卵巢浆液性腺癌肿瘤微环境中CD8~+TILs密度及PD-L1的表达与临床意义

目的:研究卵巢浆液性腺癌肿瘤微环境中CD8~+肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)密度及癌细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达情况与临床意义。方法:收集2004年7月至2010年12月于上海交通大学医学院附属仁济医院行肿瘤细胞减灭术的116例卵巢浆液性腺癌患者组织标本,免疫组化检测肿瘤组织CD8~+TILs密度及癌细胞PD-L1表达情况;Spearman相关性分析癌细胞PD-L1表达水平与癌巢及间质CD8~+TILs数目的关系;采用乘积极限法进行基于癌巢CD8~+TILs密度及肿瘤细胞PD-L1表达的单因素生存分析。结果:卵巢浆液性腺癌PD-L1高表达的比例为70.69%(82/116)。癌细胞PD-L1表达强度与癌巢内的CD8~+TILs数目呈显著负相关(P=0.024),而与间质内的CD8~+TILs数目无相关性(P=0.117)。癌巢CD8~+TILs高密度组患者的中位生存时间(64月)显著高于低密度组(43月),差异有统计学意义(P0.05);乘积极限法的亚组分析显示肿瘤微环境中癌细胞PD-L1低表达癌巢CD8~+TILs高密度组患者的预后较好。结论:卵巢浆液性腺癌肿瘤微环境中癌巢CD8~+TILs密度及癌细胞PD-L1表达水平与患者预后密切相关,重视肿瘤微环境的免疫分型有助于评估患者预后及筛选合适患者实施抗PD-1/PD-L1免疫治疗。     

扩增活化的自体淋巴细胞过继性细胞免疫治疗小细胞肺癌

目的:研初步探讨扩增活化的自体淋巴细胞(expanded activated autologous lymphocytes,EAAL)过继性细胞免疫治疗在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的疗效。方法:在层流实验室体系下,由SCLC患者外周血单个核淋巴细胞体外诱导扩增EAAL细胞,应用流式细胞术检测其细胞表型。然后回顾性分析2008年5月~2010年10月在本院接受过EAAL免疫治疗以及未接受过EAAL免疫治疗的各16例SCLC患者的临床资料,分析比较EAAL治疗组和对照组总生存期(OS)的差异。结果:经过体外培养和扩增,EAAL细胞表型与培养前外周血淋巴细胞相比,CD_3~+、CD_3~+CD_8~+、CD_(45)RO~+、CD_(25)~+、CD_(29)~+以及CD_3~+CD_(16)~+/CD_(56)~+细胞的比例明显增加(P<0.05)。EAAL治疗组和对照组的OS分别为17.4个月和10.0个月,两者差异无统计学意义(P=0.060,HR=0.487,95%CI 0.228~1.037)。EAAL治疗组1~3年生存率分别为81.25%、25.0%和18.75%,而对照组1~3年生存率则分别为43.75%、6.25%和0%,两者差异也无统计学意义(P>0.05)。COX多因素回归分析结果显示EAAL细胞免疫治疗是SCLC患者总生存时间延长的独立预后风险因素之一。亚组分析结果显示女性及化疗≤6周期SCLC患者的OS经EAAL免疫治疗后得到了延长(P<0.05)。结论:EAAL过继性细胞免疫治疗可能能够延长SCLC患者的OS。     

百合固金汤合生脉散对肺结核患者血清中IFN-γ含量的影响

目的:观察百合固金汤合生脉散对肺结核患者血清中IFN-γ的影响。方法:将临床确诊为肺结核患者60例,随机分为治疗组和对照组各30例。对照组应用西药强化方案,治疗组在西药强化方案的基础上,应用百合固金汤合生脉散加减方治疗,治疗2个月,在治疗前后取外周血,用TB-IGRAF方法检测IFN-γ含量。结果:治疗后两组间血清IFN-γ含量水平比较有统计学意义(P0.05),治疗组优于对照组。结论:百合固金汤合生脉散加减方可以通过降低血清中IFN-γ水平,改善肺结核患者的临床症状。     

禽流感H5N1亚型病毒感染BALB/c小鼠的免疫应答

目的 研究禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠后对宿主细胞免疫功能和细胞因子水平变化的影响,探讨禽流感H5N1病毒感染哺乳动物的免疫发病机制.方法 选用鹅源禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠,采用流式细胞仪检测血液和脾脏T淋巴细胞及其亚群的变化,采用ELISA检测血液中细胞岗子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-18、IL-10、IL-2)及禽流感H5N1病毒特异性抗体的变化.结果 禽流感H5N1病毒感染可引起对宿主短暂的、可恢复的细胞免疫功能损伤:血液CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞数量于染毒后第2～4天下降(第4天为最低值),脾脏T淋巴细胞数最于染毒后第5～8天下降(第6天为最低值),然后均逐渐恢复到正常水平.染毒后血液细胞因子变化表现为:血清IFN-γ、TNF-α水平下降,IL-4、IL-18、IL-10水平上升,IL-2水平无明显变化.从感染第7天开始检测H5N1禽流感特异性抗体为阳性,抗体水平逐渐升高至实验结束的感染第14天.结论 H5N1禽流感病毒感染可引起宿主T细胞免疫功能低下是其主要的免疫病理改变之一,细胞因子表达失平衡或过多的表达都可能对宿主产生免疫病理损伤.

