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61.
一种用于基因表达谱分析的基因芯片方法 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:通过研究SLE患者外周血基因表达谱的改变,建立一种新型的基因芯片技术用于分子发病机理的研究。方法:提取总RNA,逆转录合成单链cDNA、双链cDNA,体外转录合成生物标记的cRNA与基因芯片进行杂交,通过抗体的检测标记荧光染料Cy3,基因芯片扫描仪进行图像扫描。结果:该方法有较高的重复性和稳定性,SLE患者与正常对照组相比较,鉴定出94个基因存在表达差异。结论:该方法能在较少起始标本量的情况下,有效地进行SLE致病基因的筛选,更好的理解SLE发生的分子机理,并且可在其它疾病研究中推广应用。 相似文献
62.
目的:在大肠杆菌中表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白并制备其兔抗血清。方法:根据B组轮状病毒(GBRV)WH-2株vp7基因的全序列设计引物,用PCR的方法扩增得到vp7基因的编码区。将其克隆到原核GST融合表达载体pGEX-KG内,转化大肠杆菌E.coliDH5α,IPTG诱导表达人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白,经SDS-PAGE分离纯化表达的蛋白免疫新西兰兔,制备人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白抗血清。结果:经鉴定确认,vp7基因以正确的方式插入到载体中,此重组表达载体经IPTG诱导后,可表达相对分子量为53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白。制备的抗血清经同样诱导表达的表达载体pGEX-KG表达产物吸收后1:500倍稀释后用Western Blot分析,与53.4 kDa的GST-VP7融合蛋白获得特异性显色信号。结论:人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达,所表达的蛋白和制备的抗体不但为研究结构与功能提供了物质基础,也为GBRV所引起的疾病预防、诊断和治疗等流行病学研究和临床诊断奠定了基础,具有重要实际应用价值。 相似文献
63.
Transformation of Penicillium chrysogenum using the Aspergillus nidulans amdS gene as a dominant selective marker 总被引:5,自引:0,他引:5
Summary The Aspergillus nidulans acetamidase gene (amdS) has been used to transform Penicillium chrysogenum at low frequency. Several transformants were tested and shown to be mitotically stable. Southern blot analysis indicated that transforming DNA had integrated into the chromosomal DNA, possibly at multiple sites. 相似文献
64.
Identification of a cis-acting positive regulatory element of the glial fibrillary acidic protein gene 总被引:4,自引:0,他引:4
J Sarid 《Journal of neuroscience research》1991,28(2):217-228
Developmental regulation of astrocyte-specific expression of the glial fibrillary acidic protein (GFAP) gene reflects transition of immature glioblasts to mature astrocytes. Described here is the cloning and sequencing of the 5'-flanking region of the mouse GFAP gene. It contains a glial-specific positive cis-acting regulatory element that directs preferential expression of a linked reporter gene when transfected into GFAP-positive glioblastoma cells. Sequence analysis of this region revealed the presence of a putative AP-1 binding site, implying a possible role for AP-1 factors in the astroglial-specific expression of the GFAP gene. 相似文献
65.
66.
Wang Tao Liang Zhihou Sun Shenggang Cao Xuebing Peng Hai Cao Fei Liu Hongjin Tong E-tang 《华中科技大学学报(医学英德文版)》2003,23(2):145-147
Summary To investigate the distribution of possible novel mutations from parkin gene in variant subset of patients with Parkinson’s
disease (PD) in China and explore whether parkin gene plays an important role in the pathogenesis of PD, 70 patients were
divided into early-onset group and late-onset group; 70 healthy subjects were included as controls. Genomic DNA from 70 normal
controls and from those of PD patients were extracted from peripheral blood leukocytes by using standard procedures. Mutations
of parkin gene (exon 1–12) in all the subjects were screened by PCR-single strand conformation polymorphism (SSCP), and further
sequencing was performed in the samples with abnormal SSCP results, in order to confirm the mutation and its location. A new
missense mutation Gly284Arg in a patient and 3 abnormal bands in SSCP electrophoresis from samples of another 3 patients were
found. All the DNA variants were sourced from the samples of the patients with early-onset PD. It was concluded that Parkin
point mutation also partially contributes to the development of early-onset Parkinson’s disease in Chinese.
