维生素A对脐血树突状细胞分化与成熟及其功能的影响

目的　研究维生素A在体内的代谢活性产物视黄酸 (retinoicacid ,RA)对树突状细胞(dendriticcells ,DC)分化、成熟及功能的影响 ,进一步探索维生素A对免疫功能调节的机理。方法　取健康足月儿脐血 9份分离单个核细胞后 ,进行体外培养诱导DC的同时加入生理浓度的RA ,采用流式细胞仪检测DC的表面分子CD1a、CD83、HLR DR以判断RA对DC分化、成熟的影响 ;混合淋巴反应的强度观测RA对DC抗原递呈功能的作用 ;荧光定量PCR法检测细胞因子IL 12p35、IL 12p4 0、IFN γ(Th1)、IL 4、IL 10 (Th2 )mRNA转录水平 ,分析RA对DC诱导Th细胞分化的影响。结果　培养第 6天RA使DC数量显著下降 (P <0 0 0 1) ,培养第 9天 ,DC总数相仿 ,但RA处理后不成熟DC百分比增高 ,而成熟DC百分比降低 ,差异有显著意义 (P <0 0 0 1) ;DC混合淋巴反应的cpm值降低2 9 4 % (P <0 0 0 1)。细胞因子IL 12、IFN γmRNA下降 ,而IL 4、IL 10的mRNA水平升高 ,差异均具有显著意义。结论　维生素A延迟体外培养的脐血单个核细胞向DC的分化和成熟 ,且降低其混合淋巴细胞反应的能力 ,减少Th1细胞因子的产生而增加Th2细胞因子的产生 ,使免疫反应向Th2方向偏移。     

蛋白酶体抑制剂对T淋巴细胞增殖活化的影响

目的：探讨蛋白酶体（proteasome）抑制剂LAC（lactacystin）和β-LAC（β-lactacystin）对外周血T淋巴细胞增殖、活化的影响。方法： 以植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）作为刺激剂，经流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖（BrdU掺入率），检测CD3+CD25+/CD3+及CD3+CD69+/CD3+细胞比例, 同时用RT-PCR检测蛋白酶体11S调节蛋白PA28及细胞因子IL-2 mRNA的表达。结果： （1）对预先活化的T淋巴细胞，LAC和β-LAC降低 T淋巴细胞BrdU掺入率（P＜0.05）；（2）LAC和β-LAC不影响T淋巴细胞CD69的表达（各时点，P＞0.05），而显著抑制T细胞表面抗原CD25表达（48 h、72 h，P＜0.05）；（3）与对照组相比，LAC和β-LAC明显下调T淋巴细胞PA28、IL-2 mRNA的表达(48 h、72 h，P＜0.05)。结论： LAC和β-LAC能够显著抑制T淋巴细胞增殖，这一效应与其抑制T淋巴细胞表面早期活化抗原CD25表达,下调PA28、IL-2 mRNA的表达有关。     

转染肿瘤总RNA的DC疫苗诱导抗肝癌特异性免疫

目的：探讨转染人肝癌总RNA的树突状细胞(DC) 疫苗体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用。 方法： 采用原发性肝癌（HCC）病人外周血单核细胞（PBMC），在粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4) 刺激下增殖分化为DC细胞；从人肝癌细胞中体外扩增肝癌RNA。以HCCRNA转染DC细胞，并与PBMC混合培养诱导扩增CTL。MTT法测定CTL的杀瘤活性。 结果： 转染HCCRNA 48 h后， DC表面分子CD83、CD86和HLA-DR表达明显增高。转染HepG-2细胞HCCRNA的DC和病人HCCRNA诱导的CTL对HepG-2细胞和病人HCC细胞的杀瘤活性均明显高于正常肝细胞RNA+DC、脂质体+DC、Opti-MEM+DC以及空白对照组；而对胃癌SGC-7901细胞无杀伤活性。 结论： 以肝癌RNA为肿瘤抗原，DC作为疫苗的抗原提呈细胞，体外冲击致敏DCs，能诱导肝癌特异性CTL。本研究为HCC术后复发和转移的防治提供一种可能有效的疫苗治疗方法。     

Mathematical modelling of the spatio-temporal response of cytotoxic T-lymphocytes to a solid tumour.

