应用bFGF与EGF促进皮肤扩张的临床研究

目的:探索碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)在扩张术中的临床应用方法与效果.方法:27例患者共埋置62个扩张器,随机分为治疗组和对照组,采用自身对照.治疗组在常规扩张的同时于扩张器周围注入bFGF与EGF,对照组仅常规扩张.测量两组扩张率、即时回缩率并进行统计学处理.结果:治疗组的扩张至额定容量的时间、即时回缩率较对照组减少(P＜0.05),扩张率较对照组明显增加(P＜0.01).结论:bFGF与EGF能够促进扩张,降低皮瓣回缩率,提高皮瓣质量,改善治疗效果.     

人卵巢癌微血管内皮细胞对PDGF-BB刺激的反应

目的:探讨人卵巢癌微血管内皮细胞与HUVEC在生物学特性及对血管生成因子刺激反应的差异.方法:分离纯化人卵巢癌微血管内皮细胞,以HUVEC为对照,用PDGF-BB刺激两种内皮细胞,利用免疫细胞化学和RT-PCR技术观察刺激后两种内皮细胞增殖、PCNA及VEGF表达的变化.结果:PDGF-BB(20ng/ml)能促进两种内皮细胞的增殖、PCNA和VEGF的表达,人卵巢癌微血管内皮细胞增殖和PCNA表达增强的幅度弱于HUVEC;而VEGF蛋白及mRNA表达增强的幅度高于HUVEC(P＜0.05).结论:人卵巢癌微血管内皮细胞与HUVEC对PDGF-BB刺激的反应有显著差异,为深入研究卵巢癌血管生成机制和抗血管生成治疗提供了实验模型.     

原发性肝癌患者肝动脉化疗栓塞前后血管内皮生长因子表达水平的研究

目的分析血管内皮生长因子（VEGF）在原发性肝癌（PHC）患者肝动脉化疗栓塞（TACE）前后血清中的表达水平及其意义。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测20例健康人血清中的VEGF表达水平和对32例临床确诊的原发性肝癌病人进行肝动脉化疗栓塞术,分别检测术前1天、术后28天血清VEGF和甲胎蛋白（AFP）的表达水平并分别进行比较、分析。结果 32例PHC患者血清中VEGF表达水平（225.13±120.24）ng/L明显高于健康人群（27.28±22.86）ng/L（P〈0.01）,具有显著性差异,全部病例术前1天、术后28天血清中VEGF平均表达水平分别为（225.13±120.24）ng/L、（160.52±80.57）ng/L（P〈0.05）,具有显著性差异,证实VEGF在肝癌的生长转移和发展中起重要的作用,TACE治疗前后血清VEGF下降变化与术后病灶区碘油沉积情况和/或伴有门静脉癌栓有明显相关性,对肝癌近期治疗疗效具有良好的敏感性,尤其是在AFP阴性病例中其意义尤为显著;能够更直观地反映肿瘤血管的破坏程度和治疗疗效。结论血清VEGF是一项独立于AFP的、能够更好地做为原发性肝癌介入疗效评价标准的指标,能够反映肝癌的进展、转移及预后。     

基于临床病理特征富集初治NSCLC患者EGFR基因突变的相关研究

目的分析初治非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者肺原发灶EGFR（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态与临床病理特征的相关性,为临床EGFR—TKIs（tyrosine kinase inhibitors,TKIs）用药提供依据。方法收集第三军医大学附属大坪医院应用增殖阻遏突变系统（amplification refractory mutation system,ARMs）进行EGFR突变分析253例初治非小细胞肺癌患者的性别、年龄、吸烟史、KPS（Karnofsky performance status,KPS）评分、组织病理类型、TNM临床分期以及伴有脑转移患者的脑转移灶数量、确诊肺癌至诊断脑转移时间（brain metastasis time from diagnosis of lungcancer,BMT）和颅外转移状况等临床病理资料,应用x。检验分析EGFR突变状态与各临床病理特征的关系。结果253例初治NSCLC患者,EGFR基因敏感型突变率42．3％（107／253）,其中EGFR基因第19、21外显子突变比例分别为70．1％（75／107）、39．1％（32／107）,而EGFR基因20外显子TKIs耐药型突变率0．8％（2／253）。女性、无吸烟史、腺癌的肺原发灶EGFR基因敏感型突变率明显高于男性、有吸烟史、非腺癌患者,分别为70．2％（66／94）VS25．8％（41／61）、60．9％（81／133）VS18．1％（19／105）和50．0％（103／206）vs8．5％（4／47）,两者有显著性差异（P〈O．05）。结论初治NSCLC患者肺原发灶存在较高（42．3％）EGFR基因敏感型突变,其中女性、腺癌、无吸烟史NSCLC患者EGFR基因敏感突变显著多见。     

