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101.
102.
目的探究肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)通过调控内质网钙稳态蛋白(CHERP)影响软骨细胞自噬功能的相关机制。方法衣霉素(TM)处理人软骨细胞C28/I2,Western blot检测不同时间点的内质网应激和自噬相关蛋白指标。4μ8c、雷帕霉素(Rapa)处理C28/I2(分为:NC组、4μ8c组、Rapa组、4μ8c+Rapa组),Western blot检测自噬相关蛋白指标。分别从软骨组织特异性ERN1基因敲除小鼠(ERN1 CKO)和对照小鼠(Control)软骨组织分离原代软骨细胞,qPCR检测ERN1及自噬相关蛋白ATG5、ATG7的mRNA水平,Western blot检测IRE1α/p-IRE1α、CHERP表达水平,流式细胞术检测胞内钙离子含量。巴佛洛霉素A1(Bafilomycin A1)处理原代软骨细胞(分为Control组、Control+Bafilomycin A1组、ERN1 CKO组、ERN1 CKO+Bafilomycin A1组),Western blot检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ的表达。自噬双荧光病毒在Rapa处理下检测自噬流(分为Control+Rapa组、ERN1 CKO+ Rapa组)。C28/I2中过表达CHERP与IRE1α,免疫荧光检测自噬水平。结果TM处理C28/I2细胞后,内质网应激相关标志蛋白表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调(P<0.05),p62表达下调(P<0.05)。相较对照组,Rapa上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001),4μ8c+ Rapa组相较Rapa组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.05)。相较于对照组,原代软骨细胞中敲除ERN1/IRE1α后,ERN1(P<0.01)、ATG5(P<0.001)、ATG7(P<0.001)mRNA水平显著下调。IRE1α/p-IRE1α蛋白表达缺失或显著下调(P<0.01),CHERP蛋白表达上调(P<0.05),胞内钙离子含量显著上升(P<0.001)。巴佛洛霉素A1处理原代软骨细胞后,Control+Bafilomycin A1组较Control组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调(P<0.01),ERN1 CKO+Bafilomycin A1组较ERN1 CKO组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调(P<0.05)、较Control+Bafilomycin A1组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降(P<0.05)。自噬双荧光病毒处理后,ERN1 CKO+Rapa组较Control+Rapa组未淬灭LC3-GFP荧光增强(P<0.05)。C28/I2细胞中过表达CHERP降低LC3荧光强度,过表达IRE1α增强LC3荧光表达并能部分挽救CHERP导致的荧光降低情况。结论IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白,升高胞内钙离子含量,进一步导致软骨细胞的自噬功能受损。 相似文献
103.
目的探讨小檗碱对于Erastin诱导小鼠海马神经元HT22细胞的铁死亡的保护作用及其可能机制。方法以HT22小鼠海马神经元细胞为研究对象,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+30 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR组。采用CCK-8法、特异性Fe2+荧光探针、荧光染料(DAPI)检测和荧光探针(H2DCFH-DA)检测各实验组细胞的增殖情况、活性铁水平、细胞凋亡和活性氧(ROS)变化。RT-qPCR和Western blot分别检测各实验组细胞的Nrf2、HO-1、GPX4 mRNA和蛋白表达情况。以60 μmol BBR的最适浓度来进一步探究其作用机制,分为对照组、Erastin模型组、Erastin+60 μmol/L BBR组、Erastin+60 μmol/L BBR+2 μmol Nrf2抑制剂ML385组。通过使用荧光探针和Western blot检测Nrf2抑制剂(ML385)作用后的活性铁的水平、活性氧含量以及Nrf2、HO-1、GPX4蛋白的表达来验证小檗碱调节的Nrf2-HO-1/GPX4通路对Erastin处理的HT22细胞的保护作用。结果0.5 μmol/L Erastin作用于HT22细胞8 h,细胞存活率与对照组相比显著被抑制(P < 0.05);同时细胞凋亡、ROS以及活性铁含量增加(P < 0.05)。与Erastin组比较,Erastin+30 μmol/L BBR组和Erastin+60 μmol/L BBR组的细胞存活率明显升高(P < 0.05),同时显著降低细胞凋亡、ROS以及活性铁含量(P < 0.05)。小檗碱增加HT22细胞中Nrf2、HO-1、GPX4基因及蛋白的表达量(P < 0.05)。加入Nrf2抑制剂ML385后,Nrf2-HO-1/GPX4通路被抑制,并且ROS以及活性铁含量升高(P < 0.05)。结论Erastin诱导HT22细胞发生铁死亡,小檗碱抑制Erastin诱导的铁死亡,可能机制是激活了Nrf2-HO-1/GPX4通路。 相似文献
104.