Abstract：

Objective To study the cell immunity and eytokines responses to avian influenza A H5N1 virus infections in a BALB/c model to better understand the pathogenesis of H5N1 avian influenza disease. Methods Two hundred and twenty BALB/c mice of the infected group were inoculated with 0.1 ml (10-4.875 TCID50) of A/Goose/Guangdong/NH/2003 ( H5N1 ) virus intra-nasally. Fifty control mice received noninfectious allantoic fluid and another fifty control mice received normal sodium. Blood and spleen samples were collected from the live mice every 24 h during the 14 d post-infection. The changes of CD3 + T cells , CD4 + T cells, CD8 + T cells for cell immunity in blood circulation and spleen were detected by flow cytometry. And the cytokines and antibody responses in blood circulation were detected by ELISA. Necropsy was performed on mice that died during the experiment and those euthanized at end of study. Results Avian influenza A( H5N1) virus infections can make damages to the cell immune system transiently. The CD3 + T cells, CD4 + T cells, CDS + T cells declined at 24 days post infection in blood circulation and declined at 5-8 days in spleen, then recovered to the normal level gradually. The eytokines responses to the infections can be detected: the level of IFN-γ,TNF-α declined, IL-4, IL-18, IL-10 increased, and IL-2 changed little. The antibody increased rapidly from day 7 post infection until the end of the study (day 14 post infection). Conclusion Collectively, avian influenza A(H5N1) virus can cause cell immunity deficiency and an imbalance in the level of eytokines, which may contribute to the unusual severity of disease caused by the H5N1 avian influenza virus.     

妊娠不同时期胎盘单核-巨噬细胞来源树突样细胞刺激脐血T淋巴细胞的特性比较

目的:观察妊娠不同阶段胎盘来源的树突样细胞(DC样细胞)刺激脐血淋巴细胞增殖活化特点的差异,进一步研究胎盘免疫细胞在妊娠耐受及分娩发动中的作用?方法:机械分离妊娠中?晚期胎盘中的单个核细胞,用磁珠分离法获取CD14+ 细胞,以内皮(逆)穿越系统诱导其分化为DC样细胞,并用流式细胞仪分析细胞表型,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-12?IL-10水平,CCK-8法检测其激发脐血淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测其所刺激的脐血T淋巴细胞内细胞因子?结果:足月妊娠胎盘来源的经诱导的细胞高表达与免疫激活有关的细胞表面标志物CD80?CD86;培养上清中检出较高水平的IL-12,极低水平的IL-10,具有较强的刺激脐血淋巴细胞增殖的能力;能刺激脐血T淋巴细胞分化形成较多的IFN-γ产生细胞,而分化形成的IL-10产生细胞则较少?但相比之下,中期妊娠胎盘来源的经诱导的细胞则低表达CD80?CD86(P < 0.05),培养上清中检出较高水平的IL-10(P < 0.05),但检测出的IL-12浓度极低(P < 0.05),刺激脐血淋巴细胞的能力较弱(P < 0.05);刺激脐血T淋巴细胞分化形成较多的IL-10产生细胞(P < 0.05),而分化形成的IFN-γ产生细胞较少(P < 0.05)?结论:妊娠不同时期胎盘来源的单核-巨噬细胞分化形成的DC样细胞免疫学特性不同,高表达CD80?CD86?IL-12的DC样细胞细胞在妊娠免疫耐受中止及分娩发动中发挥着一定的作用,而低表达CD80?CD86,高表达IL-10的细胞可能参与了妊娠过程中的免疫耐受?     

USE OF CELLS IN CULTURE TO SOLVE BASIC NUTRITION PROBLEMS

Growth of isolated cells in defined culture media helps determine nutrient requirements of specific tissues and metabolic functions of nutrients at the cellular level.     

