枸杞子粗提物对小鼠T淋巴细胞的免疫增强作用

枸杞子粗提物(简称LBP)5～50mg/kg/天×7天,ip,显著增加正常小鼠的脾重和提高外周血T淋巴细胞百分数。LBP5和10mg/kg对胸腺重量无明显影响,增加剂量到25～50mg/kg可使胸腺重量降低。LBP50～200mg/kg增强~3H-TdR掺入胸腺细胞的数量,在5～100mg/kg时,又可增强由ConA诱导的淋巴细胞增殖反应。在ConA一般浓度(5～40μg/ml)时,LBP25、50和100mg/kg对胸腺淋巴细胞增殖均有增强作用;在高浓度GonA60μg/ml时,大剂量LBP比低剂量对胸腺淋巴细胞增殖反应具有更强的作用。这些结果说明,在适宜剂量范围,LBP可以增强T淋巴细胞的增殖和作为一种免疫增强剂。     

器官移植中免疫排斥机制概述

免疫排斥反应是器官移植成功的主要障碍之一,这种排斥反应存在于固有免疫和适应性免疫系统的相互联系和作用之中,会对移植物产生持续性的损伤.以固有免疫反应的活化为基础,组织和器官缺血再灌注过程中会导致严重的组织损伤,从而激发和扩大了适应性免疫反应.本文主要描述这些损害组织的分子途径、信号转导途径,熟悉排斥反应发生的靶点,从而为免疫抑制剂的发展和临床器官移植提供理论基础.     

Treg分化对放射性肺损伤的影响

目的 探讨调节性T细胞（Treg）的分化对放射性肺损伤的影响及其作用机制。 方法 建立Treg抑制小鼠模型,按随机数字表法将C57BL/6小鼠分成4组：空白对照组、单纯照射组、照射+免疫球蛋白G（IgG）组和照射+CD25组,每组12只,除空白对照组外其余3组小鼠给予单次20 Gy X射线全胸照射,照射+IgG组和照射+CD25组小鼠每周腹腔注射IgG抗体和CD25抗体。分别于照射后第4周和第8周各处死小鼠6只,采用流式细胞术检测小鼠肺组织内CD25+Foxp3+Treg（Foxp3：叉头样转录因子3）的百分比以鉴定模型是否建立成功;采用Western blot法检测单纯照射组小鼠肺组织内神经纤毛蛋白1（NRP1）的表达;采用免疫荧光法检测每组小鼠肺组织内CD25+NRP1+Treg的百分比;拍照并观察每组小鼠皮肤的损伤情况,采用苏木精-伊红染色法检测小鼠肺组织的病理学改变;采用酶联免疫吸附测定法检测每组小鼠肺组织内转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素（IL）-17A、干扰素γ（IFN-γ）、IL-2和IL-4的水平变化。两组间比较采用独立样本t检验。 结果 流式细胞术检测结果显示,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠肺组织内CD25+Foxp3+Treg百分比[（1.73±0.04）%、（2.13±0.15）%]均较空白对照组[（1.14±0.02）%、（1.70±0.06）%] 明显升高,差异均有统计学意义（t=−26.680、−4.545,P=0.000、0.010）,抑制Treg后,第4周和第8周时照射+CD25组小鼠肺组织内CD25+Foxp3+Treg百分比[（0.72±0.14）%、（0.27±0.02）%]均较单纯照射组明显降低,差异均有统计学意义（t=5.296、37.538,均P=0.000）。Western blot结果显示,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠肺组织内NRP1蛋白表达水平均较空白对照组升高,差异均有统计学意义（t=−7.341、−9.127,均P=0.000）。免疫荧光法检测结果显示,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠肺组织内CD25+NRP1+Treg的百分比均较空白对照组升高,而照射+CD25组CD25+NRP1+Treg百分比均较单纯照射组降低,且差异均有统计学意义（t=8.926、14.457,P=0.001、0.000）。观察小鼠皮肤损伤程度后发现,照射后第4周和第8周,单纯照射组小鼠皮肤损伤严重,而照射+CD25组小鼠照射后第4周时皮肤基本完好,第8周时出现脱毛脱皮。病理学结果显示,照射后第4周和第8周,与空白对照组相比,单纯照射组小鼠的肺组织结构破坏,肺泡壁增厚,细胞外基质增多,而照射+CD25组小鼠的肺组织结构完整,肺泡壁纤细。酶联免疫吸附测定结果显示,与空白对照组相比,照射后第4周,单纯照射组小鼠肺组织内IL-17A和IL-4的水平均升高,差异均有统计学意义（t=−8.492、−15.796,P=0.001、0.000）,照射后第8周,TGF-β1和IL-17A水平升高,差异均有统计学意义（t=−11.072、−7.167,P=0.000、0.002）,IL-2水平在第4周和第8周时均降低,IFN-γ水平在第4周时升高,差异有统计学意义（t=−27.393,P=0.000）,第8周时下降;与单纯照射组相比,照射+CD25组小鼠TGF-β1和IL-17A水平在第4周和第8周时均降低（t=6.037、4.524、5.496、4.772,均P=0.000）,IFN-γ水平升高（t=−7.006、−12.565,P=0.002、0.000）,差异均有统计学意义,而IL-2和IL-4水平在第4周时均降低,第8周时均明显升高,差异均有统计学意义（t=2.866、−9.090、8.833、−7.191,均P=0.000）。 结论 放射性肺损伤小鼠的肺组织中出现Treg分化,并增强分泌TGF-β1促炎因子,同时干扰辅助T细胞（Th1、Th2型）细胞因子的平衡来促进放射性肺损伤的发生。     

