,5-Fu-MAMS能定位于肿瘤组织,联合mdr1ASON能显著抑制肿瘤生长,肿瘤体积抑制率达到85.00％,肿瘤重量抑制率达到87.74％,与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论　辐射促转染的mdr1ASON联合磁性载药微球对肿瘤细胞具有较好的耐药逆转作用.     

siRNA对SGC7901/VCR细胞mdr1基因沉默效果的影响因素分析

目的分析siRNA沉默人胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1基因效果的相关因素。方法设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNA(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RTPCR和免疫印迹检测mdr1mRNA和Pgp的表达、流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性,综合这4方面结果评价4条siRNA的沉默效果情况;用分子生物学软分析siRNA沉默效果的影响因素。结果沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列编码Pgp的跨膜区而且自身无茎和袢;沉默效果较差的mdr1si3071和最差的mdr1si1513靶序列编码Pgp的胞内区,前者自身成茎和成袢。沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列在靶位点和靶位点外间有较少的碱基配对和氢键。siRNA的沉默效果与siRNA3’5’端3个碱基中的A/U数量、N1和N19、GC含量间无规律可循。结论siRNA沉默SGC7901/VCR细胞mdr1的效果与靶序列的结构关系密切。     

托瑞米芬逆转肺癌耐药细胞株SP/N多药耐药性的研究

目的 探讨托瑞米芬(toremifene,TOR)逆转肺癌(lung cancer,LC)耐药的机制.方法 采用四氮唑盐(MTT)比色法检测托瑞米芬对肺癌耐药细胞SP/N的逆转效应及对化疗药长春瑞滨(novelbine,NVB)敏感性的影响;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TOR处理SP/N前后细胞耐药基因的表达变化;免疫组化(IHC)检测TOR对SP/N耐药蛋白表达的逆转.结果 肺癌耐药细胞SP/N中可检测到mdr1 mRNA及相应蛋白P-gp的表达,无MRP和LRP表达.托瑞米芬(5 μmol/L或10 μmol/L)可以抑制耐药细胞SP/N的mdr1 mRNA表达水平,增加长春瑞滨对SP/N的抑制效应.结论 雌激素受体拮抗药托瑞米芬可以逆转mdr1 P-gp介导的肺癌多药耐药,部分恢复耐药肿瘤细胞对化疗药物(长春瑞滨)的敏感性.     

联合转染mdrl和mcll基因短发夹RNA干扰表达质粒逆转K562/A02细胞耐药的实验研究

目的构建针对 mdrl 和 mell 基因的短发夹 RNA(shRNA)干扰表达质粒,并探讨联合转染对 K562/A02细胞耐药的逆转作用。方法根据 mdrl 和 mell 基因表达序列设计有效的 RNA 干扰片段,分别将其构建入质粒表达空载体中,以获得两种基因特异性 shRNA 干扰表达质粒;然后在脂质体介导下分别和联合转染 K562/A02细胞,用 G418和(或)Hygro B 筛选出稳定表达的细胞克隆。用RT-PCR 分析 mdrl 和 mcll mRNA 的表达;MTT 法检测阿霉素对 K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50));流式细胞术测定细胞 P-糖蛋白表达水平以及细胞凋亡率。结果成功构建两个基因的 shRNA干扰表达质粒。mdrl、mell shRNA 干扰表达质粒单独和联合转染 K562/A02细胞可有效封闭相应基因表达,联合转染组 mdrl 基因和 mell 基因的 mRNA 相对表达水平分别是未转染细胞的52%,44%。mdrl、mell shRNA 干扰表达质粒单独和联合转染后 K562/A02细胞耐药逆转率分别为63.8%,71.1%,83.1%,转染两种质粒组对 K562/A02细胞耐药逆转率最高,P 糖蛋白相对表达量由未转染组的19.70±1.15降至6.40±0.92(P<0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率由(1.53±0.42)%提高至(7.77±0.42)%(P<0.01)。联合转染两种质粒组和单独转染组比较,细胞对阿霉素敏感性和阿霉素诱导的细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论转染 mdrl 或 mell 基因的 shRNA 干扰表达质粒可有效抑制相应基因表达,皆不同程度逆转 K562/A02细胞对阿霉素的耐药性;联合转染两种质粒可显著增加逆转耐药的效果。mell 基因可能与 K562/A02耐药相关。     

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901／VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA（mdr1si2631和mdr1si3071）,转染SGC7901／VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901／VCR细胞48h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79．59％及59．98％。结论siRNA可逆转SGC7901／VCR细胞mdr1介导的多药耐药。     

多药耐药基因转染小鼠骨髓细胞及在化疗中骨髓保护的研究

目的 探讨多药耐药基因（mdrl)对骨髓细胞在化疗中的保护作用，寻找一种防治化疗中抗癌药物所致骨髓抑制的有效方法。方法 以小鼠骨髓细胞为靶细胞，通过逆转录病毒介导，采用mdrl表达质粒PHamdrl/A，将mdrl基因转入骨髓细胞。并通过将转染mdrl基因的骨髓细胞回输入同种小鼠体内的骨髓移植动物模型，观察了移植小鼠对抗癌药物的对抗性。同时分别采用PCR技术、免疫组化和柔红霉素排泄试验检测mdrl基因在小鼠体外及体内的表达和功能。结果 ①成功地将mdrl基因导入小鼠骨髓细胞之中，转染率达到35％；②采用程序性移植方法成功建立了mdrl转基因鼠骨髓移植模型；③mdrl基因转染的骨髓细胞在化疗中有明显的骨髓保护作用，对紫杉醇耐受性高于正常6倍，对环磷酰氨耐受高于正常6－7倍；④PCR、免疫组化、柔红霉素排出试验证实mdrl基因在体内有有效整合及表达。结论 mdrl基因转染骨髓细胞在化疗中可保护骨髓细胞免受抗癌药物的损伤。     

白血病细胞多药耐药基因表达与化疗耐药关系的研究

目的 研究ｍｄｒｌ基因表达与临床化疗的关系。方法 选择４４例白血患者和５例正常对照者，运用ＲＴＰＣＲ方法检测ｍｄｒｌ基因表达，同时评估患者对化疗的反应。结果 白血病患者初治组ｍｄｒｌ阳性表达率为７８．９％，缓解组为５５．６％，难治复发组为９３．３％，对照组无一人表达；ｍｄｒｌ阴性及低度表达者中有８２．４％的人达到ＣＲ，而ｍｄｒｌ中、高度表达者中仅３７．０％的人达到ＣＲ。结论ｍｄｒｌ基因表达增高与化     

多药耐药基因1和CD_(34)在急性白血病的表达及相关性的临床研究

目的 :初步探讨多药耐药基因 1(mdr1)和 CD34 在急性白血病 (AL)中的表达及二者在多药耐药 (MDR)中的相关性。方法 :对 5 9例初发 AL患者治疗前及完全缓解 (CR)后 ,应用流式细胞仪 (FCM)测定 CD34 表达情况及半定量多聚酶链反应 (RT- PCR)测定 mdr1m RNA水平。结果 :m dr1、CD34 分别在急性髓性白血病 (AML)与急性淋巴细胞性白血病 (AL L)的表达无差异。mdr1+与 CD+ 34 呈正相关。COX回归分析 :AL 患者 CD34 、m dr1过度表达均对疗效有影响 ,而 m dr1表达更具判断预后价值。经 L og rank检验 ,mdr1+组与 mdrl-组、CD+ 34 组与 CD34 -组 CR率有显著性差异。结论 :mdrl和 CD34 均为 CR率低、疗效差、预后不良的重要因素。