冷暴露大鼠下丘脑、垂体、脾淋巴细胞内神经白细胞素mRNA的变化

神经白细胞素(NLK)是既作用于神经系统又作用于免疫系统的蛋白质(Mr 56 000),其表达调控于mRNA水平.150只SD纯系雄性大鼠分为对照组和冷暴露1,2,3,4周组.RNA打点杂交结果表明,大鼠冷暴露期间神经内分泌系统(垂体、下丘脑)和免疫系统(脾淋巴细胞)中 NLK mRNA的变化均一致,即RNA杂交点灰度比值:1周时增加到原值的1.63-11.31倍,2周时降低到原值的0.63倍,3周时再次增加到原值的1.92-21.09倍.这是对寒冷环境的一种普遍性反应.体外培养的淋巴细胞内合成蛋白质与上清中分泌蛋白质经SDS-PAGE放射自显影图谱分析表明淋巴细胞内NLK与其mRNA含量变化不呈平行关系,与对照组相比,冷暴露1周组NLK电泳条带极浅,而冷暴露2,3,4周组NLK放射自显影电泳条带明显增浓.这很可能是冷适应动物Ig合成增加的一个主要原因.     

Mercury-Induced Autoimmune Glomerulonephritis: Requirement for T-Cells

Mercury-induced autoimmunity in Brown–Norway rats hasbeen shown previously to be due to polyclonal activation ofB lymphocytes, requiring the presence of T lymphocytes. Autoimmunityin that strain is characterised by the appearance of an autoimmuneglomerulonephritis, by the production of a host of autoantibodies,and by an increase in total serum IgE. In the present study,T-cell deprived rats were tested to assess the role of T cellsin the appearance of autoimmune abnormalities in vivo. It willbe shown that both BN rnu/rnu and BN ‘B’ rats, whohave virtually no T cells, do not develop autoimmunity followingHgCl₂ injections. In contrast BN ‘B’ rats reconstitutedwith normal T cells, and BN rnu/+ rats, exhibit autoimmune manifestations,including autoimmune glomerulonephritis, quite similar to thoseobserved in Brown–Norway rats. These data demonstratethat T cells are essential for mercury-induced autoimmunityto occur in Brown–Norway rats.     

人骨肉瘤浸润淋巴细胞和LAK细胞体外抗瘤作用及表型分析

本文从12例骨肉瘤患者手术切除的实体瘤中分离TIL,从患者外周血中分离淋巴细胞,以4小时~(51)cr 释放试验测定经rI1-2(500～1000U/m1)激活后的TIL 和LAK 细胞体外抗瘤活性及其特异性,并在培养的不同时间对TIL 表型进行分析。结果表明:12例骨肉瘤患者的TIL 培养10～20天,对K_(562)和LiBr靶细胞(效靶比25:1)平均杀伤活性分别为50.6±12.6%和42.6±10.2%。LAK 细胞对K_(562)和LiBr 细胞的杀伤活性分别为47.4±12.3%和37.6±8.5%。二者对K_(562)和LiBr 细胞的杀伤活性相差不显著(P>0.05)。其中7例患者的TIL 和LAK 细胞对自身肿瘤细胞杀伤活性分别为39.9±7.9%和26.3±6.8%,二者相差显著(P<0.01).TIL 表型特征为,CD3~+细胞比例在培养期间无明显变化,CD4~+细胞比例随培养时间延长有逐渐增加趋势.CD8~+细胞比例有逐渐减少趋势。     

慢性支气管炎急性发作期患者外周血T淋巴细胞凋亡的研究

目的 :实验观察慢性支气管炎急性发作期和稳定期患者外周静脉血 T淋巴细胞凋亡情况。方法 :选择急诊监护病房急性发作期住院患者 17例 (发作组 )和门诊随访稳定期患者 10例 (稳定组 ) ,分别抽取外周静脉血 ,用抗 CD3、CD95、CD2 5荧光单抗对 T淋巴细胞进行标记和记数。结果 :发作组 CD3T细胞总数 4 2 .6 3± 16 .37明显低于稳定组 6 2 .2 2± 2 3.90 ,t=- 4.2 83,P<0 .0 0 1;发作组 CD95 T细胞 14 .15± 11.0 6和稳定组 34.88± 9.82比较 ,t= - 8.796 ,P<0 .0 0 1,前者比后者显著降低 ;CD2 5 T细胞发作组 10 .89± 4 .1与稳定组 13.11± 3.0 2比较 ,t=-2 .10 5 ,P>0 .0 5无显著差异 ;CD3/ CD2 5活化 T细胞总数发作组 6 .2 6± 3.94与稳定组 10 .5 2± 3.4 1比较 ,显著降低 ,t=1.0 6 8,P<0 .0 5。结论 :慢性支气管炎急性发作期患者 T淋巴细胞凋亡率增加 ,总数减少和免疫功能紊乱 ,因此在治疗疾病过程中除对症处理外 ,另须配合使用减少凋亡和提高免疫功能的药物 ,有利于控制病情。