重症肌无力患者外周血CD4+T细胞OX40的表达及作用机制研究

目的 分析重症肌无力(MG)患者外周血CD4+T细胞协同刺激分子OX40表达及其对FoxP3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的调控作用,初步探讨OX40在MG免疫学发病中的作用机制.方法 以流式细胞技术检测42例MG患者及38名健康对照的外周血OX40+CD4+T细胞、FoxP3+CD4+CD25+Treg表达水平,比较OX40表达在MG患者不同临床疾病状态、Osserman分型、临床绝对评分、胸腺病理类型等情况下的差异,并分析OX40对FoxP3+CD4+CD25+Treg细胞的影响.结果 (1) MG患者外周血OX40+CD4+T细胞占淋巴细胞百分比高于健康对照组(P<0.01).(2)MG患者OX40+CD4+T细胞百分比在发作或加重期高于缓解期(P＜0.05);在临床绝对评分呈中、重度患者OX40+CD4+T细胞百分比高于轻度患者(均P＜0.05);Osserman Ⅱ、Ⅳ型患者OX40+CD4+T细胞百分比高于Ⅰ型患者(均P＜0.05);胸腺增生及胸腺瘤患者OX40+CD4+T细胞百分比高于胸腺正常患者(P＜0.05,P＜0.01).(3)MG患者外周血OX40+CD4+T细胞百分比与FoxP3+CD4+CD25+Treg细胞百分比呈负相关(r=-0.843,P=0.01).结论 协同刺激分子OX40参与MG发病,可能通过抑制FoxP3+CD4+CD25+Treg细胞生成发挥作用.     

