大鼠终纹床核向结合臂旁核的投射 Ⅲ.神经降压肽、促肾上腺皮质激素释放因子肽能通路研究

用荧光金逆行束路追踪结合免疫荧光双标记技术及HRP逆行束路追踪结合免疫细胞化学双标记技术证明,在大鼠终纹床核投射至结合臂旁核的神经元中,位于前外侧区卵圆核及其腹侧邻近区中的部分为神经降压肽及促肾上腺皮质激素释放因子免疫反应阳性,双标记细胞分别约占这个部位逆行标记细胞总数的40％及20％;在前腹侧区的梭形核及大细胞核中,部分为促肾上腺皮质激素释放因子免疫反应阳性。     

Comparative analysis of colorimetric staining in skin using open‐source software

Colorimetric staining techniques such as immunohistochemistry (IHC), immunofluorescence (IF) and histochemistry (HC) provide useful information regarding the localization and relative amount of a molecule/substance in skin. We have developed a novel, straightforward method to assess colorimetric staining by combining features from two open‐source software programs. As a proof of principle, we demonstrate the utility of this approach by analysing changes in skin melanin deposition during the radiation‐induced tanning response of Yucatan mini‐pigs. This method includes a visualization step to validate the accuracy of colour selection before quantitation to ensure accuracy. The data show that this method is robust and will provide a means to obtain accurate comparative analyses of staining in IHC/IF/HC samples.     

时间分辨免疫荧光法用于梅毒抗体测定的探讨

目的 通过对时间分辨免疫荧光法（TRFIA）,酶联免疫吸附试验（ELISA）,明胶颗粒凝集试验（TPPA）三种方法测定梅毒特异性抗体（TP）的比较,并对TRFIA法的特异性、灵敏度、线性进行方法学评价,探讨临床常规使用TRFIA方法检测梅毒特异性抗体的可行性.方法 对2012年1月至2012年7月我院256名门诊患者标本分别用TRFIA、ELISA、TPPA三种方法测定TP,并对TRFIA检测系统的灵敏度、批内,批间精密度、线性范围进行测定.结果 TRFIA与TPPA法检测相比其灵敏度为100％,特异性为98.2％.TP阴阳性结果,经配对卡方检验P＞0.05,三种方法无统计学差别.最低检测浓度0.15NCU,相关系数分别为0.95、0.999,高、中、低三种浓度血清的批内、批间精密度CV＜10％.结论 TRFIA法测定TP灵敏度、特异性、方法性能、相关性均好,可作为临床TP常规筛查方法.     

酶联荧光分析法测定肌钙蛋白I的临床应用

目的 探讨酶联荧光分析(ELFA)法测定肌钙蛋白I(cTnI)的临床应用。方法 分别采用ELFA法和化学发光免疫分析(CLIA)法测定血清样品中cTnI的浓度,对ELFA法进行精密度试验、线性试验、回收试验和干扰试验;并对ELFA法与CLIA法测定cTnI的结果进行相关性分析。结果 ELFA法测定cTnI浓度,高值(30.00μg/L cTnI)和低值(0.12μg/L cTnI)的批内变异系数(CV)分别为2.81%和1.62%,批间CV分别为5.67%和3.52%。ELFA法检测cTnI的可信检测范围为0.00~30.00μg/L。当总胆红素浓度小于450μmol/L,血红蛋白浓度小于1.5g/L,三酰甘油浓度小于7.0mmol/L时,ELFA法测定cTnI无干扰。ELFA法与CLIA法测定cTnI浓度具有良好的相关性(r=0.971)。结论 ELFA法具有较好的精密度、回收率和线性范围,与CLIA法具有较好的相关性,且检测快速简便,适用于急诊检验,能满足临床要求。     

抗核抗体核型检测与特异性抗核抗体谱检测的对比分析

目的：探讨抗核抗体核型与特异性抗核抗体谱的相关性。方法回顾分析本院检验科检测的974例抗核抗体结果,分别用间接免疫荧光法（IIF）检测抗核抗体核型,用条带酶免分析法（LIA）检测特异性抗核抗体谱,分析199例 IIF 与 LIA 同时阳性的结果,比较抗核抗体核型与特异性抗核抗体谱的相关性。结果974例标本中 IIF 阳性249例（阳性率25．6％）,LIA 阳性237例（阳性率24．3％）,两种方法检测阳性率差异无统计学意义（P ＞0．05）,IIF 与 LIA 单项或两项阳性287例（29．5％）,高于IIF 或 LIA 单项检测阳性率,差异有统计学意义（P ＜0．05）。249例 IIF 阳性中 LIA 阳性199例（79．9％）,725例 IIF 阴性中 LIA阴性687例（94．8％）。核颗粒型多见抗 Ro-52抗体,胞浆颗粒型多见抗线粒体 M2抗体,核均质型以抗 dsDNA 抗体、抗核小体抗体多见,着丝点型多见抗着丝点抗体,核仁型多见抗 PM-Scl 抗体。结论IIF-ANA 与 LIA-ANA 有较好的相关性,但也有一定差异,两者联合检测能降低漏检率,对自身免疫性疾病的诊断、病情监测及预后判断有重要意义。     

