pCD-rbFGF重组质粒的构建及其在成骨细胞中的表达

为了构建碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)真核表达质粒,并探讨应用bFGF基因治疗骨科各种疾患的可能性,将鼠碱性成纤维细胞生长因子cDNA克隆至真核表达载体pcDNA3中,构建了重组质粒pCD-rbFGF.通过Liofectin介导将pCD-rbFGF转染兔成骨细胞,经免疫组化检测证实兔成骨细胞获得了bFGF的瞬时表达.提示该bFGF真核表达质粒有效,可用于进一步基因治疗研究.     

莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的DNA序列分析及其在大肠杆菌中的诱导表达

目的　为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法　采用 377型 DNA自动测序仪对莱姆病螺旋体重组质粒 p BX1的插入片段进行 DNA序列测定 ,并通过计算机软件对其进行限制性内切酶酶谱分析。然后将重组质粒 p BX1在大肠杆菌中进行诱导表达 ,并对其表达产物进行免疫印迹分析。结果　1重组质粒 p BX1插入片段大小为 477bp,其核苷酸序列与文献报道的 p83基因全序列相应区段相比较仅有一个碱基的变异 ,2成功绘制了该插入片段的限制性内切酶酶谱 ;3重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后获得了 2 9kd的融合蛋白 ;4Western- blotting分析表明该融合蛋白能与莱姆病多价抗血清呈强阳性印迹反应。结论　该研究成功地对莱姆病螺旋体 83kd抗原蛋白特异性区段进行了基因重组和表达 ,为进一步研究其在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础。     

氯化锂离心纯化质粒DNA方法的建立及其效果评价

本文建立了一种采用氯化锂离心纯化质粒ＤＮＡ的方法。该法不需要特殊的仪器设备和昂贵的试剂材料，操作简便易行。用此法对ｐＵＣ和ｐＧＥＭ等多种系统的质粒进行了提取纯化。结果表明：纯化的质粒ＤＮＡ无ＲＮＡ、蛋白质和染色质ＤＮＡ污染，其得率与氯化铯超离心法相近；酶切效果良好；可直接用于哺乳动物细胞的基因转移并获得有效表达。     

Construction of a recombinant plasmid harbouring the rhoptry protein 1 gene of Toxoplasma gondii and preliminary observations on DNA immunity

Objective To observe the immune responses elicited in BALB/c mice by a DNA vaccine. A ge ne encoding rhoptry protein 1 (ROP1) from Toxoplasma gondii (T. gondii) was cloned into vector pcDNA3.Methods Amplifyied gene fragments coding for ROP1 from the genomic DNA of T.gondii ZS2 were inserted into cloning vector, pUC18, and sub-cloned into pcDNA3. Mice wer e injected at a dosage of 100 μg recombinant plasmid DNA by intramuscular inje ction and boosted after 2 weeks. pcDNA3 and normal saline were used as control . 30, 50 and 70 days after the second immunization, NK cell activity, T lympho cyte proliferation and sub-clusters and serum IgG antibody were assayed.Results The specific gene fragment coding for ROP1 was amplified and a pcROP1 recombinan t was constructed. At 30 days after immunization, the spleens of the mice were obviously enlarged evidently. NKC activity and the proliferation of spleen T ly mphocytes seen on MTT assay were higher in pcROP1 group than in the controls. T he number of CD4(+) T cells exhibited no obvious increase compared with that of the control, but CD8(+) T cells were obviously increased (P<0.05). At 90 d ays after vaccination, the titer of IgG antibody in the serum of vaccinated mice was positive (1∶100).Conclusion pcROP1 was constructed and it could elicit both cellular and humoral immune r esponses in immunized mice.     

RAB5A正义表达载体对两种人肺腺癌细胞系粘附基底膜成份能力的影响

目的　RAB5A基因过表达与人肺腺癌细胞系Anip 973的高转移性相关 ,进一步确认该基因在人低转移肺腺癌细胞系SPC a1和人低分化肺腺癌细胞系GLC 82中的作用。方法　采用癌细胞粘附基底膜成分的测定方法 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的SPC a1、GLC 82两种肺腺癌细胞系的侵袭能力的改变。结果　RAB5A正义表达载体PcDNA3 .1 RAB5A转染的SPC a1较未转染细胞与基底膜成分粘附能力明显增强 ,t检验P <0 0 1;GLC 82细胞的侵袭能力作用不明显。结论　RAB5A在侵袭转移表型形成中发挥一定的作用     

