鼠抗人单克隆抗体LH7：2在营养不良型大疱性表皮松解症诊断中的应用

目的 探讨鼠抗人单克隆抗体LH7：2诊断营养不良型大疱性表皮松解症的意义。方法 采用间接免疫荧光法对临床诊断为营养不良型大疱性表皮松解症（DEB）,分别来源于3个不同家系各1名患者,包括2名显性遗传型营养不良型大疱性表皮松解症（dominant DEB,DDEB)和1名隐性遗传型营养不良型大疱性表皮松解症（recessive DEB,RDEB)进行皮肤基底膜带（BMZ）Ⅶ型胶原检测,同时选择单纯型大疱性表皮松解症（EBS）、大疱性类天疱疮及正常人各1名做对照。结果 3名对照BMZ免疫荧光阳性,2名DDEB荧光均减弱,RDEB荧光阴性。结论 鼠抗人单克隆抗体LH7：2诊断营养不良性大疱性表皮松解症有重要意义。     

蛙皮素对PC-3细胞骨架及细胞内游离Ca~(2+)的影响

目的:观察蛙皮素(BBS)对前列腺癌PC-3细胞骨架形态及细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)浓度的影响。方法:①利用免疫荧光法(IH),结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测10-5mol/L浓度BBS处理的PC-3细胞角蛋白(CK)的表达,以反映其对细胞骨架形态的影响;②应用Fluo-3/AM荧光标记技术和LSCM检测不同浓度BBS(10-9、10-7、10-5mol/L)处理的PC-3细胞[Ca2+]i浓度。结果:①10-5mol/L浓度的BBS可促进PC-3细胞CK表达及伪足形成;②BBS可提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度,并具有浓度依赖性。结论:实验证明一定浓度的BBS可明显提高PC-3细胞[Ca2+]i浓度及CK表达,进而影响PC-3细胞骨架形态。本研究为探索BBS应用于肿瘤研究以及BBS作用后细胞内信息传递途径提供了基础。     

TrFIA检测CA242对结直肠癌的临床价值

目的：观察采用时间分辨荧光免疫分析检测的CA242在恶性肿瘤普查、诊断和预后的应用价值。方法：收集我院2004年10月～2006年3月的住院病例。包括恶性肿瘤组共226例,良性病变组共74例,正常组50例。采集患者静脉血,常规离心分离血清进行检测。CA242采用TrFIA,CA242正常值为〈20U／ml。结果：使用TrFIA检测CA242在恶性肿瘤组表达水平较良性病变组与正常对照组的表达水平及阳性例数明显升高,其差别明显,P〈0．05,有统计学意义。CA242与其他肿瘤标记物比较,以CEA的灵敏度（45．21％）和CA242的特异度（92．86％）最高。当CA242与另外一项肿瘤标志物联用时,采用平行联检CA242-CEA诊断的灵敏度（59．57％）最高,而采用系列联检CA242-CAl99和CA242-CA50的特异度可以达到100％。当CA242与其他其二项肿瘤标志物联用时,CA242-CEA-CA50平行联检灵敏度最高达67．74％。三项联合应用时,系列联检特异度都是100％。当CA242与其他三项指标联合时,平行联检在本文所用方法中灵敏度最高（69．23％）,系列联检特异度是100％。结论：采用TrFIA检测糖链抗原CA242对直肠癌等的普查、诊断、预后的判断提供了一定的应用价值。     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法，并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L，线性范围为0．14—120nmol／L，回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测，其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

Dual-label time-resolved fluoroimmunoassay for simultaneous detection of aflatoxin B1 and ochratoxin A

A dual-label time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) for simultaneous quantification of aflatoxin B1 (AFB1) and ochratoxin A (OTA) is described. For this, microtitration wells were coated with AFB1-horse radish peroxidase (HRP) and OTA–bovine serum albumin. The standards and samples were loaded on the coated plates, and diluted antibodies and Eu³⁺- and Sm³⁺-labeled IgG were then added. Our results showed that the sensitivity of TRFIA for AFB1 was 0.02 μg/L (range 0.02–100 μg/L). The intra- and inter-batch coefficient of variation (CV) was 3.2 and 7.3%, respectively, and the average recovery rate was 88.1%. On the other hand, the sensitivity of OTA was 0.05 μg/L (range 0.05–50 μg/L), the intra- and inter-batch CV was 2.9 and 7.9%, respectively, and the average recovery rate was 89.9%. In the AFB1/OTA–TRFIA, AFB1 and OTA did not mutually interfere. The correlation coefficients between the dual-label AFB1/OTA–TRFIA and the single-label AFB1–TRFIA or OTA–TRFIA were 0.972 and 0.981, respectively, indicating that the results were consistent. Our study suggests that AFB1/OTA–TRFIA allows the simultaneous detection of AFB1 and OTA; is a simple, fast, and economic method for screening large quantities of samples, and has good prospects of application.     