两种检测抗双链DNA抗体方法对系统性红斑狼疮的诊断价值比较

目的 探讨间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)同时检测对于系统性红斑狼疮(SLE)诊断的价值.方法 回顾性研究,回顾北京大学第一医院2011年6月1日至9月30日所有抗dsDNA抗体检测的病例2712例,记录每份病例的抗dsDNA抗体检测结果及其临床诊断.计算IIF和ELISA方法检测敏感度、特异度,运用Kappa检验进行一致性检验.结果 ELISA方法检测抗dsDNA抗体的阳性率(16.3％)要略高于IIF方法(13.1％),但二者的总体结果基本一致(Kappa=0.641,P＜0.05).在不一致(9.2％)中以IIF法阴性同时ELISA法阳性多见(6.2％).以SLE的临床诊断为金标准,IIF与ELISA检测结果诊断SLE的准确性分别为84.8％和84.4％,差异无统计学意义(x2 =0.25,P＞0.05).IIF诊断SLE的敏感度和特异度为46.1％和99.2％,ELISA诊断SLE的敏感度和特异度为51.3％和96.7％.结论 应将IIF和ELISA 2种方法同时应用于抗dsDNA抗体的检测.若先用ELISA筛查,阳性标本再加测IIF,会将至少3.0％的ELISA阴性IIF阳性标本误判为阴性.IIF阴性ELISA阳性标本应进一步检测抗dsDNA抗体亲和力来辅助SLE的诊断和病情评估.     

纳尔逊湾正呼肠孤病毒非结构蛋白μNS和σNS表达特性的分析

目的:检测非结构蛋白μNS和σNS之间的相互作用及其结合区域,阐明纳尔逊湾正呼肠孤病毒(NBV)的致病机制.方法:采用Lipo3000转染试剂将pCAG M3和pEFHAσNS质粒分别和共同转染至BHK细胞中,免疫荧光法检测μNS和σNS蛋白在细胞中的定位和分布;用NBV感染BHK细胞,采用Western blotti...     

大鼠生后不同发育阶段心肌细胞有丝分裂指数检测

目的检测大鼠生后不同发育阶段心肌细胞的有丝分裂指数,为研究心肌细胞增殖机制奠定形态学基础。方法取大鼠生后不同发育阶段心肌组织行冰冻切片,采用免疫荧光双重染色方法,以横纹肌肌动蛋白单克隆抗体标记心肌细胞,以磷酸化组蛋白H3单克隆抗体标记有丝分裂的染色体,同时用Hochest33342显示细胞核,荧光显微镜观察并拍照。结果心肌细胞胞质呈红色荧光,有丝分裂的染色体呈现不同形状的绿色荧光,胞核为蓝色;大鼠生后零天心肌细胞有丝分裂指数(0.905±0.087%)是生后2w(0.372±0.094%)的2.4倍(P<0.01),4w至成年几乎为零。结论大鼠出生2w后心肌细胞逐渐丧失增殖能力,由增生性生长向肥大性生长转化。     

苏云金芽孢杆菌杀蚊新菌株LLP29对白纹伊蚊作用机理的研究

从武夷山自然保护区白玉兰叶片上分离获得1株新的苏云金芽孢杆菌菌株LLP29,内含cyt1Aa6杀蚊基因。纯化的Cyt1Aa6毒素蛋白对白纹伊蚊幼虫和C6/36细胞都有高效活性。为更好地利用该菌株对白纹伊蚊进行生物防治,本试验以白纹伊蚊敏感品系及C6/36细胞为研究对象初步研究了其作用机理。免疫荧光染色和免疫组织化学实验结果表明:Cyt1Aa6毒素蛋白主要结合于C6/36细胞膜和白纹伊蚊幼虫中肠上。     

正常与退变髓核细胞II型胶原蛋白和番红染色的研究

目的对正常与退变椎间盘髓核细胞（Nucleus pulposus of intervertebraldiSC）II型胶原蛋白免疫荧光染色及番红“O”染色进行比较。方法对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红“O”染色及细胞内II型胶原蛋白行免疫荧光染色。结果（1）免疫荧光染色：退变椎间盘髓核细胞轻度染色,呈类圆形,染色模糊,细胞内仅有极少量荧光颗粒;（2）番红“O”染色：退变盘髓核细胞形态不规则,细胞核染色较淡,形态不规则,细胞突起及胞浆染色不均匀,部分细胞组织结构分解,完整性消失,细胞稀疏,排列混乱,有的可见少量细胞坏死区。结论正常与退变椎间盘髓核细胞比较,在退变的椎间盘中髓核细胞数量减少、部分凋亡,髓核细胞内的Ⅱ型胶原蛋白含量明显减少。