恶性淋巴瘤患者多药耐药的研究

应用逆转录－多聚酶链反应技术及免疫组化方法对２５例初治及２５例复发的恶性淋巴瘤患者的多药耐药进行了前瞻性分析。结果发现：初治患者仅８％（２／２５），而复发患者６０％（１５／２５）ｍｄｒｌｍＲＮＡ表达阳性（Ｐ＜０．０１）；初治患者仅４％（１／２５），而复发患者４８％（１２／２５）ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）表达阳性（Ｐ＜０．０１）；ｍｄｒ１ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ表达阳性患者的化疗有效率（ＣＲ－ＰＲ）明显低于ｍｄｒ１ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ表达阴性的患者（Ｐ＜０．０１）。结果表明：ｍｄｒｌ基因及Ｐ－ｇｐ表达的检测对恶性淋巴瘤患者化疗的敏感性及预后具有预测价值，可为临床化疗方案的个体化提供依据。     

抑制核转录因子κB活性对SGC7901/VCR细胞mdr1表达及凋亡的影响

目的 观察突变型IκBα抑制核转录因子κB(NF-κB)活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1(mdr1)的表达及细胞凋亡的影响.方法 突变型IκBα真核表达重组体(pCMV4-mIκBα)经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁移率实验(EMSA)检测SGC7901/VCR细胞核内NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测细胞内mdr1的表达,荧光分光光度法检测罗丹明123(Rh123)的胞内聚集,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 pCMV4-mIκBα瞬时转染人SGC7901/VCR细胞24 h后,可显著抑制NF-κB活性达64%,抑制mdr1的表达达75%,使Rh123在细胞内的聚集增加2.3倍.转染24 h后SGC7901/VCR细胞凋亡率为(14.15±1.52),与对照组(4.37±1.31)比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 突变型IκBα抑制NF-κB活性对耐药胃癌细胞株mdr1的表达有直接抑制作用,并促使耐药胃癌细胞凋亡.     

抑制mdr1基因对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

目的:探讨用反义技术抑制癌基因mdr1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响。方法:设空白组、mdr1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)为对照组以及mdr1反义寡核苷酸组,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后mdr1表达水平的变化。用集落形成试验检测各实验组照射后人宫颈癌HeLa细胞株集落形成率,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达。结果:mdr1反义寡核苷酸能有效地抑制mdr1癌基因的表达,经脂质体介导的mdr1反义寡核苷酸作用的宫颈癌细胞经60Coγ射线照射后其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,而凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达显著下调,与对照各组比较有显著差异(P<0.05)。结论:mdr1反义寡核苷酸通过抑制mdr1基因降低人宫颈癌HeLa细胞放射抗性。其辐射增敏作用可能与mdr1反义寡核苷酸增加照射后肿瘤细胞的凋亡率有关。     

热带念珠菌外排泵耐药的研究

目的研究耐氟康唑热带念珠菌临床株Fc30的外排泵耐药机制。方法运用半定量RT-PCR技术研究外排泵基因mdr1 mRNA水平与耐药的相关性。结果耐药株Fc30的mdr1基因mRNA灰度比值约为敏感株Fc17的2．3倍。结论与敏感株相比，耐氟康唑热带念珠菌Fc30外排泵基因mdr1过度表达与耐药相关。     

Expression of mdrl, mrp, topoisomerase IIα/β, and cyclin A in primary or relapsed states of acute lymphoblastic leukaemias

Summary. In a series of 60 ALL samples drawn during different stages of the disease we used a cDNA-PCR approach to analyse the relative mRNA levels of the MDR-associated genes encoding mdrl/P-glycoprotein, mrp, and the topoisomerase II isozymes α and β. Expression analysis of the cyclin A gene was included to examine cellular proliferation activity. The expression of gapdh served as an internal standard. Calculating the mean values we found: (i) a distinctly lower mdrl gene expression in primary ALL and first relapses compared to bone marrow from healthy donors, (ii) no change in mdrl and mrp, but a decreased topoisomerase IIα gene expression in first relapses of ALL compared to the primary leukaemia, and (iii) increased mdrl and mrp levels combined to decreased topoisomerase IIα levels in recurrent relapses of ALL showing significant correlations (mdrl/mrp: r_s=+0.6833, P <0.05: mdrl/topollα: r_s− 0.6727, P < 0.05). The expression of the topoisomerase IIá gene was correlated to that of cyclin A, indicating a link of its expression to cellular proliferation. Our findings suggest that a multifactorial MDR including mrp appears particularly in recurrent relapses of ALL. which often do not respond to chemotherapy. Nonetheless, some individual samples showed gene expression levels very different from the mean values calculated for a particular state of the leukaemia, indicating the need of an individual expression analysis of MDR-associated genes.     