目的原核表达和纯化腺相关病毒(AAV)衣壳保守区抗原肽,制备抗AAV衣壳保守区的兔多克隆抗体。方法设计并合成编码AAV衣壳蛋白保守区的DNA,将序列克隆到载体pET30a,获得质粒pET30a-AAV-CR,原核表达并纯化保守区多价抗原肽,考马斯蓝染色法及Western blot法对AAV保守区多价抗原肽进行鉴定。将日本大耳朵白兔分为实验组与对照组(1只/组),实验组注射AAV保守区蛋白制备多克隆抗体,对照组注射PBS,ELISA检测抗体效价,Western blot及细胞免疫荧光法检测抗体应用效果。结果成功构建了表达AAV衣壳保守区抗原肽的质粒pET30a-AAV-CR,表达纯化得到相对分子质量为17000的蛋白质;纯化后的蛋白可在兔体内诱导产生针对AAV衣壳保守区的抗体,且该抗体能广泛性识别AAV1-AAV10衣壳蛋白序列。结论诱导出AAV衣壳保守区蛋白并成功获得了抗AAV衣壳保守区的多克隆抗体,为后续载体开发以及生物学功能研究奠定了基础。 相似文献
105.
胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下。各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态。新生组织块大小采用双样本t检验。结果各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发).偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺。结论背部创面移植模型最适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究。 相似文献
106.
目的探究盐诱导激酶2(SIK2)对大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响及机制。方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组、SIK2抑制剂组,5只/组(造模前24 h左股静脉注射博舒替尼10 mg/kg)。超声检测大鼠心功能,HE染色观察大鼠心肌组织病理变化,透射电镜观察心肌细胞自噬情况,蛋白免疫印迹法检测各组大鼠心肌组织中SIK2和LC3B、Beclin-1、p62等自噬相关蛋白以及p-mTOR、mTOR、p-ULK1、ULK1相关通路蛋白含量。结果与假手术组比较,缺血再灌注组心肌组织病理损伤严重,自噬小体数量增加(P < 0.05),同时SIK2蛋白表达增多(P < 0.01);与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组SIK2蛋白表达减少(P < 0.01),心肌组织病理损伤较轻,自噬小体数量减少(P < 0.05)。与假手术组相比,缺血再灌注组LVEF、FS值降低(79.33±3.40 vs 38.67±2.49,59.33±5.25 vs 19.33±1.25,P < 0.001);与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LVEF、FS值升高(38.67±2.49 vs 59.33±3.40,19.33±1.25 vs 30.67±3.40,P < 0.05),3组IVSDd、LVPWDd无明显差别(P > 0.05)。与假手术组相比,缺血再灌注组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达增多,p62蛋白表达减少(P < 0.01);与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达减少,p62蛋白表达增多(P < 0.05)。与假手术组相比,缺血再灌注组p-ULK1(Ser757)蛋白表达增多(P < 0.01),p-mTOR蛋白表达减少(P < 0.0001);与缺血再灌注组相比,SIK2抑制剂组p-ULK1(Ser757)蛋白表达减少(P < 0.01),p-mTOR蛋白表达增多(P < 0.05);各组mTOR、ULK1无明显差异(P > 0.05)。结论SIK2可能通过mTOR/ULK1信号通路促进细胞自噬,对SIK2进行抑制,可以减少异常自噬,缓解心肌缺血再灌注损伤。 相似文献
107.
目的探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)在大鼠脑出血后对神经元细胞自噬和凋亡的作用机制。方法将20只Wistar大鼠随机分为4组(5只/组):假手术组(Sham组)、脑出血组、HMGB1中和抗体治疗(anti-HMGB1)组、control IgG组。模型组选择颅内纹状体注射0.2 U/mL胶原酶Ⅳ建立脑出血大鼠模型。Sham组颅内注射2 μL生理盐水,术后尾静脉注射PBS,6 h后再次注入等量PBS;anti-HMGB1组术后尾静脉注射1 mg/kg anti-HMGB1单克隆抗体,6 h后再次注入等量抗体;control IgG组术后尾静脉1 mg/kg anti-IgG单克隆抗体,6 h后再次注入等量抗体。采用改良神经损害程度(mNSS)评分评估大鼠神经功能和损伤程度。TUNEL染色检测纹状体神经元凋亡。Western blot检测血肿周围脑组织神经元细胞HMGB1、自噬蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ)和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3)的表达。免疫组化检测纹状体组织中HMGB1阳性表达。ELISA检测血清HMGB1含量变化。结果造模成功后,脑出血组中mNSS评分增加(P < 0.05),给予anti-HMGB1单克隆抗体后,mNSS评分减少(P < 0.05)。与Sham组相比,脑出血组大鼠纹状体神经元凋亡率增加(P < 0.001),Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bax和cleaved caspase-3的表达增加(P < 0.05),而LC3-Ⅰ和Bcl-2的表达减少(P < 0.05),HMGB1含量增加(P < 0.05)。给予anti-HMGB1单克隆抗体后,大鼠纹状体神经元凋亡率减少(P < 0.05),Beclin-1、LC3-Ⅱ、Bax和cleaved caspase-3的表达减少(P < 0.05),而LC3-Ⅰ和Bcl-2的表达增加(P < 0.05),HMGB1含量减少(P < 0.05)。结论anti-HMGB1单克隆抗体下调HMGB1水平改善大鼠脑出血后的神经功能,其机制可能是抑制大鼠脑出血后的神经元细胞自噬和凋亡。 相似文献
108.