京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响

【目的】研究京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响,并探讨其机制。【方法】培养SD大鼠前列腺成纤维细胞,取对数生长期的细胞随机分成4组：对照组、京尼平苷10mg/L、20mg/L和40mg/L组。不同浓度的京尼平苷孵育大鼠前列腺成纤维细胞48h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白的含量。【结果】与对照组比较,京尼平苷20mg/L和40mg/L可显著抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖（P〈0.01）,促进其凋亡（P〈0.01）,同时减少TGF-β1的分泌和胶原的合成（P〈0.05或P〈0.01）。【结论】京尼平苷可抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖,可能与其减少TGF-β1的分泌和胶原的合成、促进前列腺成纤维细胞的凋亡有关。     

phVEGF165原位转染缺血肌肉后hVEGF及其蛋白的表达

目的：探讨慢性下肢动脉缺血的基因治疗。方法：选用血管内皮生长因子（VEGF）作为治疗基因，通过建立实验兔慢性下肢动脉缺血模型，将构建的人VEGF165cDNA真核表达载体phVEGF165注入缺血肌肉内，采用PT-PCR和原位杂交法测定肌肉hVEGF165基因表达，采用组化和Western印迹法测定其蛋白产生的表达。结果：骨骼肌细胞外源hVEGF165基表达量于注射后1周达到高峰，持续2-3周。蛋白表达于注射后2周达到高峰，维持至注射后4周。结论：骨骼肌细胞能摄取并表达外源性hVEGF165基因，并能进一步合成分泌hVEGF165蛋白。PhVEGF165肌肉直接注射的作用时间有限、范围局限、使用安全性高。     

寒凝血瘀对结肠癌肺转移模型小鼠肺组织VEGF、 MMP-2表达的影响

目的:观察寒凝血瘀状态下Balb/c 小鼠C26 人工血行肺转移组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达.方法:将小鼠随机分为空白对照组、寒凝血瘀组、单纯荷瘤组、复合造模组,分别进行造模,通过免疫组化、Western Blot方法检测肺转移灶中VEGF、MMP-2的表达.结果:复合造模组小鼠基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达高于单纯荷瘤组,差异有统计学意义(P<0.05),复合造模组小鼠血管内皮生长因子(VEGF)表达较单纯荷瘤组小鼠有增高趋势,差异无统计学意义(P>0.05).结论:寒凝血瘀状态可能通过促使结肠癌小鼠肿瘤组织VEGF和MMP-2表达的上调,促使小鼠C26结肠癌血行肺转移,促进疾病进展.     

内皮祖细胞移植对大鼠短暂性大脑中动脉栓塞的治疗作用

目的观察内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)移植在治疗大鼠短暂性大脑中动脉栓塞(transientmiddle cerebral artery occlusion,tMCAO)中的作用,探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在其中的可能作用机制。方法培养、鉴定大鼠骨髓来源EPCs,通过颈内动脉移植到大鼠tMCAO模型。实验动物分为2组:PBS对照组、EPCs移植组,分别观察第1、3、5、7天各项指标。采用HE染色,观察大鼠缺血部位病理变化,采用TUNEL法检测嗅周皮质神经元凋亡情况、免疫组化法检测Caspase-3蛋白表达情况、Western blot检测缺血局部脑组织VEGF表达。结果 EPCs移植后第5天,大鼠缺血嗅周皮质TUNEL阳性细胞数逐渐减少到最低值(54.68±3.12),Caspase-3蛋白表达也逐渐降低最低值(31.24±2.73),对应的局部脑组织VEGF表达则逐渐升高到最高值(0.99±0.03),EPCs移植组各时相点与PBS对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EPCs移植tMCAO大鼠可抑制神经元凋亡,减轻缺血导致的神经损伤,部分作用机制可能是通过旁分泌VEGF降低Caspase-3活性这一途径实现的。     

不同因子致心肌纤维化分子学机制

心肌纤维化不仅是各种心脏病变引发的结果,还是多种心脏病变的诱因。在心肌纤维化发生过程中,涉及多种因子参与,其中主要包括血管紧张素Ⅱ、醛固酮、转化生长因子β、各种炎性因子、氧自由基和结缔组织生长因子等。这些因子通过不同或相同的信号通路途径介导心肌纤维化的发生,详细了解相关机制有助于寻找防治心肌纤维化发生的干预靶点,有利于心脏疾病的一级预防和二级预防。     

P物质对体外培养大鼠成纤维细胞表皮生长因子及其受体基因表达的影响

目的　探讨P物质 (SubstanceP ,SP)作用于离体培养的大鼠肉芽组织成纤维细胞后 ,对其表皮生长因子(EGF)及受体 (EGFR)基因表达的影响。方法　采用大鼠肉芽组织成纤维细胞培养和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,观察SP在不同浓度 ( 1× 10 -9～ 1× 10 -5mol/L)及不同孵育时间 ( 0、3、6、12、2 4h)情况下刺激大鼠成纤维细胞后 ,成纤维细胞EGF、EGFRmRNA表达的改变情况。结果　SP可上调大鼠肉芽组织成纤维细胞EGF、EGFRmRNA表达。其中 ,SP对EGF的量 效曲线呈双相分布 ,最大效应浓度为 1× 10 -7mol/L。但SP仅在高浓度时 ( 1× 10 -6～ 1× 10 -5mol/L)促进EGFR表达。在最大效应浓度 ( 1× 10 -7mol/L ,1× 10 -5mol/L)时 ,SP对大鼠成纤维细胞EGF、EGFRmRNA表达的上调作用分别于孵育细胞后 6、12h达高峰。结论　SP对大鼠肉芽组织成纤维细胞EGF、EGFR基因表达存在直接影响 ,其表现形式与SP的刺激浓度及孵育时间有关。这种影响可能是SP在创伤愈合过程中发挥调控作用的生物学机制之一。