Assessment of local cellular immunity in lung cancer by bronchoalveolar lavage

Summary Small cell lung cancer (SCLC) is the most malignant of the pulmonary neoplasms and is associated with a poor local cellular immune response. 16 patients with non small cell lung cancer (NSCLC) and 11 patients with SCLC underwent bronchoalveolar lavage (BAL) in the lung which harbored the tumor in order to investigate the lymphocyte surface antigens utilizing the immunoperoxidase technique. Analysis of blood lymphocytes was performed in parallel. 8 patients with previous sarcoidosis in complete remission who underwent BAL and 10 normal blood donors served as controls.Among blood lymphocytes the CD3⁺, CD4⁺ and CD16⁺ cell populations were elevated significantly and the T4/T8 ratio was elevated in NSCLC patients, but only CD16⁺ were augmented in SCLC. Cell populations expressing the activation markers transferrin (TF) receptor, interleukin-2 (IL-2) receptor and the very late antigen VAL-1 were also increased in NSCLC, while SCLC was associated with antigen distributions similar to controls. No differences between the cohorts were seen in the expression of human leukocyte antigen (HLA)-DR. In BAL the population of CD3⁺ and CD4⁺ cells were reduced in SCLC and the T4/T8 ratio was diminished in contrast to controls and NSCLC patients, whereas these two latter groups did not differ from each other. The distribution pattern of CD16, TF receptor and IL-2 receptor in the study groups resembled that of cells of the blood stream, but CD16⁺ natural killer cells were additionally down regulated to control values in SCLC. No differences were seen in the distribution of VLA-1. HLA-DR⁺ cells were clearly elevated in both cancer groups.In general NSCLC was associated with a shift to higher relative numbers of immunocompetent and activated cells. This was most probably attributable to an immune response to neoplastic growth. This shift was largely lacking in SCLC. The analysis of lymphocytes from the periphery of the target organ emerged as a sensitive tool for the study of cellular immunity in lung cancer and showed many similarities to circulating blood cells. However, the analysis of natural killer cells and HLA-DR suggested a dissection of cellular immune response between blood and lung in pulmonary cancer. A depressive interaction between the tumor and the cellular host immune response may contribute to the exceptional malignancy of SCLC.Abbreviations BAL bronchoalveolar lavage - HLA-DR human leukocyte antigen-DR - IL-2 interleukin-2 - NSCLC non small cell lung cancer - SCLC small cell lung cancer - TF transferrin - VLA-1 very late antigen-1     

手足口病患儿外周血单核细胞亚群的研究

目的：探讨未经治疗和随访1、3、5 d手足口患儿外周血单核细胞亚群的变化。方法流式细胞仪检测104例未经治疗手足口患儿（包括阴性患儿62例,EV71阳性患儿37例,CVA16阳性患儿5例）和随访1、3、5 d的患儿外周血单核细胞CD14highCD16-亚群、CD14highCD16＋亚群和CD14lowCD16＋亚群。结果与健康儿童组相比,手足口患儿CD14highCD16＋单核细胞亚群所占总单核细胞比例明显升高（t =4.092,P ＜0.001）;CD14highCD16-亚群比例明显降低。阴性、EV71型、CVA16型患儿之间CD14highCD16-亚群、CD14highCD16＋亚群和CD14lowCD16＋亚群差异均无统计学意义。结论未经治疗的手足口患儿外周血单核细胞亚群的变化可能与EV71及CVA16病毒的持续感染有关,与病毒种类相关性不明显。     

胃癌细胞-DC融合疫苗T淋巴细胞激活效应的研究

目的 探讨胃癌细胞-树突状细胞（dendritic cell，DC）融合疫苗激活杀伤性T淋巴细胞的效应特点，为胃癌的免疫治疗提供实验基础与理论依据。方法 （1）胃癌患者外周血单个核细胞经GM-CSF，IL-4，TNF-α诱导分化获取成熟DC。（2）SGC7901胃癌细胞-DC经PEG诱导融合、HAT／HT筛选培养，获得纯净融合细胞。（3）混合淋巴细胞反应对融合细胞疫苗激活效应T淋巴细胞的增殖能力进行检测。结果 按上述方法，可获得具备典型特征的DC及纯净的融合细胞。融合疫苗显著刺激T淋巴细胞增殖，与T淋巴细胞在1：1效靶比时刺激能力最强，与对照组比较差异非常显著（P〈0．01）。结论 胃癌细胞-DC融合疫苗具有较亲代DC更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力，可能是其发挥更强抗肿瘤生物学效应的基础。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究

