盐酸克仑特罗单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗盐酸克仑特罗(clenbuterol ,CL)的单克隆抗体并进行免疫学特性鉴定.方法:用重氮化法将盐酸克仑特罗偶联于载体牛血清白蛋白(BSA),形成的结合抗原BSA-CL作为免疫原免疫BALB/c小鼠,同时将CL与卵清白蛋白(OVA)偶联制备检测原(OVA-CL).应用杂交瘤技术建立分泌抗盐酸克仑特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水并进行纯化.用竞争性ELISA法测定抗体的亲和常数及交叉反应性.结果及结论:获得了18株稳定分泌抗盐酸克仑特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株,挑选其中E9-C11、C11-E3、E7-G8三株高亲和力的细胞株进行免疫学特性鉴定.三株抗体的亚类均为IgG1.细胞上清的间接ELISA效价分别为1:1 280、1:1 000、1:800,三株腹水效价都约为1×10-6.亲和常数分别为2.4×10-8mol/L、2.83×10 -8 mol/L 、3.28×10-8 mol/L .E9-C11单抗对CL的IC50为6.1035μg/L;对沙丁胺醇的IC50大于781.25 μg/L,交叉反应性小于0.78%;对肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、莱克多巴胺及部分维生素和抗生素均无交叉反应性.蛋白免疫印迹分析证明三株单抗特异性均很高,可用于与其相关的免疫检测或应用研究.     

Annexin B1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础. 方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3 次筛选和亚克隆.结果:用杂交瘤技术,我们获得了1株杂交瘤细胞株,能稳定地分泌高滴度的针对Annexin B1的特异单抗.结论:成功筛选并制备了Annexin B1的特异单抗,为下一步功能研究打下了良好的基础.     

针对人 DNAH2 蛋白的鼠源单克隆抗体的制备

目的 制备特异性的鼠源单克隆抗 DNAH2（Homo sapiens dynein, axonemal, heavy chain 2） 抗体。 方法首先针对人 DNAH2 蛋白 N 端 1~300 aa 序列, 构建可表达 His 标签的免疫原融合表达质粒, 在大肠杆菌内以 IPTG 诱导 His-免疫原的表达并纯化;然后免疫 BALB/c 小鼠, 分离出脾淋巴细胞, 并与骨髓瘤细胞融合, 形成杂交瘤细胞;最后以酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）筛选阳性杂交瘤细胞。 结果 利用 IPTG 有效诱导了大肠杆菌内 DNAH2 免疫原的表达; 筛选的阳性杂交瘤细胞检测出 DNAH2 蛋白条带。 结论 成功制备针对人 DNAH2 蛋白的鼠源单克隆抗体。     

用多孔微载体Cytopore高密度培养CHO工程细胞和两株杂交瘤细胞

采用Ｃｙｔｏｐｏｒｅ多孔微载体和低血清添加剂，在１．５ＬＣｅｌｉｇｅｎ灌流培养系统中成功地培养了重组ＣＨＯ工程细胞ＣＬ－１１Ｇ和产尿激酶原单抗的杂交瘤细胞。细胞密度均超过１×ｌ０７／ｍｌ，尿激酶原和抗体的产量均随细胞的密度增加而增加。该载体适用于大规模培养工程细胞和杂交瘤细胞     

双耐药淋巴母细胞株CKM的建立和特性研究

应用EB病毒转化技术,由人脐带血建立了3株淋巴母细胞株(CKM-c,CKM-1和CKM-8)。经1年余连续传代120次,细胞均保持良好的生长能力。3株细胞平均倍增时间为24.5～36h,电镜检查符合B淋巴细胞特征;EBNA、VCA-IgA,MA和EA4种EBV抗原均为阴性;染色体众数为48～50条。CKM-c在新城鸡瘟病毒诱导下,能产生高效价干扰素。CKM-8经6-硫代鸟嘌呤(6-TG)和乌苯苷双耐药培养,现已能耐受30μg/ml 6-TG和10~(-5)mol/L乌苯苷,成功地建立了1株对HAT敏感,HGPRTase缺损的双耐药淋巴母细胞,该细胞可作为亲本细胞,用于人-人杂交瘤研究工作。     

肿瘤病人血清中癌细胞凝集因子单克隆抗体的制备

①目的通过制备癌细胞凝集因子的单克隆抗体（ＭｃＡｂ），进一步研究该凝集因子的结构、功能、组织来源，并为临床建立检测试剂盒打下基础。②方法采用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经ＥＬＩＳＡ法结合癌细胞凝集抑制实验筛选出阳性克隆。③结果融合阳性率７８．１％；筛选出的杂交瘤细胞染色体数目为９６～１０６条，ＳＰ２／０骨髓瘤细胞为６８条，小鼠脾细胞为４０条，得到的ＭｃＡｂ亚类分别是ＩｇＧ１（Ｅ９）和ＩｇＧ２α（Ｅ１１）．④结论获得了２株既能分泌抗体，又能阻断癌细胞凝集的杂交瘤细胞株（Ｅ９和Ｅ１１）。     

Effect of myelopeptides on DNA and protein synthesis and on antibody secretion by mouse B-cell hybridomas

Institute of Immunology, Ministry of Health of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of the Medical Sciences of the USSR, I. P. Ashmarin.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 107, No. 6, pp. 724–726, June, 1989.     

分泌血吸虫抗原杂交瘤的制备

目的 制备分泌血吸虫抗原的杂交瘤。方法 采用杂交瘤技术，将血吸虫成虫细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，ＨＡＴ选择性培养，结果 获得了１株培养上 有与血吸虫病人血清起反应的杂交瘤。其染色体数为７２－８４，该杂交瘤细胞可持续培养１１周以上，但其生长缓慢，在培养８周后，出现细菌逐渐死亡。结论 杂交瘤技术不适于远缘杂交，细胞死亡可能与ＤＮＡ隔离一染色体物质丢失有关。     

分泌抗HIVp24单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其初步鉴定

以含人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）核心抗朱ｐ２４全部氨基酸序列的重组蛋白ｐＧ１免疫小鼠，用免疫脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，成功地建立了５株分泌抗ＨＩＶｐ２４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，这５株ＭｃＡｂ与乙肝核心抗原（ＨＢｃＡｇ），丙肝Ｃ区，ＮＳ－３区抗原不发生交叉反应，而与重组ｐ２４抗原产生特异反应，本组单抗的研制成功为建立检测ＨＩＶｐ２４抗原的方法奠定了基础。