时间分辨荧光免疫分析仪测量时间稳定性的研究与设计

时间分辨荧光免疫分析仪的测量精度取决于微弱荧光信号的测试精度,而测量时间不稳定将导致测量的荧光信号强度发生波动。针对影响测量时间精度的3个因素（时基信号误差、触发误差、量化误差）,采用TX2108带温度补偿的晶体振荡器作为时基信号源,减小时基信号误差;采用RISC结构的高速单片机及性能稳定的74HC系列外围器件,减小触发误差;采用双游标法使测时分辨力提高3个数量级,减小量化误差。实验表明：在保证同样测量精度的前提下,所需测量次数由1 000次减少到120次。     

盐酸克伦特罗的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

目的采用时间分辨荧光技术建立高灵敏的盐酸克伦特罗(CBL)间接竞争免疫分析法(CBL-TRFIA)。方法以CBL-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗CBL抗体;CBL与卵清蛋白的联结物(CBL-OVA)包被96孔板为固相抗原,与游离CBL共同竞争有限的抗CBL抗体;用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪。结果该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01~25μg/L,平均回收率为99.7%,RSD3.9%,与盐酸异丙肾上腺素的交叉反应率为0.01%,与沙丁胺醇、盐酸肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素无交叉反应。8条不同时间进行的CBL-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L(、1.47±0.11)μg/L和(23.6±0.56)μg/L。尿样经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测CBL,两者的相关系数为0.932,结果相符。结论CBL-TRFIA分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。     

TRFIA检测干血纸片TSH室内质控结果分析

目的:探讨TRFIA法检测干血纸片TSH的质量控制。方法:对1年的质控干血纸片的TSH值进行统计学χ、P50、s、CV、最大值、最小值等指标分析;同时对血斑不同部位的TSH值测定。结果:质控干血纸片TSH测定值的x、P50均在标准值(真值)的±20范围以内,C1、C2的CV值分别在6.6%~11.7%、3.6%~15.5%;血斑取血部位以中心到边缘的1/2处所测TSH值接近真值。结论:TRFIA法筛查新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)干血纸片TSH值精密度高,能有效进行质量监控。     

HBV-M时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的探讨TRFIA检测HBV-M方法的相关性、精密度、准确性和重复性。方法不同浓度的HBV-M标准血清及已知高浓度倍比稀释后的5项标志物混合血清标本用TRFIA法分别作定量检测。结果HBsAg、HBsAb、HBeAg3项测得的相对荧光强度与含量之间相关关系良好rHBsAg=0.9999,rHBsAb=0.9924,rHBeAg=0.9999,P<0.01,均有非常显著相关性;而HBeAb和HBcAb则相对较差,P>0.05;已知浓度5项标志物混合血清标本理论值和实测值的相关关系良好,r值均达到0.9980以上,P<0.01;结果准确度较好。结论HBV-MTRFIA精密度、重复性良好并具有较高的可靠性。     

人促卵泡激素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析(TRF IA)技术建立人血清促卵泡激素(hFSH)的检测试剂。方法采用双抗体夹心法建立hFSH-TRF IA检测试剂,对试剂的各项指标进行评价。结果hFSH-TRF IA检测试剂的测量范围为1~256U/L,灵敏度为0.08 U/L,分析内和分析间的精密度分别为2.6%~4.2%,6.1%~8.6%,与人黄体生成素(hLH)、人促甲状腺素(hTSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)的交叉率分别为0.14%,0.08%和0.01%。30份异常血样用该试剂与进口的同类试剂同时检测,其相关系数为0.993。结论试剂各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

时间分辨荧光法(TRFIA)检测HBV-M的结果分析及应用价值

乙型肝炎是经多种方式传播的重要病毒性传染病，是导致肝硬化、原发性肝癌的重要因素之一。诊断是否感染或曾经感染过乙型肝炎病毒（HBV）主要还是依靠检测乙肝血清标志物HBV-M，HBV-M对乙型肝炎患者诊断、治疗及流行病学调查等方面有重要意义。各实验室对HBV-M的检测方法有很多，以前实验室应用比较多的是EIA等方法，现在主要运用时间分辨荧光（time-resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）法和微粒子酶免疫分析（microparticle enzyme immunoassay，MEIA）对临床血清标本进行HBV-M（HBsAg，抗HBs，HBeAg，抗HBe，抗HBc）的检测，分析结果及讨论其应用价值。     

438例胃疾病患者PGⅠ及PGⅠ/PGⅡ水平的探讨

目的探讨胃镜检查证实有胃疾病的438例患者的胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、PGⅡ及PGⅠ/PGⅡ水平。方法应用时间分辨免疫荧光法分别进行了PGⅠ、PGⅡ检测。结果浅表性胃炎、胃溃疡组326例,PGⅠ符合324例,PGⅠ/PGⅡ符合325例。萎缩性胃炎、胃癌组112例,PGⅠ符合111例,PGⅠ/PGⅡ符合110例,χ2PGⅠ=0.096,P>0.05,χ2 PGⅠ/PGⅡ=2.68,P>0.05,PG结果在性别之间差异无统计学意义(t0.05);疾病的筛查和诊断指标。     

TgAb时间分辨荧光免疫分析间接测定法的建立及临床应用

目的建立甲状腺球蛋白抗体(TgAb)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)间接检测法。方法用Tg抗原包板,用铕(Eu3+)标记兔抗人IgG做标记物,间接法TRFIA检测人血清中的TgAb。结果 TgAb-TRFIA的灵敏度为1.0 IU/ml;批内变异系数(CV)为3.1%～3.6%,批间CV为3.3%～3.6%;平均回收率为101.6%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8945;与临床结果高度相关。结论本法建立的TgAb-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

Flow injection immunoassay for carcinoembryonic antigen combined with time-resolved fluorometric detection

Time-resolved fluorescence has been developed for immunoassay to obtain higher sensitivity than usual immunoassays. In this paper, a simple, sensitive and specific method was developed for immunoassay of serum carcinoembryonic antigen (CEA) by combining time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) and flow injection analysis. Based on a sandwich immunoassay format, a monoclonal antibody immobilized immunoaffinity column inserted in a flow system was used for immunoreactions. The cleaved solution was collected after the reaction between the immunocomplex in the immunoaffinity column and the enhancement solution that was used to cleave the Eu-labels from the immunocomplex, and then detected by time-resolved fluorescence. Serum CEA could be detected in the linear range from 2.5 to 100 ng/ml with a correlation coefficient of 0.997 and the detection limit of 1.0 ng/ml. Twenty human serum samples detected by this method were in good agreement with the results obtained by the electrochemiluminescence immunoassay. This method could be further developed for fast practical clinical detection of serum CEA levels.     

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。