层粘连蛋白时间分辨免疫分析方法的建立

采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立高灵敏的层粘连蛋白(LN)的快速的全自动检测方法.以羊抗鼠IgG抗体包被板,采用抗人LN单克隆抗体(McAb)、Eu3 标记人LN和以β-二酮体为主的增强液建立竞争LN-TRFIA,数据采用双对数函数处理程序处理.结果表明LN的标记率为11.5 Eu3 /LN,方法的批内和批间CV分别为3.9%和6.7%,平均回收率为91.2%,灵敏度为5μg/L,可测范围为5～1000μg/L,ED20、ED50和ED80分别为723.1μg/L、183.4μg/L和56.95μg/L.临床结果与RIA结果相符.本文建立的LN-TRFIA灵敏、稳定,可全自动操作,有很好的应用前景.     

TrFIA乙肝病毒PreS1抗原的应用研究

目的:乙型肝炎病毒PreS1抗原时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)的应用.方法:收集120例HBVDNA拷贝数＞103的乙型肝炎患者血清标本,同时应用TrFIA和酶联免疫吸附法(ELISA)对样本中PreS1抗原进行检测.选择荧光值较高的一例PreS1抗原阳性血清标本,倍比稀释至1:16384倍,用TrFIA试剂与ELISA定性试剂盒同时进行PreS1抗原的检测.结果:有9例标本ELISA结果为阴性,而用TrFIA可检测到PreS1抗原,χ2=7.1,P＜0.05,TrFIA方法灵敏度高于ELISA方法.一例PreS1抗原阳性血清标本ELISA在1:2048倍时结果为阴性,而TrFIA在1:8192倍时仍可检出PreS1抗原.TrFIA方法高、中、低三个浓度批内CV分别为3.57%、3.71%、6.74%;批间CV分别为3.54%、4.16%、8.52%均优于ELISA方法.50份正常体检者血清标本(乙肝标志物均阴性)用TrFIA试剂进行PreS1抗原的检测,结果均阴性,特异性100%.结论:TrFIA与ELISA相比,精密度和灵敏度有较大提高.     

NSE时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用夹心法建立神经元特异烯醇化酶（NSE）时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）来测定血清中NSE的含量。以NSE单克隆抗体E1包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3＋及标记NSE单克隆抗体E7,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立NSE-TRFIA,数据采用双对数函数数据处理程序处理。本方法的连续批内和批间CV分别为2.4%和4.8%,平均回收率为102.6%,灵敏度为0.31ng/mL,可测范围为0.31～320ng/mL,ED20、ED50和ED80分别为20.72ng/mL、57.23ng/mL和157.25ng/mL。本方法与AFP、CEA均无交叉反应。Eu3＋标记抗体-20℃保存8个月免疫反应基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定。临床应用检测结果与E170所测值高度相关。实验结果表明,本文所建立的NSE-TRFIA的灵敏度、特异性、准确度等均符合临床应用要求。     

HBeAg时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用平衡饱和法建立了乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)时间分辨荧光免疫分析法.以针对HBeAg的单克隆抗体G8包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记C4单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液.数据采用Log-Logit法函数和四参数Logitc函数数据处理程序处理.结果表明方法的批内和批间CV分别为2.39%和5.28%,平均回收率为97.62%,灵敏度为0.58NCU/mL,可测范围为12.01-529.84NCU/mL,ED20、ED50和ED80分别为6.36NCU/mL、26.85NCU/mL和136.7NCU/mL.本方法与HBsAg有13.1%的交叉反应.Eu3+标记抗体-30℃保存6个月免疫反应性基本无损失,同批试剂连续5个月应用分析结果稳定.HBeAg时间分辨荧光免疫分析的质量参数优于EIA和IRMA.