目的 探讨供体抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg),对同种异体复合组织 移植(CTA)受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响.方法 采用免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg,将数 量1×10~6的CD4~+CD25~+Treg输注入CTA受体的大鼠,术后30 d采取外周血,尼龙毛柱分离T、B细 胞,检测在IgM 抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定(CPM)值及血清lgG和IgA水平,判断 CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况,并进行统计学分析.结果 分选的CD4~+CD25~+Treg纯度为95.6%.T、B细胞CPM值:正常对照组分别为2436±358、2418±348,Treg 局部干预组为2273±136、2252±127,Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218,Treg未干预组分 别为3749±245、3720±224;Treg 未干预组与其三组比较差异均有统计学意义(P<0.01).血清IsG、IgA水平:Treg 局部和全身干预组分别为(12.56±1.30)g/L、(2.38±0.21)g/L和(13.48±1.23) g/L、(2.86±0.24)g/L,与正常对照组(12.35±1.28)g/L、(2.36±0.12)g/L比较差异无统计学意 义(P>0.05),三组与Treg未干预组(16.58±1.12)g/L、(3.75±0.37)g/L比较差异有统计学意义 (P<0.01).Treg 局部和全身干预组CTA存活时间分别为(97±13)和(63±lO)d,显著长于Treg未 干预组的(22±8)d(P<0.01).结论 供体抗原特异性CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能有明显的 抑制作用,能诱导CTA免疫耐受,延长其存活时间,且局部应用效果优于全身.     

ⅢB期结肠癌组织中高迁移率族蛋白1的表达及其临床意义

目的探讨ⅢB期结肠癌组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达与淋巴细胞浸润的关系及其临床意义。方法收集1999年1月-2002年5月在中山大学肿瘤防治中心行手术切除的72例ⅢB期结肠癌标本,采用免疫组织化学染色及免疫双染技术分析HMGB1的表达和淋巴细胞浸润情况。收集2009年8-10月接受手术的10例Ⅲ期结肠癌患者的新鲜组织标本,采用流式细胞术分析组织中CD3+、CD45RO+T细胞的比例。分析HMGB1表达水平、表达部位与淋巴细胞浸润的关系及其与患者5年生存率的相关性。以72例ⅢB期结肠癌患者的5年生存率作为因变量,以各项临床特征、结肠癌组织HMGB1表达水平和表达部位、CD3+和CD45RO+T细胞的浸润密度等作为自变量,采用Cox比例风险回归模型筛选影响预后的独立危险因素。结果ⅢB期结肠癌组织间质中可见不同程度CD3+、CD45RO+T细胞浸润,CD3和CD45RO均表达于细胞膜。流式细胞术分析可见,72%的CD45RO+细胞同时表达CD3。ⅢB期结肠癌组织HMGB1的表达率为90.3%(65/72),其中81.5%(53/65)为核型表达(仅表达在细胞核),18.5%(12/65)为核质共表达。核型HMGB1表达者的CD45RO+T细胞浸润密度高于核质共表达者。ⅢB期结肠癌组织中CD45RO+T细胞的浸润密度是影响患者生存的独立危险因素;HMGB1表达强度和表达部位与患者预后无关,但随访24个月以后,HMGB1核型表达者的5年生存率明显高于HMGB1核质共表达者(P<0.001)。结论ⅢB期结肠癌患者出现HMGB1核质共表达时组织中淋巴细胞的浸润减少,患者长期生存率降低,提示HMGB1表达方式可作为反映局部晚期结肠癌患者预后的标志之一。     

HIV-1tat induced apoptosis of T-cells is not mediated by TGF-β

Recent reports have demonstrated that the HIV-1 transactivator protein,tat, induces apoptosis in T-lymphocyte cell lines, as well as in peripheral blood mononuclear cells, and stimulates a cascade of events resulting in up-regulation of the potent immunosuppressive cytokine, transforming growth factor-β (TGF-β). In this study we evaluated the ability of TGF-β to mediatetat induced apoptosis in T-lymphocyte cell lines. T-cells treated exogenously with either TGF-β1 or a combination of tat and pan-specific TGF-β neutralizing antibodies showed little change in the amount of apoptosis. When treated with pan-specific TGF-β neutralizing antibodies, Jurkat cells that stably expresstat protein (Jurkat-tat) showed only a modest decrease in apoptosis, while CEM-TART cells (CEM T-cells expressing both HIV-1tat andrev) demonstrated little change in the amount of apoptosis. In conclusion, we have demonstrated that TGF-β does not play a significant role in mediatingtat induced T-cell apoptosis.