金银花水煎剂对绿脓杆菌P29株R质粒体内体外消除作用的实验研究

目的 :探讨金银花对绿脓杆菌 R质粒消除作用。方法 :体外试验　金银花水煎剂亚抑菌浓度作用绿脓杆菌 P2 948h后 ,影印培养 ,计数消除子 ;体内试验　建立肠道去污染小鼠动物模型后 ,经口感染绿脓杆菌 ,同时给金银花水煎剂 ,灌胃给药 ,2 mg/只 ,2 4 h后再次给药 ,剂量同上 ,48h后处死小鼠 ,分离培养细菌 ,计数消除子数。消除子经质粒抽提琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 :金银花水煎剂对绿脓杆菌 P2 9株 R质粒体外消除率为 0 ,体内消除率为 8%。结论 :金银花水煎剂对去污染小鼠感染绿脓杆菌 P2 9株 R质粒具有消除作用 ,消除子主要表现对单一抗生素恢复敏感性 ;体外没有消除 R质粒作用。     

伤寒杆菌耐药质粒pRST98与细菌在巨噬细胞内存活关系的研究

目的　研究伤寒杆菌的不相容性C群接合性耐药质粒 pRST98对其宿主菌在巨噬细胞内存活的影响。方法　用标准系列稀释法检测 3株同源染色体伤寒杆菌———含 pRST98的野生型伤寒菌株STpRST98、经SDS人工消除pRST98的突变体菌株ST(R-)及 pRST98重新导入突变体的接合子 pRST98/ST(R-) ,研究它们在BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞M J774A .1内的存活情况。结果　巨噬细胞吞噬后 6 0min内大多数待检菌被杀死 ,但 pRST98宿主菌在巨噬细胞内的活菌数明显高于无此质粒的菌株 (P <0 .0 5 )。结论　pRST98能提高其宿主菌在巨噬细胞内的存活能力。     

细菌接合性耐药质粒与毒力关系的研究

目的　研究伤寒菌接合性耐药质粒ｐＲＳＴ９８ 与宿主菌毒力的关系。方法　用伤寒菌同源染色体的含ｐＲＳＴ９８ 野生株、消除ｐＲＳＴ９８ 菌株及ｐＲＳＴ９８ 重新导入消除菌株后,检测它们在人、兔及豚鼠血清中抵抗力的改变。将ｐＲＳＴ９８ 导入不含质粒的鼠伤寒无毒株ＲＩＡ,比较接合子ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ 与含一毒力质粒的鼠伤寒毒株ＳＲ－ １１ 及ＲＩＡ在体外对Ｈｅｐ－ ２ 、ＣＨＯ 和ＨｅＬａ 细胞的粘附、侵袭能力;经口感染小鼠观察３ 种菌在体内播散、繁殖及引起所在脏器的病理改变,并经腹腔感染测定对小鼠的半数致死量。结果　携带ｐＲＳＴ９８ 的菌株在血清中的抵抗力显著高于无此质粒菌株（ Ｐ＜ ０ ．０５）;ｐＲＳＴ９８ 在体外不影响宿主菌对上述３ 种细胞的粘附、侵袭力,但能使携带该质粒的ｐＲＳＴ９８／ＲＩＡ在小鼠肠系膜淋巴结、脾和肝脏的活菌数显著增加（ Ｐ＜ ０．０５） ,并引起相应的病理变化;腹腔注射小鼠ＬＤ５０ 比ＲＩＡ降低１０００ 倍（Ｐ＜ ０．０１） 。结论　伤寒菌耐药质粒ｐＲＳＴ９８ 具有多效性,不但能编码对药物的抗性,同时还能使宿主菌的毒力增强。     

pSV-VEGF165肌内原位注射促进兔缺血后肢侧支血管形成

目的 为临床探索一种更简便安全的下肢动脉缺血性疾病的基因治疗途径。方法 建立兔后肢缺血动脉模型,将体外构建的重组质粒ｐＳＶ－ＶＥＧＦ１６５注射于缺血肌群,３０ｄ后行动脉造影并切取标本,测定毛细血管密度和毛细血管／肌肉数比值。结果 经ｐＳＶ－ＶＥＧＦ１６５治疗后,缺血肢体毛细血管密度和毛细血管／肌肉数比值显著增加,小腿部位比大腿部位增加明显,动脉造影显示部分缺血肢体侧支动态明显增多。结论 肌肉内原位     

福建省鼠伤寒沙门氏菌病原学特征变迁趋势

目的：了解福建省鼠伤寒沙门氏菌的病原学特征变迁情况。方法：采用噬菌体分型、质粒谱分析及耐药性测定的方法,对福建省１９８０～１９９５年１５年鼠伤寒沙门氏菌的病原学特征进行动态监测。结果：福建省鼠伤寒沙门氏菌的噬菌体流行型别存在明显的变迁与更迭;质粒谱型有逐渐增多且分散趋势;菌株耐药率逐年大幅度上升,耐药谱逐年迅速增宽,多重耐药菌株逐年急剧增多,耐药现象日趋严重。结论：噬菌体分型、质粒谱分析及耐药性测定是监测福建省鼠伤寒沙门氏菌病原学特征变迁趋势的有效方法。