WANG Tao, male, born in 1961, Associate Professor
This work was supported by grants from the key program of the special scientific project of Scientific & Technologic Agency
of Hubei Province (Serial No. 2001AA308B01) and the Hygienic Research Project of Hygienic Agency of Hubei province (Serial
No. WJ 01529). 相似文献
67.
Sry监测体外扩增造血细胞植入效果的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨Y染色体性别决定基因(Sry)作为评价和追踪造血细胞移植后植入状态检测指标的可行性。方法:根据Sry DNA序列设计引物及制备探针,然后进行PCR检测、斑点杂交和原位杂交.动态追踪经不同条件下体外扩增的纯系雄性小鼠BMMNC回输至雌性小鼠后的植入状态。结果:PCR结果显示在各移植组小鼠的骨髓有核细胞、脾细胞及外周血白细胞中均有Y染色体特异性序列的存在;斑点杂交结果显示在各回输组间并无明显差别,但用脾脏组织作原位杂交的结果则发现基质细胞支持扩增回输组的阳性颗粒数目与输注新鲜细胞组相似,但略少于雄性小鼠;而输注细胞因子扩增细胞实验组小鼠则明显少于雄性动物的阳性对照标本和基质细胞支持扩增回输组。结论:(1)经重复检测表明上述方法的重复性好,结果可信.可作为检测性别不同时造血干细胞移植效果的一种检测手段;(2)证实基质细胞支持下的体外扩增的造血细胞具有较好的植入能力。 相似文献
68.
Beeri Rachel; Gnatt Averell; Lapidot-Lifson Yaron; Ginzberg Dalia; Shani Moshe; Soreq Hermona; Zakut Haim 《Human reproduction (Oxford, England)》1994,9(2):284-292
Gene amplification occurs frequently in tumour tissues yet is,in general, non-inheritable. To study the molecular mechanismsconferring this restraint, we created transgenic mice carryinga human butyrylcholinesterase (BCHE) coding sequence, previouslyfound to be amplified in a father and son. Blot hybridizationof tail DNA samples revealed somatic transgene amplificationswith variable restriction patterns and intensities, suggestingthe occurrence of independent amplification events, in 31% (11/35)of mice from the FII generation but in only 3.5% (2/58) of theFII and FIV generations. In contrast, >10-fold amplificationsof the BCHE transgene and the endogenous acetylcholinesteraseand c-raf genes appeared in both testis and epididymis DNA from>80% of FIII mice. Drastic, selective reductions in testisBCHEmRNA but not in actin mRNA were detected by the PCR amplificationof testis cDNA from the transgenic mice, and apparently resultedin the limited transmission of amplified genes. The testicularamplification of the BCHE transgene may potentially representa general phenomenon with clinical implications in human infertility. 相似文献
69.
人抗HBsAg噬菌体抗体Fab段基因的序列分析及表达 总被引:3,自引:0,他引:3
对已建的噬菌体抗体库分离出来的人抗-HBs克隆进行了序列分析和表达研究,发现4个克隆中3个克隆的重链和轻链完全相同,DNA序列分析表明VH分别属于VH1亚群和Ⅱ亚群,其轻链VL分别属于VλⅡ亚群和VλⅠ亚群。构建了可溶性Fab段表达载体,显示出在细菌中表达的Fab段抗体与HBsAg特异性结合,这说明所筛选出来的噬菌体抗体具有HBdisplay status 相似文献
70.
慢性乙型肝炎表面抗原携带者前S1基因的高度异质性 总被引:1,自引:0,他引:1
应用半巢式聚合酶链式反应(PCR)从一例慢性HBsAg携带者血清中扩增出HBV前S1基因,将其克隆于噬菌体M13mp19中进行序列分析。结果发现:与同源性最好的HBVadr野生林相比,所测的10个克隆均有替代和插入突变,9个克隆有缺失突变,10个克隆的核苷酸变异率为5.0%-17.0%,氨基酸的变异率为13.0-60.0%;10个克隆之间的核苷酸变异率为2.3%-24.3%,氨基酸的变异率为14. 相似文献