目的评估经鼻高流量预充氧在老年患者全麻气管插管诱导期的安全性研究。方法56例非困难气道老年患者,采用随机数字表法分为经鼻高流量吸氧组(HF组)和传统面罩经口鼻吸氧组(M组),28例/组。全麻气管插管诱导给药前预充氧5 min,HF组喉镜检查期间维持给氧,M组通气持续到喉镜检查。观察并记录两组患者基本资料,预充氧前(T1)、预充氧5 min(T2)及插管成功即刻(T3)的超声下胃窦横截面积(CSA)和动脉血气分析指标:PaO2、PaCO2、cSO2,窒息安全时间,插管时间,面罩通气的次数及术后并发症。结果两组患者的基本资料差异无统计学意义。预充氧5 min,两组患者的PaO2和cSO2均明显升高,且HF组PaO2较M组明显(F=118.108vs 9.511,P < 0.05),插管成功后PaO2和cSO2均下降,HF组的PaO2值较M组下降缓慢,且仍高于其T1时点,而M组的cSO2值下降显著,低于其T1时点值。HF组窒息安全时间显著高于M组(t=5.305,P < 0.05),且HF组面罩通气次数少于M组(χ2=6.720,P < 0.05)。两组插管后的PaCO2值均增高,但两组比较差异无统计学意义(F=3.138,P > 0.05),其余结果差异也无统计学意义(P > 0.05)。结论经鼻高流量吸氧是一种安全简单有效的预充氧方式,与传统的面罩预充氧相比,能提高老年患者的动脉氧分压,延长患者窒息安全时间,可保障老年患者全麻诱导插管时气道管理的安全。 相似文献
109.
目的探讨超声S-Detect技术在乳腺肿块病灶诊断中的应用价值。方法采用S-Detect技术及常规超声对62例女性患者总计85个乳腺肿块进行诊断,以术后病理结果为金标准,对比分析常规超声与S-Detect技术的诊断效能。结果低年资医师常规超声诊断效能低于S-Detect技术(P < 0.05),中年资、高年资医师常规超声诊断效能与S-Detect技术无显著差异(P>0.05)。S-Detect技术与高年资医师诊断结果呈正相关(r=0.97)。S-Detect技术长轴切面和长轴垂直切面的诊断效能无显著差异(P>0.05)。中年资医师常规超声诊断直径≤20 mm乳腺肿块的效能优于S-Detect技术(P < 0.05),但诊断直径>20 mm乳腺肿块的效能低于S-Detect技术(P < 0.05)。结论S-Detect技术可用于乳腺良恶性肿块的鉴别诊断,其诊断效能可达到中、高年资医师BI-RADS分类的诊断水平,但在诊断直径不足20mm乳腺肿块时的效能并不十分理想。 相似文献
110.
目的:研究在冠心病合并糖耐量减低患者中纤维蛋白原(Fig)、糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)水平与冠脉病变支数的关系。方法:106例经OGTT试验确诊的糖耐量减低患者,根据冠脉造影结果分为对照组(A组),单支冠脉病变组(B组),多支冠脉病变组(C组),分别测定3组血中Fig,GHbA1c水平。结果:B组中的Fig、GHbA1c水平较A组升高(P〈0.05),C组中的Fig、GHbA1c水平较A组明显升高(P〈0.01),并且C组中的Fig水平较B组升高(P〈0.01),C组中的GHbA1c水平较B组升高(P〈0.05)。A组血浆中Fig与GHbA1c之间无相关性(P〉0.05),B组血浆中Fig与GHbA1c之间有相关性(P〈0.05),C组血浆中Fig与GHbA1c之间有相关性(P〈0.01)。结论:糖耐量减低合并冠心病患者血清GHbA1c及Fig水平明显升高,且二者水平与冠状动脉病变严重程度密切相关,联合检测血清GHbA1c及Fig水平可用于评价糖耐量减低患者冠状动脉粥样硬化程度。 相似文献