In this paper a mathematical model describing the growth of a solid tumour in the presence of an immune system response is presented. In particular, attention is focused upon the attack of tumour cells by so-called tumour-infiltrating cytotoxic lymphocytes (TICLs), in a small, multicellular tumour, without necrosis and at some stage prior to (tumour-induced) angiogenesis. At this stage the immune cells and the tumour cells are considered to be in a state of dynamic equilibrium--cancer dormancy--a phenomenon which has been observed in primary tumours, micrometastases and residual disease after ablation of the primary tumour. Nonetheless, the precise biochemical and cellular mechanisms by which TICLs control cancer dormancy are still poorly understood from a biological and immunological point of view. Therefore we focus on the analysis of the spatio-temporal dynamics of tumour cells, immune cells and chemokines in an immunogenic tumour. The lymphocytes are assumed to migrate into the growing solid tumour and interact with the tumour cells in such a way that lymphocyte-tumour cell complexes are formed. These complexes result in either the death of the tumour cells (the normal situation) or the inactivation (sometimes even the death) of the lymphocytes. The migration of the TICLs is determined by a combination of random motility and chemotaxis in response to the presence of chemokines. The resulting system of four nonlinear partial differential equations (TICLs, tumour cells, complexes and chemokines) is analysed and numerical simulations are presented. We consider two different tumour geometries--multi-layered cell growth and multi-cellular spheroid growth. The numerical simulations demonstrate the existence of cell distributions that are quasi-stationary in time and heterogeneous in space. A linear stability analysis of the underlying (spatially homogeneous) ordinary differential equation (ODE) kinetics coupled with a numerical investigation of the ODE system reveals the existence of a stable limit cycle. This is verified further when a subsequent bifurcation analysis is undertaken using a numerical continuation package. These results then explain the complex heterogeneous spatio-temporal dynamics observed in the partial differential equation (PDE) system. Our approach may lead to a deeper understanding of the phenomenon of cancer dormancy and may be helpful in the future development of more effective anti-cancer vaccines.     

活化Th细胞及HBeAg与慢性乙肝肝损伤及纤维化关系的探讨

目的探讨活化Th细胞（CD4^＋HLA-DR^＋）及HBeAg与慢性乙型肝炎肝脏损伤及纤维化的关系。方法检测58例慢性乙型肝炎患者和18例既往感染患者（HBsAg阴性而HBcAb阳性者）CD4^＋抗原和HLA-DR抗原双阳性淋巴细胞,血小板（PLT）数和血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活度,计算AST／PLT比值。结果既往感染患者、HBeAg阴性及阳性慢性乙肝患者活化CD4^＋细胞数量明显低于对照者（P〈0．05）,且呈显著递减（P〈0．05）,HBeAg阴性及阳性者AST,ALT以及AST／PLT值明显高于对照者（p〈0．02）和既往感染者（P〈0．02）,且HBeAg阳性患者明显高于阴性患者（P〈0．05）,此二组活化CD4^＋细胞与ALT,AST和AST／PLT呈明显负相关（P〈0．05）。结论活化Th细胞降低可以作为慢性乙肝患者预测肝脏损伤进展的有用指标,HBeAg可以辅助评价肝损伤和纤维化的发展程度。     

阿托伐他汀对Lewis大鼠实验性自身免疫性心肌炎作用的研究

目的： 探讨阿托伐他汀对实验性自身免疫性心肌炎(EAM）大鼠Th1/Th2偏离的影响及对EAM的治疗价值。方法: 6-8周雄性Lewis大鼠31只，其中8只作为正常对照；23只以猪心肌肌球蛋白免疫制成EAM模型，免疫后随机分为阿托伐他汀大剂量（10 mg·kg^-1·d^-1）组、小剂量（1 mg·kg^-1·d^-1）组和未治疗组，连续用药 21 d。第 21 d，行超声心动图检测；取心肌组织，观察大体及镜下炎症程度；ELISA检测血浆IL-2、IL-4、IL-10及IFN-γ等细胞因子水平,并以IFN-γ/IL-4比值作为Th1/Th2偏离方向指标。结果: 阿托伐他汀使EAM大鼠心室肥厚减轻，LVEDd降低，射血分数增加；心脏重量/体重比值及炎症程度分级显著降低；Th1型细胞因子(IFN-γ, IL-2)水平降低，Th2型细胞因子水平(IL-4, IL-10)升高。3组间TC、TG及HDL-C水平未见明显差异。结论: 阿托伐他汀使Th1/Th2平衡向Th1方向偏离，抑制EAM炎症反应。表明阿托伐他汀的免疫调节效应及在自身免疫病治疗中的应用前景。     

