血清胰岛素TRFIA的建立

目的 建立血清胰岛素( Ins)时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA).方法 采用一株Ins-MAb包被于固相微孔板上,另一株Ins-MAb用DTTA- Eu3+标记作为示踪剂采用Victor 1420荧光仪测定,.并对本法进行评价.结果 本法的标准曲线范围...     

时间分辨荧光免疫法测定血清AFP的方法学评价

对时间分辨荧光免疫法(TRFIA)测定血清AFP的方法学予以评价.评价TRFIA法测定AFP的线性范围、灵敏度、精密度、回收率及与ELISA法和RIA法的相关性.结果显示:AFP线性范围1～1000U/mL,检测下限≤0.1 U/mL,批内及批间变异系数分别为2.3%、5.3%,回收率97.85%,与ELISA法及RIA法高度相关,r值分别为0.982与0.991.正常血清AFP参考值0.8～10.5 U/mL.结论:TRFIA测定AFP线性范围宽,稳定性好,灵敏度与准确度高,无放射性污染,是当前免疫分析中有发展前途的一项超微量检测技术.     

时间分辨荧光免疫法与ELISA法检测HBV标志物的比较分析

[目的]对时间分辨荧光免疫法与ELISA法检测HBV标志物进行分析比较。[方法]ELISA法检测HBsAg阳性的血清标本336例，同时用时间分辩荧光免疫分析法进行检测。[结果]336例标本用ELISA法检出的45例大三阳及256例小三阳两种常见模式与TRF法定量检测结果相一致。16例HBsAg、HBcAb阳性的标本TRF检测只有5例与ELISA法相符，其余3例成为小三阳，8例成为大三阳；8例HBsAg、HBeAg阳性的标本TRF法全部为大三阳；5例HBsAg单项阳性的标本用TRF法仅1例仍为单项阳性，其余全为阴性；6例HBsAg、HBsAb阳性的标本用TRF法测定除1例相同外，都变为单项HBsAb阳性。[结论]TRF法是一种灵敏度高，特异性强的定量免疫测定方法。ELISA法检测结果为少见模式时，可用TRF法进行复检，以进一步提高检验结果的准确性。     

国产AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的方法学评价

目的对本所研制的AFP时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒进行方法学评价。方法用精密度、灵敏度、稳定性及回收率等对AFP试剂盒进行方法学評价,并与进口试剂进行比较。结果国产AFP(TRFIA)试剂盒的批内和批间的CV分别为1.87%和7.95%,平均回收率为102.06%,灵敏度为0.43μg/L,同Roche公司Elecsys2010的所测值相关系数为0.7832,同Wallac公司Auto Delfia-1235的所测值相关系数为0.9739,阳性符合率为100%。结论国产AFP(TRFIA)试剂盒具有高精密度、高特异性、高稳定性,同进口试剂比较具有较高相关性,阳性符合率较好,值得临床推广应用。     

双标记AFP及Free-β-HCG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的：研制能同时检测人血清AFP和Free-β-HCG的双标记时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）试剂盒。方法：铕（Eu3＋）标记抗AFP单克隆抗体,用钐（Sm3＋）标记抗Free-β-HCG单克隆抗体,采用双抗体夹心法建立AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂,对试剂的各项性能指标进行评价。结果：AFP分析灵敏度为0.1U/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.2%～5.9%和2.8%～6.3%,检测试剂的测量范围为（0.1～500）U/ml;Free-β-HCG分析灵敏度为0.25ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为1.5%～6.2%和3.5%～5.6%,检测试剂的测量范围为（0.25～200）ng/ml。孕妇血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,AFP和Free-β-HCG的相关系数分别为0.987、0.968,具有较好的一致性。结论：自制AFP/Free-β-HCG双标记TrFIA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

1235全自动时间分辨免疫分析仪的日常使用和保养

本文论述了Wallac1235全自动时间分辨免疫分析仪的日常使用、保养和错误报警的分析及处理方法。     

山西省恙虫病调查与病原学研究

目的：１９９５年山西晋南地区发生恙虫病流行，我们对该地区人群进行了流行病学调查；并对从患者和野鼠体内分离的恙虫病立克次体进行了病原学研究。方法：利用微量间接免疫荧光法（ＭＩＦ）对恙虫病立克次体在人群中的流行进行了调查；采用ＭＩＦ、ＰＣＲ／ＲＦＬＰ和序列分析方法对恙虫病立克次体分离株进行了鉴定。结果和结论：晋南地区人民群血清恙虫病立克次体抗体阳性率为２５％；恙虫病立克次体山西分离株（Ｓｘｈ９５１，Ｓｘｈ９５２，Ｓｘｈ９５３，Ｓｘｍ９７）的血清型别为Ｇｉｌｌｉａｍ株；序列分析提示：在相对分郭质量５６０００蛋白基因水平上，Ｓｘｈ９５１株与Ｙｏｎｇｃｈｏｎ株亲缘关系最近。     

Sm~(3+)标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相抗原和钐标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-钐标记兔抗人IgM抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgM抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgM抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TRFIA检测其血清中的ACA-Ig抗体,计算临床特异度。结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.39%、3.26%和3.94%,批间(n=8)精密度分别为2.92%、3.73%和4.35%;方法的灵敏度为0.1 MPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.956;将1份ACA-IgM抗体强阳性的血清标本从2483 MPL U/L倍比稀释至0.151 MPL U/L,ELISA方法较好的线性范围在4.85-310.4MPL U/L,而TRFIA方法在0.151-2483MPL U/L都有较好的线性。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgM抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

Disease-associated anti-bovine serum albumin antibodies in Type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus are detected by particle concentration fluoroimmunoassay,and not by enzyme linked immunoassay

Summary We recently developed a particle concentration fluoroimmunoassay for the measurement of serum antibodies to bovine serum albumin in patients with Type 1 (insulin-dependent) diabetes mellitus. We observed elevated IgG-anti-bovine serum albumin antibodies in 100% of newly-diagnosed diabetic children and in 2.5% of matched control children. Here we compare the fluoroimmunoassay and the more commonly available enzyme linked immunoassay technique, exchanging coded serum samples from 40 newly-diagnosed diabetic children and 179 control children between two laboratories. Particle concentration fluoroimmunoassay detected elevated IgG-anti-bovine serum albumin antibodies in all diabetic children, enzyme immunoassay in 25% (p <0.0001). Fluoroimmunoassay detected elevated levels in 2.2% and enzyme immunoassay in 10% of control children (p <0.002). Elevated IgA-antibovine serum albumin antibodies in patients were slightly more often detected by fluoroimmunoassay than by enzyme immunoassay, while in control children enzyme immunoassays detected elevated levels three times more often (p <0.01). Values measured in either assay showed overall no correlation in either patient (IgG: r_s = 0.28; IgA: r_s = 0.11) or control sera (IgG: r_s = 0.02; IgA: r_s = -0.05). Fluoroimmunoassay for IgG was 100% disease-sensitive (enzyme immu-noassay: 25%, p <0.0001) and more disease-specific (IgG; p <0.02). Our findings demonstrate that these assay techniques detected distinct subsets of anti-bovine serum albumin antibodies with little (IgG) or some (IgA) overlap. In fluoroimmunoassay procedures, antigen: antibody binding occurs within 1–2 min while hours are allowed in an enzyme immunoassay. Antibodies with high on-off binding rates typical for immune responses following hyperimmunization are therefore measured preferentially by particle concentration fluoroimmunoassay and it is these antibodies which appear to be associated with diabetes. These observations emphasize the need for epidemiological surveys to validate immunoassay procedures used for clinical purposes.