用原子力显微镜表征K562/A02细胞Mdr1基因DNA的实验研究

目的:运用原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)表征K562/A02细胞多药耐药基因Mdr1启动子区域的DNA。材料与方法:PCR扩增K562/A02细胞Mdr1基因启动子区域769bp的DNA,产物纯化后,分别按终浓度为5ng/μl、10ng/μl、20ng/μl固定在用1ng/μlL型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片制备成观测样本。原子力显微镜观测样本,获取扫描图像后追踪DNA分子轮廓,进行模数分析。结果:用原子力显微镜能够成功地表征K562/A02mdr1基因启动子区域769bp的DNA片段,获得清晰的二维及三维图像。我们推测原子力显微镜观测该长度的DNA样本的最佳浓度为10ng/ul左右,在此浓度下对其三维图像进行图像处理后分析的DNA分子轮廓结果如下:DNA分子链的长度为(260.13±2.29)nm(n=50),平均宽度为(11.88±0.92)nm,双链的平均高度为1.2nm。结论:原子力显微镜能够成功地表征K562/A02细胞Mdr1基因启动子区域的DNA,获得清晰的二维及三维图象,并且能够直观地分析DNA轮廓,为进一步在分子层面上探讨研究Mdr1基因遗传信息提供了一种新的简单、直观、可靠的方法。     

RNA干扰沉默mdrl基因联合阿霉素对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM增殖的抑制作用

目的:观察RNA干扰沉默mdrl基因后化疗药物对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM增殖的影响.方法:RT-PCR检测靶向于mdrl基因的小发夹状RNA(pshRNA-mdrl)对SKOV3/ADM细胞内mdr1mRNA表达的影响;采用MTT法及软琼脂克隆形成实验测定pshRNA-mdrl联合化疗药物阿霉素对SKOV3/ADM的增殖抑制作用.结果:pshRNA-mdrl能抑制SKOV3/ADM细胞mdr1mRNA的表达,pshRNA-mdr1联合阿霉素明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖.结论:靶向于mdr1的pshRNA联合阿霉素能显著抑制SKOV3/ADM的增殖,增敏化疗.     

多药耐药基因及P—糖蛋白在正常涎腺组织的表达

目的 探讨多药耐药基因（mdrl)与P－糖蛋白（P－gp)在正常涎腺组织的表达与功能,方法 采用PCR和免疫组化法对15例正常涎腺组织进行mdrlm RNA及p-gp的检测,结果 mdrlmRNA阳性率为40％,IOD均值为0．245,P－gp阳性率为66．7％,定位于正常涎腺的分泌管,结论 P－gp可能参与了涎腺的正常生理功能,尤其是涎腺的分泌功能。     

多药耐药基因的人骨髓细胞转染及其对抗癌药的抗性增强作用

为探讨mdrl基因转染增强人骨髓细胞对抗癌药的抵御能力的可能性.通过脂质体介导,用含人mdrlcDNA表达质粒pHaMDR1/A,将mdrl基因转染人骨髓细胞,分别采用流式细胞术和免疫组化检测转染细胞mdrl基因的表达产物--P糖蛋白(Pgp),并用罗丹明试验证实其生物活性.同时,采用集落培养及抗性试验检测mdrl基因转染的人骨髓细胞对阿霉素、秋水仙碱、长春新碱和Vp16的抵御能力.结果mdrl基因被成功地导入了人骨髓细胞并获得了表达,罗丹明试验证实了Pgp具有完整的生物功能.mdrl基因转染的人骨髓细胞对上述抗癌药的抵御能力明显增强.     

结直肠癌中p53,PCNA和mdr1的表达及其意义

目的 探讨p53,PCNA,mdr1在结直肠癌中表达程度及其临床病理意义。方法 应用免疫组化法检测86份结直肠癌患者的手术标本。结果 86份结直肠癌组织中p53基因表达阳性的40份,阳性检出率为46.51％(40/86),PCNA表达(+++～++++)标本为63份,高表达率为73.26％(63/86),mdr1基因表达阳性18份,阳性检出率20.93％(18/86)。结直肠癌p53,PCNA,MDr1的表达与患者病灶部位、组织学分型、肿瘤浸润程度以及淋巴结转移之间无统计学意义(P>0.05)。结论 应用免疫组化法联合检测p53,PCNA,mdr1在结直肠癌中的表达情况,有助于判断患者预后及预测化疗效果、指导治疗方案的制订。