CD4+CD25+调节性T细胞与系统性红斑狼疮病情活动性关系的研究

目的：检测系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋、CD4^＋CD8^＋调节性T细胞亚群，探讨其与疾病活动性、肾脏损伤、血清抗ds-DNA抗体及免疫球蛋白和补体C3含量的关系。方法：采用流式细胞术检测北京协和医院住院和门诊SLE患者（n=37）外周血CD4^＋CD25^＋T、CD4^＋CD8^＋T细胞群比例，以15例RA和15例SS组成自身免疫性疾病对照，30例健康体检者作为正常对照，观察调节性T细胞亚群与SLE患者疾病活动性指标SLEDAI、IgG、C3及血清抗ds-DNA抗体的关系。结果：①疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞群比例显著低于正常对照组（P〈0.01），疾病稳定期和风湿性疾病对照组与正常对照组结果差异无统计学意义。疾病活动期和稳定期SLE患者CD4＋CD8＋T细胞群比例都略高于正常对照组，但未发现结果差异有统计学意义（P〉0.05）。②疾病活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于稳定期患者（P〈0.01）。SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值与SLEDAI、补体C3呈低度相关（r分别为-0.491、0.368，P〈0.05），CD4^＋CD25^＋T细胞数量与SLEDAI呈负相关（r=-0.578，P〈0.05）。③SLE并发肾病组外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例及CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值显著低于非肾病组（P〈0.01；P〈0.05）。同一SLE患者治疗前后CD3^＋CD4^-CD8^-细胞和NK细胞降低，CD4^＋CD25^＋细胞、CD4^＋CD25^＋/CD4^＋值及CD8^＋T细胞增加，但未发现这些结果差异有统计学意义。本次研究未发现NK细胞、CD4^＋CD8＋T细胞、CD4^＋CD25^＋T细胞群比例在ds-DNA＋组与ds-DNA-组之间结果差异有统计学意义。结论：SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞群比例与SLEDAI成负相关，与肾脏的损害也有密切关系，但与血清抗ds-DNA抗体产生的关系不明显。活动期SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞减少，稳定期CD4^＋CD25^＋T细胞比例回升，因此推测CD4^＋CD25^＋T细胞的变化可能是导致疾病发生和病情发展及相关器官（如肾脏）损伤的关键环节之一。     

HBV S基因修饰树突状细胞疫苗诱导特异性CTL反应的探讨

目的分析腺病毒载体介导HBVS基因修饰树突状细胞（DCs）能否诱导抗HBV特异性CTL反应。方法制备携带HBVS基因的重组腺病毒，分别转染外周血诱导培养的DCs，观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达；混合淋巴细胞反应测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力；乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG2 22．1．5靶细胞的杀伤能力。结果腺病毒载体能够高效介导HBVS基因在DCs中表达，且DC细胞形态完整；HBVS基因修饰DCs具有刺激同种异体T细胞增殖能力，同时能诱导抗HBV特异性CTL反应。结论HBVS基因修饰DCs疫苗具有增强抗HBV特异性CTL效应的能力，可能发展为一种新型抗病毒疫苗。     

免疫杀伤细胞治疗对恶性肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 探讨链式激活和诱导的免疫杀伤细胞(CAPRI细胞)治疗对肿瘤患者T淋巴细胞免疫功能的影响.方法 接受CAPRI细胞治疗的滨州医学院附属医院肿瘤内科收治的50例恶性肿瘤患者为研究对象(肿瘤组),同时选择体检健康者30例为对照组,用流式细胞术检测所有患者治疗前后外周血T淋巴细胞CD3+及CD4+、CD8+的百分率,计算CD4+/CD8+比值并进行比较.结果 肿瘤患者治疗前外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+[ (56.40±7.14)％、(30.69±8.01)％、(29.10±7.13)％、1.05 ±0.28]与健康对照组[(66.78±6.05)％、(41.35±5.71)％、(26.08±5.36)％、1.59±0.31]及治疗后13 d[ (59.35±6.31)％、(34.95±7.21)％、(27.95±6.03)％、1.25±0.22]和治疗后25d[(62.36±6.41)％、(37.03±7.62)％、( 25.04±4.53)％、1.46±0.48]比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显降低、CD8+均明显升高(均P＜0.05);治疗后25d与治疗后13d比较,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均明显升高、CD8+均明显降低(均P＜0.05).结论 CAPRI细胞治疗肿瘤,能够纠正CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+失衡状态,能够调节机体T淋巴细胞的免疫功能.     

促炎症细胞因子、T细胞亚群在小儿过敏性紫癜不同病期的变化

目的：探讨促炎症细胞因子（ＩＬ－６１、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α）以及Ｔ细胞亚群在小儿过敏性紫癜发病中的作用。方法：采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测３０例急性期２１例恢复期及２８例健康儿童血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８及ＴＮＦ－α水平,以及外周血Ｔ细胞及其亚群的变化。结果：急性期血清及ＰＢＭＣ上清液ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α水平明显高于恢复期和对照,且以ＩＬ－８、ＴＮＦ